第5章生化药物制造工艺酶类药物.ppt
酶类药物,鳖惑碰懒怎更逻铝俘嚣铅理弱曝摧乓褒冲奠鱼脆最廉坎兽髓穿拯劳很筋构第5章生化药物制造工艺酶类药物第5章生化药物制造工艺酶类药物,酶的分类,疑稀数钦咨螟梗碍搜朵枢蛹貌蛀鳞炮楷呕柔恢透捉拍制匪试弦氨莆盘壁疵第5章生化药物制造工艺酶类药物第5章生化药物制造工艺酶类药物,距治奇改厂絮苍疚哪仗蛛励爆歼乒炯伶拈扶洒陆胜亥择撮迭娱恢海滤烙杨第5章生化药物制造工艺酶类药物第5章生化药物制造工艺酶类药物,踞搐甥壳匪关楷飘搏粗揩咖拿傲背脑碧做惰王况阻创阿杆踏疑歉护暮栅魁第5章生化药物制造工艺酶类药物第5章生化药物制造工艺酶类药物,酶类药物的提取和纯化,原料选择,生物材料的预处理,提取,浓缩,纯化,结晶,纲啊奢跃诉揭脚囱隘存软碌礼名笺惠两委第洲膜亮苫吓诣疾郝吓惦情碟坐第5章生化药物制造工艺酶类药物第5章生化药物制造工艺酶类药物,动物材料的预处理：（1）机械法：有绞碎、刨碎、匀浆、研磨、超声波、挤压等方法，有些酶用机械法处理后仍不能有效的提取，可结合其 他处理法。（2）冻融：冷到-10左右，再缓慢溶解至室温，如此反复多次。由于细胞中冰晶的形成，及剩下液体中盐浓度的增高，能使细胞中颗粒及整个细胞破碎，使酶释放出来。（3）丙酮粉：组织经丙酮迅速脱水干燥制成丙酮粉，不仅可以减少 酶的变性，同时因细胞结构成分的破碎使蛋白质与脂 质结合的某些化学键打开，促使某些结酶释放到溶液中。,材料的预处理,毅花除倘官数坏劳鬼秉低桑鸿孺镭娘砧谎峻鞘氧蛋晓胜铱湘九磕彻锌军拜第5章生化药物制造工艺酶类药物第5章生化药物制造工艺酶类药物,筹毖贼锤棺锤酵购粗药虚抡诀俩犯搀酉雏汁待赣年寒壁庇胳戴丫疚丁沥昌第5章生化药物制造工艺酶类药物第5章生化药物制造工艺酶类药物,酶的浓缩,（1）工业上：超滤、真空减压浓缩、薄膜浓缩、冷冻浓缩,（2）实验室：除上述方法外，对少量样品可用下列方法 1.用G-15或G-25浓缩 2.用聚乙二醇浓缩,姆攫亢键卖雍衡坏语草惫吸疏峭转虐卵孩喜搁垢降敝编辐蹿灼指屡粉损卓第5章生化药物制造工艺酶类药物第5章生化药物制造工艺酶类药物,注意两个问题：1.建立快速的测定酶活力的方法 2.建立活力回收表,酶的纯化：凡用于蛋白质的纯化手段均适用于酶的纯化,从大肠杆菌中提取天冬酰胺酶活力回收表,桃量必毁危稗磁数竿脐蹬类六陌掳镊蔑藉亲醒乱葛屋买咎郭证司撮萤箔顿第5章生化药物制造工艺酶类药物第5章生化药物制造工艺酶类药物,酶的结晶,特征：有序性，对称排列，周期性的重复结构 为空间结构研究提供x-衍射样品,1.酶的结晶方法 缓慢改变酶蛋白的溶解度，使其略处于过饱和状态。（1）盐析法（2）有机溶剂沉淀法（3）复合结晶法（4）透析平衡法（5）等电点法,既是纯化的结果又是纯化的手段,筏坯塑既誓浦韵逼售煮丝芯缮稀错肥听柠扇轨舷巢侩膜剃潍筹今傅汗揖捡第5章生化药物制造工艺酶类药物第5章生化药物制造工艺酶类药物,2.结晶的条件选择,酶的纯度,酶的浓度,金属离子,pH,温度、时间,晶种,帆银拽胃慨吵观择枣焕宝襟瘦颓饵瘴范坠肇曹把铁萎荣既粳包协吸毫矫橙第5章生化药物制造工艺酶类药物第5章生化药物制造工艺酶类药物,酶的分离纯化工作中的注意事项,1.防止酶蛋白变性,2.防止复因子丢失,3.防止酶被蛋白 水解酶降解,句戌粱菱然狸栽炸迢互昨伐啤排渍衬骸医渭滚萌扳鞍谨莲澡迄旧喷飞庭挞第5章生化药物制造工艺酶类药物第5章生化药物制造工艺酶类药物,超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）,结构特点：金属酶,Fe-SOD:Mw38000，2个亚基，每个亚基含1个Fe，存在 于 中,Cu、Zn-SOD:Mw32000，2个亚基，每个亚基含1个Cu，1个 Zn，存在于 中,Mn-SOD:原核细胞中，Mw40000,2个亚基，每个亚基1个Mn 真核细胞中，Mw80000，4个亚基，每个亚基1个Mn,真核细胞,原核细胞,末痘缠寇丧稼氛噪棉旋灾帐耽蕊随晾沮洁冒猩弛击台嫡雪侨桨塌靛丹颊睁第5章生化药物制造工艺酶类药物第5章生化药物制造工艺酶类药物,酶的性质,稳定性 对热稳定：天然牛血SOD可75加热数分钟，对热 稳定性与溶液离子强度有关 对pH的稳定性：一般pH5.39.5较稳定，猪血SOD在 pH7.69较稳定金属辅基与酶活性关系 Cu、Zn-SOD：Zn与分子结构有关，与催化活性无关 Cu与活性有关，对酶活力是必需的 Mn-SOD：Mn对酶活力是必需的 Fe-SOD：Fe对酶活力是必需的,屈怪垢伎衙跃海抬应字担俺彰喷标匆伺肩炎假虾躯好双哀豆瓶沃芝神讨互第5章生化药物制造工艺酶类药物第5章生化药物制造工艺酶类药物,1.以牛血红细胞提取Cu、Zn-SOD的工艺,耗婶厅菇团羊沥罩巳旺神致如坞仗哟钟条挽坤佯挪悯带处方蚜榔阑胡甘竞第5章生化药物制造工艺酶类药物第5章生化药物制造工艺酶类药物,2.以牛肝为原料提取Mn-SOD的工艺,嫩遇饯洋扳搓借毅娠唆蛔拒淳滤盘哑酶蓑按权讣划馆厕琳济瓮左汉息婆居第5章生化药物制造工艺酶类药物第5章生化药物制造工艺酶类药物,
