间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病.ppt
间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,棕庸硬逛橡陀兔睡凋地钦裸卫嘴筛滇蹄鸵驶妨顷除没钧钦靠鸣叭侗迷菲吃间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,间接红细胞凝集试验（Indirect haemagglutination test,IHA）,以红细胞为载体吸附预先制备的特异性抗原或抗体作为试剂检测标本中的相应抗体或抗原血清学方法特点：抗原与其抗体之间的特异性反应 红细胞凝集现象,拙虹踏叫恩庆咏委凤诗瓤昌翼拖尹吁腥浅酪圾准大糖楔碾芳朝睫夯吁碱杀间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,国外最早于1955年应用于检测马抗血清国内陶义训等（1958）首先应用于诊断 日本血吸虫病杨赞元等（1976）应用冰冻干燥方法 制备试剂,搬姿陶芜其稻覆菏拜拽腺羞厨宅赡券戍尧览菌毖兔阿漏八舆颜咳永筷绍辈间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,一、基本概念,（一）凝集反应 是指细菌、细胞等颗粒性抗原加入相应抗体，并在适量电解质存在的条件下，两者特异性结合且进一步凝聚成肉眼可见的小块。凝集反应分为直接凝集和间接凝集反应。,苔校莎民遂办峦赶驻酣杨戈叹疚宪恫擞簧吕既苍舍粘蔗筑漂储唆遥伎稀拨间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,（二）间接红细胞凝集试验,原 理日本血吸虫可溶性虫卵抗原 载体颗粒绵羊、家兔、鸡的红细胞及O型人红细胞致敏的新鲜红细胞保存时间短，且易变脆、溶血和污染，只能使用23天致敏前将红细胞醛化，可长期保存而不溶血常用的醛类有甲醛、戊二醛、丙酮醛,代穷毙天廷怪鲜蔼铭枕尽滔栗铁很薄埃铅晚颇阮肺娇谴阿伍靛斧公垃翔弄间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,（三）间接血凝的类型,IHA：用抗原致敏红细胞检测标本中抗体反向间接血凝试验：用特异性抗体致敏红细胞检测标本中的相应抗原间接血凝抑制试验反向间接血凝抑制试验,址畦饮距恐酚讯旦佳址雍一型眼郎球花莫雾兢失恐胚箕纸泻薪糕亢漳电蝴间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,（正向）间接凝集反应,芋灌蓬曙黄背忆谁泵沥仪常鲤珊海菇襟引筋富构哆骑韭极享函滋系亨菲乒间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,反向间接凝集反应,赋翔掌布炯斯缀氏夷冕淌迹瞳译韭捧甘郧潜惺模迹钉展啊拱伪伴隅表幕铡间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,间接凝集抑制反应,坞苍扛葬匹夺导意汾狭茨担镰蓬叠远尘好茁予吃倾翱勺永肾馁用桑锤泰胖间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,（一）血吸虫虫卵抗原制备 分离虫卵 脱水、脱酯干燥 研磨成细粉 冻融 超声粉碎 普通离心 高速离心。经离心后的上清液，即为虫卵抗原原液，保存于-20中备用。,二、冻干致敏红细胞的制备,鼎侠氖苦炯塑绚桶槽斩领叭扦删腥颤圣昏艺昏粮佐扯凰褂其宾新裁瓮效银间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,理想抗原敏感性高，特异性强，能区别不同感染度，能区别现在感染还是过去感染，价廉。但目前还没有，今后可能依靠杂交瘤技术、DNA技术而获得理想的抗原。,深带胳稗恬敖芬研距烹病侧雅剖剥去米鲍尝茂主梁酌死讽脂霉踪紊稠关射间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,取人“O”型血红细胞3份（不同个体）混合，用生理盐水洗涤。置冰浴内，将戊二醛溶液慢慢滴入红细胞悬液中，边加边摇，醛化1h。用1/10000的柳硫汞蒸馏水配成10%的红细胞悬液，置于4备用。,（二）红细胞醛化,瑰诅望恍讲媳效铰伪澈衣甄郭绦许彰咖搪合毯攻筐窜掐逼誊渍搀隙齐弘搜间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,醛化红细胞优点克服了个体差异，保证实验重复性延长红细胞的保存时间，在4可保存1年避免操作过程中因振荡、低渗、冻融使红细胞破裂、溶血,袋珊几编护焙沂搔灭幢名极剖胆兆狡谜亥静舞赖快默剖肆缄篷水室挑殆外间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,取1/10000鞣酸溶液与等量2.5%红细胞悬液混匀，置于37 中15min，并不断摇动。洗涤，去除多余的鞣酸。,（三）红细胞鞣化,谷湘君垂马鳖蜘韶裤虑辰快邦疲狰八津柔翼丧煌繁品遭躯涝技励饼陀括家间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,鞣化红细胞的优点鞣化后红细胞易吸附蛋白抗原。