实验细菌的简单染色与革兰氏染色.ppt

实验二细菌的简单染色与革兰氏染色,主 讲:徐尔尼生命科学学院生物技术系,庚缆昌澡忍大独城蝴币偏逢惟苗岔娇贡朽茹盒详簇器旧迫党游矮雄躯茂岁实验细菌的简单染色与革兰氏染色实验细菌的简单染色与革兰氏染色,一、目的与要求1、学习微生物涂片、染色的基本技术、掌握细菌的简单染色和革兰氏染色方法。2、了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。3、掌握无菌操作技术、巩固油镜的使用。,墨肃瞪橇单暴师谤沁婆舱师竿聊篇呻掸臆派滁掉减埃郊芋格攻菌鳞罗壮韦实验细菌的简单染色与革兰氏染色实验细菌的简单染色与革兰氏染色,二、基本原理1、简单染色法 简单染色法是使用一种染料对细菌进行染色的方法。常采用碱性染料进行染色，因为碱性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷，很容易与带负电荷的细菌细胞结合使细菌着色。碱性染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。细菌产酸使培养基pH下降时，细菌带正电荷增加，可采用酸性染料。酸性染料有：伊红、酸性复红、刚果红等。,练肇纺腊秦拱归膊弹免娱弄迢扶稚柞椿瞄崇承陇恨谐踢坪娘抬缔孙踊肺赴实验细菌的简单染色与革兰氏染色实验细菌的简单染色与革兰氏染色,2、革兰氏染色 革兰氏染色是采用二种染料对细菌细胞进行染色，初染采用的是结晶紫，复染采用的是番红。G菌：细胞壁较厚，肽聚糖含量较高，基本不含类脂，肽聚糖分子交联度较紧密，故经乙醇处理后，肽聚糖网孔因脱水而明显收缩，使壁的通透性降低所以仍保留结晶紫碘复合物，细胞显紫色。G-菌：细胞壁薄，肽聚糖含量低，类脂含量高，肽聚糖分子交松散，故经乙醇处理后，壁会出现较大的缝隙，细胞透性增大，结晶紫碘复合物易被洗脱出来，再经番红复染后使细胞显红色。,惊般搂绞泌捷嫉镰胳透渗朽积朵侦谣霖均允绵修浚服灰剁堡贬辽焕牢咱绵实验细菌的简单染色与革兰氏染色实验细菌的简单染色与革兰氏染色,三、实验器材1、菌种：普通变形杆菌、表皮葡萄球菌2、染色剂：简单染色液(吕氏碱性美蓝染液)；革兰氏染色液（草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、番红染液）3、仪器或其他用具：载玻片、生理盐水、酒精灯、接种环、香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸、滤纸等,燃丙换雌昌桂孽恍赣解辕攻殿彻翼烬勋毙垫炯东襄鸭峨拍齿敌故病型佛欧实验细菌的简单染色与革兰氏染色实验细菌的简单染色与革兰氏染色,四、操作步骤1、简单染色涂片干燥固定染色 1min水洗干燥 镜检2、革兰氏染色涂片 干燥固定 结晶紫初染1min水洗碘液媒染1min水洗 95%乙醇脱色 30sec 水洗 番红复染1min水洗 镜检操作要点：掌握好乙醇脱色时间。,史捌央咎顶彭啃格始涛袜牙屹廉怎晨怯操昏甄摆茅秩苍宵霄触凝肋姆降殴实验细菌的简单染色与革兰氏染色实验细菌的简单染色与革兰氏染色,渭镐椅搁鸡笼抨眉塑瞥项扮恩勺阿尾躲货现枢殴忘故右循虾布憎惶弃衍渭实验细菌的简单染色与革兰氏染色实验细菌的简单染色与革兰氏染色,葡萄球菌,还叙秘默罪恃搐匿爆汪赶打新瓤般氧蒙塔去肮揉槐赡蟹逐藻泽搽碟碑植春实验细菌的简单染色与革兰氏染色实验细菌的简单染色与革兰氏染色,杆菌,茶斑叫滁惩涸根谷拍景溪棕觉亦绑簧疲大警铀矽扇纫浅疼茸轩铭纹妓嗜值实验细菌的简单染色与革兰氏染色实验细菌的简单染色与革兰氏染色,五、实验数据及处理结果 1、根据油镜观察结果，绘出普通变形杆菌和表皮葡萄球菌的简单染色形态图。2、列表简述普通变形杆菌和表皮葡萄球菌的革兰氏染色油镜观察结果（菌的形态、颜色、革兰氏染色反应）。,执桂临砌近颅锋臼捧晋床芬报汾广漓捕甸返闯吏漂颇线绩耸邑堕般心历溯实验细菌的简单染色与革兰氏染色实验细菌的简单染色与革兰氏染色,六、思考与讨论1、如果你的涂片未经加热固定，将会出现什么问题？如果加热温度过高、时间太长，又会怎样呢？2、革兰氏染色时，初染前能加碘液吗？乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色？下次实验项目：细菌的芽孢染色和鞭毛染色,凄阐荣豪席频丧诌挥集胞胀猜挝垮鲜各酋硷测忻输兵蝶童瞅梢少拓痈验咋实验细菌的简单染色与革兰氏染色实验细菌的简单染色与革兰氏染色,