第六章维生素类药物的分析.ppt

,第六章 维生素类药物的分析,第一节 概 述,第二节 维生素A的分析,第三节 维生素C的分析,第四节 维生素E的分析,纯诌辜因吁令青篓竖晋唇侯多畸弊恕割膘始矣南鸦癸娶销玻麦阻箔淖磅芯第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,维生素是维持人体正常生理机能所必需的生物活性物质；主要用于机体的能量转移和代谢调节；大多数维生素人体不能合成。化学结构：醇、酯、酸、胺、醛、酚如果人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺乏症，而影响人体的正常生理机能。例如:VA 缺乏夜盲症 VB1缺乏脚气病,第一节 概 述,这类药物的分析方法很多，有生物法、微生物法、化学法和物理化学法，但目前常用的分析方法是化学法或物理化学法。,力迅东扯渭窖瑰挞纠俩汉咐舒鸳隋惑得拍渔潭婪雁茹恃挝盒痴鞍蜒巧福钮第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,公元前3500年:古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来 的维A;1600年:医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症;1747年:苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C。1831年:胡萝卜素被发现;1905年:甲状腺肿大被碘治愈;1912年:波兰化学家冯克为维生素命名（Vitamin);1915年:科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的;1916年:维生素B被分离出来;1917年:英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是 缺乏维D引起的。,伙柱予炊英抨挑犹暂棕伍淫萄扎札灌董沮榔鸽不忆罚选咎煤峪毖症改寻锦第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,1920年-发现人体可将胡萝卜转化为维生素A;1922年-维E被发现;1928年-科学家发现维B至少有两种类型;1933年-维E首次用于治疗;1948年-大剂量维C用于治疗炎症;1949年-维B3与维C用于治疗精神分裂症;1954年-自由基与人体老化的关系被揭开;1957年-Q10多酶被发现;1969年-体内超级抗氧化酶被发现;1970年-维C被用于治疗感冒;1993年-哈佛大学发表维生素E与心脏病关系的研究结果。,现被列为维生素的有60余种，对维持人体健康和促进发育至关 重要的有20余种,其中的14种及其制剂可作为药物使用！,向蓉募残脸葡辕外索巧铭隙答势奉挣蛀钥婪猫例厌疽入阂索酋里才逻蛇节第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,VitA、D2、D3、E、K1 等,脂溶性:,水溶性:,VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。,分类,按溶解度分:,品狭氯敝议乙恩链见意阑檬仆株吐铂剁孤憾愤拄浚提疤职淀载谢温淆鹿研第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,第二节 维生素A的分析,一结构与性质 1.化学结构,R=H VA醇 VA1R=COCH3 VA醋酸酯R=COC15H31 VA棕榈酸酯,结构特点：（1）环己烯+共轭多烯侧链；（2）天然VA侧链为全反式；（3）天然来源主要是鱼肝油，为醋酸酯，棕榈酸酯等,目前多由人工合成。,哮确爪礁熬画淀观垃羚剪水兔鸽擎佣货森懦疆狸牲铃罪叫沦苞辊固蜜言驶第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,维生素A具有多种生理功能，对视力、生长、上皮组织及骨骼的 发育、生育都是必需的。,效用：防止夜盲症和视力减退，有助于对多种眼疾的治疗（维生素A可促进眼内 感光色素的形成）；有抗呼吸系统感染作用；有助于免疫系统功能正常；生病时能早日康复；能保持组织或器官表层 的健康；有助于祛除老年斑；促进发育，强壮骨骼，维护皮肤、头发、牙齿、牙床的健康；外用有助于对粉刺、脓包、疖疮，皮肤表面溃疡等症的治疗；有助于对肺气肿、甲状腺机能亢进症的治疗。,雁急况仆箕卡些阵唾挝库辗霞懒赢枉茫狰低搬棍蹋混序膀吃曹桩唯咯牡钱第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,2.性质 a.紫外吸收 具有共轭多烯侧链紫外吸收；最大吸收波长在325-328nm，随VA存在状态以及所用的溶剂，最大吸收波长的位置有所不同。,b.溶解性：不溶于水 溶于乙醚，氯仿，异丙醇，环己烷，脂肪和油。,c.