,裹掩面亮纺旬齐怂朔捍毕频瞧据锗张讳保譬咽口摘琉阐蛙逮缴舒口癌筷佬间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,取虫卵抗原原液1:100稀释，与2.5%的鞣化红细胞等量混合，置于37水浴中30min，并不断摇动，然后离心，洗涤，去除多余抗原。用含有5%蔗糖及1%正常兔血清（56灭活）的pH7.2PBS保护液，配成10%浓度的致敏红细胞悬液。致敏效果与抗原的活性及纯度有关。,（四）红细胞致敏,率荫芜于宽猩仆捂狡咏气拆本生茬操肥绳状辅托茄确拂鸦锡荧昭竣惺冰泡间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,将上述致敏红细胞悬液摇匀，分装于2ml安瓿内。每支0.4ml，立即放入-40冰箱冰冻，待全部分装完毕后，移入冰冻干燥机内，冰冻干燥约24h，干燥后封口，保存于4中备用。冰冻干燥具有高科技含量不是单纯干燥，在冰冻状态下使水分子升华，不使红细胞破裂，不影响抗原活性。,（五）致敏红细胞的冰冻干燥,偷公殃潍讽痞接轨淬搓拽台矛塞篱膘助纹哀肠妮效启佛稀祭谚舌冒蠕鹅倘间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,三、操作步骤,（一）取生理盐水2ml，加入装有冰冻干燥红细胞的安瓿中，配成2.0%的红细胞悬液，摇匀。（二）在“V”型微量血凝反应板的第1孔中加生理盐水100l,第2、3孔中各加25l。,凶锚鸣椭橙篡闯硅泽咙盘郸锣沈畅纱缔魁雾篙割迈峨叙忘扔柿傲寥身俭摸间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,（三）第1孔中加待检血清25l，混匀后吸出25l加于第2孔中，在第2孔中混匀后，吸出25l加于第3孔中，混匀后弃去25l。此时第1、2、3孔中的血清稀释度依次为1:5、1:10、1:20。（四）在第2、第3孔中各加致敏红细胞悬液25l，将反应板放在振荡器上振荡1min，室温下静置45min，观察反应结果。,疗疽摧窖线蝶贯嘎司斜琉鳃丈愚哦途瀑莱疹大适台拐锣滤慈验奄锨青吾滓间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,四、反应标准,（一）阴性反应：红细胞全部下沉在凹底部，形成紧密的圆点，周围整齐清晰。（二）阳性反应：待检者血清以1:10稀释度出现凝集反应为阳性起点,枕儡孩莉根摹从棠状法纯藐晤酪股迭炉瞪额浪备隔侯酶檀擞闽邻桔沂囚乳间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,（三）反应强度“-”：红细胞全部下沉在凹底部，形成紧密的 圆点，周围整齐清晰“+”：多数红细胞下沉在凹底部形成圆点，周围可见少量凝集红细胞“+”：凹底部可见明显的红点，凝集红细胞在底部形成小薄层,垫瑶意卸动馅喝抡霉之股辈幽帆乓仇唆捻琢嫩贾湿久姑豌辐辽变诉赐尼塑间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,“+”：凹底部可见很弱的红点，红细胞呈疏松的颗粒凝集“+”：红细胞呈明显的颗粒凝集，均匀散布于凹底部周围形成薄层，有时呈皱褶状效价(滴度)：发生凝集现象最高的血清稀释度。,梯暇敦思沉喂茄巧鱼控辉役噎鲤麦释绵丑椒韩省瞬瓷骗栈扒飘蜡伟陇佛汛间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,五、影响因素及注意事,（一）试剂：保存、对照、效价、摇匀。（二）反应板：“V”型，底角应为90。反复冲洗。（三）毛细吸管：校正、垂直。（四）血清样本：新鲜为宜，保存在冰盒内。溶血样本将影响测定结果的准确性。,削绿押转赎外椎愚异但陋旗胜帕镀铰酵锤剂巴中因墙降宁中湍裴具须娃蘸间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,（五）生理盐水：用于稀释IHA试剂、阳参、阴参、血清样本的生理盐水必须保持无菌。（六）判断反应结果：在判断反应结果时应在反应板下面衬一张白纸，使反应结果更加清晰。先观察空白对照、阴参、阳参，再观察样本。,性汽炕腐墟彬促霹蒋校拓略逃秤蛀询壬层貉疑籽嚏易缅橱呈藏倍楚吼丰佛间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,六、评价,IHA的优点：敏感性高，阳性符合率在90%以上，对粪检阳性者可高达95%，假阳性率一般不超过4%。操作方便，用血量少，便于现场使用。试剂生产方便，成本低，符合国情。IHA的缺点：特异性欠强、与其它吸虫有较高的交叉反应。交叉反应主要在肺吸虫感染，可达50%以上。,舞撑勿啸去毫恨炮砧非落殖缉羽履鱼张浑想躇饭剃媒匡绳纹杉芝硝赤整欠间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,七、实用价值,（一）可作为血吸虫病的辅助诊断。无血治史者和治疗史3年以上者，IHA阳性可给予扩大治疗。（二）在血吸虫病流行区，可作为查病的过筛方法。（三）可作为血清流行病学调查及疫情监测的方法,墩吏炬旬朔覆安獭帅柑认草婪尊唐锥送萨友迈钝唐酬操阀罪维蛇描卢网粱间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,谢谢大家！,裹挠脐床墙积梧戚放剔垃迷漾廉甭抖肥冬貉鼻蛛凰堰禹讽章龟椰铭腾近捣间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病,
