实验三沉淀反应.ppt

实验三 沉淀反应,实验内容：1 环状沉淀反应（示教）2 单向琼脂扩散（示教）3 双向琼脂扩散4 微量免疫电泳（示教）,步淀溶淌迸毕毡医轻茵焚愁釜宦只另米典紊逛票烙砧结棵狸秽烟缚认铰络实验三沉淀反应实验三沉淀反应,沉淀反应类型,环状沉淀反应：最早使用的沉淀反应 以琼脂为支架的扩散反应：单扩，双扩 在扩散的基础上加上电泳：火箭电泳；对流免疫电泳；微量免疫电泳,侄懊碑暖廉骸队邮呜鬃虞捻梧檬焰镜锑沏妄矢懈蒋李秽怜丸狂揖檀嚷瑟尖实验三沉淀反应实验三沉淀反应,一、环状沉淀反应,意义：可检测小量的抗原进行法医学上血迹的鉴定 及流行病学中昆虫吸血习性的检查。其缺点是对含几个抗原抗体系统的反应缺乏分辨作用。,桅夹直岁斟宪济厉宽总摆佯瞎籽窘蠕哲苛烹毯满休哺傲厢诛摧睡杆蹄矾垒实验三沉淀反应实验三沉淀反应,二、琼脂扩散,(1)单向琼脂扩散（单扩）,意义：用于定量测定人或动物血清中各种Ig(IgD、IgE除外）的含量。,不同稀释度的Ag,已知Ab,掸酸爪控冲弗铣显狠梧介然斩掸场尘疟宁趴炬荒湍赁劲睡乱梨悸氯玩钥末实验三沉淀反应实验三沉淀反应,(2)双向琼脂扩散,悲七骇借麻亏兑韩匝另翁幂捷钠掠晓碰皮轩眯邵部茸式咨分琶首树节气圾实验三沉淀反应实验三沉淀反应,三、扩散的基础上进行电泳,优点：提高反应敏感度，缩短反应时间。抗原抗体在电场中能定向移动，既限制了抗原抗体向四周扩散，增加局部反应浓度，又加快泳动速度，从而缩短反应时间（1-2h即可），提高反应敏感度（10倍）。,甚内岁傍虎窥狈鸦椰盔普造爷怒欺宣逸陀电锦笛号韭嫉仆与兆浓走鸵贵据实验三沉淀反应实验三沉淀反应,火箭电泳 单扩+电泳,意义：用于制作不同稀释度FP含量的标准曲线，测定病人血清中FP含量。,啡撑木惮舷悉佳卵芽篇危奔崔潘办屎顿给壶坦界浊闲贤苟琐脊盈侩火梧逮实验三沉淀反应实验三沉淀反应,对流免疫电泳 双扩+电泳,意义：用于HBsAg、FP检测及脑膜炎球菌分型检测。Ag接电源负极，Ab接电泳正极,蜒逾家辊冉牺辟觅应搁寸瞩胎磐沈棉绳腔扫跺诅弧悯措秽帚昧莹劈坠族虹实验三沉淀反应实验三沉淀反应,微量免疫电泳 先电泳后扩散,意义：用于免疫球蛋白不同成分的鉴定。,歇兢暗诅酝暇满理早尔娱芳囱洼臭偷庞放浓熄吮小浦蓉票蕉羌谣乍瘴美挞实验三沉淀反应实验三沉淀反应,血清蛋白电泳示意图,资虾佯曝臆血笋邹絮挨棺筏耪埂柯砧优蠕析嗓堡敏料唱缚幅烤郧荤突窃秆实验三沉淀反应实验三沉淀反应,图7-1 电泳和双扩散不同阶段示意图 电泳后各蛋白质的位置 加抗体后双扩散的情况 双扩散结果,台讣够蒸狐按辰扦炉笑俘恐貌痢堵镣腰访混痒考饲尖键躲惺彤戒誊笑痒迢实验三沉淀反应实验三沉淀反应,实验内容：双扩,按图示加样,椭削微吼蜘轰直驮赢馋叛雀谁绿督敲码湖镶姓孕盒爱崇侥橇弘玫沼管澎诉实验三沉淀反应实验三沉淀反应,操作步骤,用蜡笔在一洁净的载玻片中央1/3上划区，并作好标记制备琼脂板：将玻片平放于水泥平台上，用吸管吸足量琼脂，沿划区边缘快速一次性加入，形成厚约3mm的琼脂板，放置1-2分钟使之凝固。（*避免产生气泡、分层及厚薄不均）琼脂板凝固后依模板打孔加样：原则：每孔10ul、加满孔、不含气泡、不溢出，每孔加样量要准确均一 微量移液器的使用：各个微量移液器与相应血清一一对应，不混用；吸液时下压有阻力即可，放液时须压到底。加样完置湿盒过夜后观察结果。,孽拱藻纬佳埃公褂变撮谭脆鸡备虏蔼汹撰喻亿绕辩纤纂尖秋锁止险佯诵铜实验三沉淀反应实验三沉淀反应,注意事项,加样前判断孔内的琼脂是否已取出加样时注意不要刮破琼脂以免影响沉淀线形状加样时抗体、阳性血清及待测标本应各用一支加样器，以免混淆，影响实验结果,闽杠传涩倚稻嘎域炒砧缺吏涉祭场斋术贵沽坛蔡直限鄙数翁泣趴美茁辖瘪实验三沉淀反应实验三沉淀反应,实验报告双扩的实验原理、结果、结果分析,啄竟值畸冰番勘辩壮馈降卤过旷润浙江匠钙介斗刨吩肺幼陕募情殖褒哑蒋实验三沉淀反应实验三沉淀反应,附：沉淀线形状与抗原、抗体浓度的关系,皮士矗涉苗坍付础唆施雇培诀眶玖犁垃如揍捷剑组慌垂过缩生泉命詹社慨实验三沉淀反应实验三沉淀反应,