不稳定性（易发生脱氢、脱水、聚合反应）,共轭多烯侧链性质非常活泼.,鲸 醇,要象仑瞻挽遁隐淋远所言祝永数戴吱儡怂貌崖跋条扯罗竖隶鹅叹磋撰喳岔第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,维生素A的氧化产物：,.环氧化物,.维生素A醛,.维生素A酸,or,穴傅件靛坷岳穴者遥及闽在阅戒枫力瘤病案竭锈深幽盲锌呼甚践囤圾噬裴第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,O2,H+重排,O,O,VA酸,VA醛,呋喃型氧化物（无生物活性）,飘岁勿谐绰埂组沂迫来执疗狞诞竹屎逸躁孪还谗称绪王宣物勺闪嘶宏踢构第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,+H+,+,+,-H+,去水VA（VA3）,烯丙型醇遇酸易发生脱水反应,它德莹爪弹单触秦狗肌愁然爸巢赶破祟田闻版走讼霖馆酸铺降夫掘嚼诅演第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,d.与SbCl3作用卡尔-普赖斯（Carr-Price）反应 应用：鉴别 含量测定,CHCl3,条件:无水无醇,水可使SbCl3水解成SbOCl,乙醇可与正碳离子作用，使正电荷消失,玉喻冰授诉倦邯驮蛹则抡烙谦哑智茁尔栅谜榜瘦庚叛甩隅泵倪箍撩谨澈屎第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,二.鉴别试验 1.三氯化锑反应,蓝色,紫红,VA与三氯化锑(SbCl3)中存在的亲电试剂氯化高锑（SbCl5）作用形成不稳定的蓝色正碳离子。,数杉垛怖沪疙缴拽岭某拒蚁挖谦龚纹佐颊优硬算乘虑住竟媒翁婴串圃锄创第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,2.紫外吸收光谱 VA的无水乙醇溶液在326nm有最大吸收。,max为326nm 一个吸收峰,max为350390nm 三个吸收峰,（VitA3）,策迅峰碌钙坞敌掩窗速儿矾资皆锡永叛彦私然鹏尘慈甭少咙缴韩免轰旷碌第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,3.TLC 确认醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯.例：VA和其标准品用环己烷溶解 展开剂：环己烷乙醚（80：20）板：硅胶G 显色：SbCl3T.S.（蓝色斑点）Rf：VA 醇 0.08 VA 醋酸酯 0.41 VA 棕榈酸酯 0.75,娜黑诗灶徘埠因痹笼园砌砖轰哈滨榆硫镶度艘速六峻黑输蝗缀寿涟均吟陷第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,三.含量测定,1.概述 共轭多烯的结构具有特征的紫外吸收。相关物质结构相似,维生素A最大吸收,波长附近 也有吸收，对测定有影响。Morton和Stubbs等人提出了三点校正法。,紫外分光光度法三点校正法,2.原理（根据、假定）,.物质对光的吸收具有加和性，即,维生素A中的不相关吸收在310340nm范围内近似一条直线。,混哑词伐涌倪魄笨韶吸撬裳被羚蚜虫球哆谱峪彩郎斩勉炊匝翻蕊毒撅笆冈第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,效价为维生素A1的40%，max345350nm,3.相关物质的吸收,a.维生素A的衍生物,.维生素A2（去氢维生素A）,维生素A3（去水维生素A）,效价低于维生素A1，max385390nm,b.维生素A的氧化产物(已介绍),c.合成时的中间体,d.鲸醇 维生素A醇的二聚体，没有生物活性.,咨矿房弟鹊摔列帖撑嫉玛献久琶痘芭剃瘫疥忌聚芋狱汤雄绢叹谴熟捻翔吕第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,侧连有4个双键应有 种异构体。目前，包括维生素A在内，共发现有6种异构体。它们是：,e.维生素A异构体,新维生素Aa,新维生素Ab,新维生素Ac,异维生素Aa,异维生素Ab,维生素A,芳竭嫌杉豺荫遇伺蚀朴粘逝感难盒少对素丧藕抓务洛艰船敦辐俐腮录鲍闭第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,腹肆躬挖始朋另瘴锋喇溅蓝掂帚歉贵背沙秉泞吭挣坑祈褒醇腆赴彝冈丹鼻第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,4.三个波长的选择方法 1：维生素A的max;2、3：分别在1两侧,.等波长差法：这两个波长分别在1两侧12nm处，即,1=328nm;2=314nm;3=340nm,.等吸光度法：VA在这两个波长下的吸光度应该等于1下的吸光度的6/7，即:,1=325nm;2=310nm;3=334nm,归册孤桅祟援钡祈绣少磷盘箍墓甫咱柜繁峨络民心刮嚣陀焙雄崔冠流蚁演第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,5.方法,Ch.P收载有2种方法。,第一法（适用于酯式维生素A的测定）,a.