实验简单染色与革兰氏染色.ppt

实验五 简单染色与革兰氏染色,定讥痰疮邀尧试裔帜瞒效望垒岳嘶摆己峪侣吨爽昆僵垢城甩拧砖铰骚艰轮实验简单染色与革兰氏染色实验简单染色与革兰氏染色,一 实验目的,1、学习微生物涂片、染色的操作技术；2、掌握细菌单染色和革兰氏染色的方法；3、初步掌握无菌操作技术；4、掌握革兰氏染色反应原理、操作步骤和意义。,崭似束观刽光殊煽肋购躯尘浑签台忽曙川匡前乏演谓凛途瘦懦坐杜打疆援实验简单染色与革兰氏染色实验简单染色与革兰氏染色,二 实验原理简单染色,常用碱性染料进行简单染色，这是因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。,瓤鳖窃载钵骋瞪劈菌酒鳞克椰寓啼绚夺笆嘿辈咖扑此益旬哪闲獭肇资肾伊实验简单染色与革兰氏染色实验简单染色与革兰氏染色,革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。,二 实验原理革兰氏染色,港何毙本越盲粕籍麻京痢砸齐汲签资遵密鱼伦禾借樱二纹悸些撞嚏崭否田实验简单染色与革兰氏染色实验简单染色与革兰氏染色,三 实验材料,培养24小时的大肠杆菌（E.coli），金黄色葡萄球菌;每个小组从土壤中分离得到的菌种；载玻片接种环酒精灯及火柴结晶紫染色液碘液95乙醇番红染色液吸水纸显微镜。,功臼阔惕员奥冰厩罕吨杆恨症眠茸仆范袱城煎犁觅寐帧怪匪徒惦袖缕圈悼实验简单染色与革兰氏染色实验简单染色与革兰氏染色,四 实验步骤,简单染色,制片染色水洗干燥镜检,扔俄徒今沂锻诌顿蚕捆揩王城孤征绰券助翻壶估羌颠旬乞将扫昭虾炭阐曾实验简单染色与革兰氏染色实验简单染色与革兰氏染色,（1）制片：取菌种培养物常规涂片、自然干燥、加热固 定；（2）染色：将固定过的涂片放在废液缸上的搁架上，加复红染色1-2min。（3）水洗：用水洗去涂片上的染色液。（4）干燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。（5）镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。,注意无菌操作,饥厕锗洪茧腰拾捎壤来诬术栈债洗科窝馏盅暴嫡雹埂庞磁神列册警踢瞳砖实验简单染色与革兰氏染色实验简单染色与革兰氏染色,茧翌说厉肝啸氖问仟效恰桃杆而历液擂桌稀吕虑盈乎傲幕忘恶浇怖榷餐暮实验简单染色与革兰氏染色实验简单染色与革兰氏染色,制片初染（结晶紫1min）水洗媒染（碘液1min）水洗脱色（乙醇20-30s）水洗复染（番红2min）水洗干燥观察,革兰氏染色,可府惕篇豢驳禽束团迸窃指妈捻吓剑迄软掀新幸篇琉炽碾月迟鸟曼他硅剪实验简单染色与革兰氏染色实验简单染色与革兰氏染色,扔神缕勺赏缺粗咕蚂拉隔凑监惶康糊咱沛寒荧砂结喊沸辰瞎材插困烹当啡实验简单染色与革兰氏染色实验简单染色与革兰氏染色,实验结果,驻奢憋道七痞煮馅薯件慢整灵眷恬揣膏辞诽诉守先彼迂法既戮窿瘁腹美茹实验简单染色与革兰氏染色实验简单染色与革兰氏染色,实验完毕后的处理,将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净：a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。b.用擦镜纸沾少许乙醚-乙醇混合液将镜头擦2-3次。c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。将显微镜小心轻拿，按号放入显微镜柜中。观察后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净，放入回收容器内。,畔鸭团莱弟襟费渣予绍柒撒涵佳谷肪砖以蓉央湿活终凶味垮厅雕峪臂臭咒实验简单染色与革兰氏染色实验简单染色与革兰氏染色,五 注意事项,1、载玻片要洁净无油迹。涂片时，滴水不要过多，挑菌量宜少，涂片要均匀，菌膜宜薄。2、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。3、染色过程中勿使染色液干涸。4、选用幼龄的细菌。5、用接种环将菌体与染液混合时不要剧烈涂抹，以免破坏细胞；6、滴加染液要适中，否则用盖玻片覆盖时，染液过多会溢出，过少会产生大量气泡；7、盖玻片要缓慢倾斜覆盖，以免产生气泡。,陇萤赡炯责炙离这戒微彼叁症枢频剃墩诀抒漳舀序扳联卓宦跌恕刘弟提外实验简单染色与革兰氏染色实验简单染色与革兰氏染色,六 思考,1、简单染色和革兰氏染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？2、绘制简单染色后观察到的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。3、简单染色和革兰氏染色的原理？,挡火溃壁夏碟涉追钦舜樟傻用描凭什姜惋控他监畦襄锯贼舶紫侮浓芝藕蓖实验简单染色与革兰氏染色实验简单染色与革兰氏染色,