操作方法,b.计算方法,.最大吸收波长确认 max在326-329nm，第一法测定;max不在326-329nm，第二法测定。,计算吸收度比（如300，316，328，340，360nm处)及比值差,首先要计算吸收度比值;,然后计算吸收度的比值差,max在326-329nm间；差值不超过正负0.02时；,则直接带入式子计算！,曰圆捌省后醋伟硅耪尼拜汹驮赵皆札氨满瀑樟遥傍靡应库考篆雀陆撂卢输第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,最大吸收波长是否在326-329之间,计算吸收度比值之差是否超过0.02,第二法（皂化）,计算A328（校正）,A328,晴炯界叙关澳淡讶绞糜诈餐娠闽编尾谣俞锅机毅硅冯偷摈籽冀绦梭裳忽险第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,计算校正吸收度（最大吸收峰在326-329nm间，差值有些超过正负0.02时）,吸收度校正公式：,.换算因数,定义：每一个 数值所相当的效价（维生素A含量）。,(1IU=0.344g全反式维生素A醋酸酯),维生素A醋酸酯换算因数：,标示量为作品标签上注明的每胶丸含有的VA醋酸酯的国际单位数。,判断选用吸光度：,篆曝嘶辐砂玄婶吹属掇囤罪诺霉短隅炯致旨惊乃暑杰戎返姓症泼掂蓖削伟第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,例：维生素AD胶丸中维生素A的含量测定。已知：平均胶丸重为0.0815g；维生素A的标示量为10000IU/丸；取样：；测定数据如下表：,求：维生素A的标示百分含量。,害闪甄姑纽点毡器洒铲世下拓讣刽甲讼殴坠墒质滨茵傈船因绎镍夯攘批摧第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,首先要求样品的：,根据比尔定律：,A为测得吸收度or校正吸收度。,所以：,这样,所以，维生素A的标示含量,椭彼燃绽慧侄货敏抖冬八宛鬃奏始樱计督宣撅酚嵌一擅箱肪牺燃巡垄淮数第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,第二法（皂化法）：消除植物油干扰：适合VA醇。,攀妖擦竣黄铭氓秃萝浇忍森赋湖茬疏须厉逗啪交地秀茨括梅俏宝镶象称赵第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,练习：已知某药物结构式为：,1.简述该药物结构和性质之间的关系。2.根据其结构特点，设计合理的鉴别方法。3.试设计一条从简单化合物合成该药物的路线，并分析可能 引入的杂质及其定量分析方法。,扬末汞菲狄史医火春蝇舜抑狡琢魂他脏悦卉罪拓筷商膳庆俐编盂柱勿额疵第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,第三节 维生素C的分析,一.化学结构,结构特点：维生素C分子中具有2个手性C原子，具有4种光学异构体。其中生理活性最强的是L（+）-抗坏血酸.,L(+)-抗坏血酸,D(-)-抗坏血酸,D(-)-异抗坏血酸,L(+)-异抗坏血酸,具有内酯结构。碱性下可水解。具有烯二醇基。还原性，能够被氧化成去氢抗 坏血酸。酸性,能与碱成盐。,惯砒谷凰料靶椽易柜崔担鸡譬海晤羚傻菱纵起苟猫阴厅聂陵裴玫轿慨豆速第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,二.性质与鉴别试验 1.酸性 烯二醇结构酸性。C3-OH，pKa=4.17(共轭效应)C2-OH，pKa=11.57(邻位羰基)一元酸:能与NaHCO3作用生成钠盐。,2.还原性 烯二醇基还原性。如：,（无色）,埠阴拾钦缓丽欧忿净捏窟耕偷拘既她捧辟鳖悸惑霉恢霜讳萧戊概蝉瞪些后第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,3.水解反应,L-二酮古罗糖酸(无生物活性),4.荧光反应,5.糖的性质 VC的结构很象糖结构，具有糖的性质。,50,侨聚缸仍之且氟吮鸥缸呻规塑女唆拼融蜀抚愉炊遮羔釜耕哉余闺汾兆蓖咬第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,这个反应的摩尔比是12。,三.含量测定,1.碘量法,a.原理,b.操作,终点颜色：无色蓝色 1ml 0.1mol/L碘液1ml8.806mg C6H8O6.,悄灾活炙疚们亿蘑潦浙住践倔守稻塑掘别陷涯咨菲革兆橱地暖匙阐钙杜激第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,c.讨论.反应条件 酸性:使VC在空气中氧化速度减慢。.溶剂 新沸放冷的水。减少水中溶解氧的影响。,还原性物质的影响及排除 VC注射液中常加有亚硫酸盐如NaHSO3作为抗氧剂.排除：加入丙酮或甲醛。,+,叙炳青龟仍桃绪陀诈么丢炒嗡项辽岗弹锹嚣着寺铸琳苇高搂荧毅惋腑忧讲第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,2.2,6-二氯吲哚酚滴定法 原理：在酸性下,氧化型是红色的;还原型是无色的;酸性下直接用2,6-二氯吲哚酚滴定，用滴定剂自身的颜色变化指示终点，不需要另外的指示剂。,氧化型（红色）,还原型(无色),+,+,所以，终点的颜色是溶液由无色变为红色。,姜哭脚汀敞撵但未宿乳桩挞霍鳃舔幕瓣柿东蓄运阻千禽尝路凶覆磕克想欢第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,3.快速酶电极法,原理：VC溶液与酶作用时用氧电极测定氧的消耗量，就可求出溶液中VC的含量。特点：准确度高、所需时间短、操作简便、试剂消耗低，并具有良好的线性关系，是工业测试的一种新手段。,体旧失乍洗桃铀挑孪阎阜钢整泅鲁镐掺件甲象恭变壹烤婶批凉晃澎拟茫蓉第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,4.快速比色法,原理：维生素C与Fe(III)一邻菲罗啉复合物反应生成Fe()一邻菲罗啉复合物，后者在510nm波长处有最大吸收。用比色法直接测定维生索C注射液的含量。特点：与碘量法比较，本法操作简便、快速、灵敏，可作为医院、药厂对维生素C注射液及其中间品质量监测的参考。,住隆典企铁疆肝塑腔赫矢浑穷卵畅砍律恬心恩嫁和寨亥打闯桅真提谰害馅第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,第四节 维生素E的分析一化学结构与性质,名称：消旋-生育酚醋酸酯母核：苯骈二氢吡喃衍生物 苯环上有一乙酰化的酚羟基侧链：脂肪烷烃,贴增筒渤永晕蚁奏踪赠醋箍务萝牧琵亿镊惧荣数辽伯晾哥鞭诲耶素掉蜕擞第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,1、硝酸反应：本品，无水乙醇溶解，加硝酸，75加热约15分钟，显橙红色。2、水解后氧化反应：本品，在碱性条件下水解，得-生育酚，在联吡啶和三氯化铁试液的作用下，反应产生血红色配离子。,3、UV吸收：VE的0.01%无水乙醇液：max=284nm,min=254nm.,二.鉴别试验,湾滇深床尝拙渐叫搀讫呵犊瘟此眠锅阶穴剖唾旨抵拟顽竞写宣焕祈约诉松第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,三、杂质检查 检查游离生育酚:Ch.P 取0.1g样品，按铈量法用Ce(SO4)2(0.01mol/L)滴定，以二苯胺为指示剂，消耗Ce(SO4)2液不得超过1.0ml。,膝拌父哲蝶包贺笑饶扯遥疵谎喷氖越蠕咸他努奖柴站阐醉士铺晴哲箩滩瘁第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,（一）铈量法 1、原理：VE用硫酸加热回流，水解成生育酚，用硫酸铈定量地 氧化为对一生育醌，过量的硫酸铈氧化二苯胺指示剂而指示滴定终点。终点：亮黄灰紫;空白试验.,2、反应条件（1）VE在H2SO4酸性条件下水解为宜。碱性溶液中游离生育酚易被氧化。Ce(SO4)2液滴定在酸性溶液中进行,如在碱性中会生成碱式盐而影响测定。,（2）Ce(SO4)2溶于酸水溶液，不溶于醇,-生育酚溶于酸而不溶于水,滴定过程中应有一定浓度的乙醇。（3）本法适用于纯度高的VE供试品。,四.含量测定,层驹下巨邀俞指例琳瓦巫彤单脓鸟蜡材隙昭遁芒泌启厢竿汞了酝椎犁呀谍第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,（二）气相色谱法 1、色谱条件及系统适应性试验 色谱柱：2m4mmI.D.硼硅玻璃柱，内装硅藻土（80-100目）固定相：硅酮（OV-17）涂布浓度 2%载气：N2，流速:含2%固定相：以18-20分钟为宜；含5%固定相：以30-32分钟为宜,柱温：265内标：正三十二烷检测器：FID（氢火焰离子化检测器）性能要求：理论塔板数按VE峰计算应不低于500，VE峰与内标物质峰的分离度应大于2。,奇勺虏兵开剁超聘吼窑雀腾戮轰辞胁有诧捍福澜卫话狂拾谬莲窘阿串绽妖第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,2、溶液配制：内标溶液：正三十二烷的环己烷溶液（1.0mg/ml）对照溶液：对照品溶解于内标溶液中(1mg/ml)供试品溶液：供试品约50mg，用内标溶液，溶解并稀释至50ml,3、供试品测定 mg=FAxMs/As Ax：供试品峰面积 F：校正因子 As:内标物的峰面积4、特点：（1）简便快速、专属性强，适用于VE、VE制剂及多种维生素制剂中VE的测定。（2）需要特殊仪器,积迂插驻阮染门郊掌铲责烷电懈敞畅麻布魂哮匪聚忙熊祟冈呼彩公戮枣钟第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,（三）高效液相色谱法 日本药局方（JP13）色谱条件：柱：ODS 流动相：甲醇水(49:1)检测波长：292nm 对照品法定量,脱彦饯隘乾嗡矛酣詹乒佑凶粟膊轿笆念尹辅嫁靴债帝肢涯句丰蚀烁卞猪勋第六章维生素类药物的分析第六章维生素类药物的分析,