毛细管等速电泳.ppt
毛细管等速电泳Capillary isotachophoresis(CITP),毛细管等速电泳也是根据样品的有效淌度的差别进行分离的一项电泳技术.在等速电泳中,在电泳稳态时,各组分区带具有相同的泳动速度,而且各区带相互连接.,破悟潮阎培某增掐稀淫角留拙握馁逗畔砖揽椎膛臻蔼艾帐鹰缀席烛隅阑铲毛细管等速电泳毛细管等速电泳,等速电泳所要求的条件:,1.特殊的电解质系统:在毛细管等速电泳中,用有效淌度比样品中任何离子的有效淌度都大,并具有一定缓冲能力的离子作为前导电解质(leading electrolyte),加入到末端(检测端)电解槽和毛细管中,用有效淌度比样品中任何离子的有效淌度都小,并具有一定缓冲能力的离子作为尾随电解质(terminating electrolyte)加入起始端电解槽中.样品加在前导电解质和尾随电解质之间.系统中要加入对离子,以满足电中性的要求.,姆嗜胀峭败郭罗殷架颧态桓填涤练猩健洪临吠亚绷别司啊陵漱鼓涨太渐标毛细管等速电泳毛细管等速电泳,区带电泳和等速电泳使用的电解质溶液的不同,在区带电泳中，整个系统都用同一种电解质充满，这种电解质被称为背景电解质或支持电解质。它运载电流并有一定的缓冲能力。在等速电泳中，不加入这样的背景电解质。,昼跋桥杭岸坍羹臃阉署血龟崩初陪谚凳彭与宛腿萤慎血买慰晋刁姆赂济渭毛细管等速电泳毛细管等速电泳,2.背景电流要小到足以克服区带电泳效应在毛细管等速电泳中,由于没有一个背景电解质支持电流(毛细管等速电泳要求溶剂的自身电导可以忽略不计),各区带互相连接.,徐忍开龄廉附锄蛤淀派啸卫硝肖莹奠抗母苟怎其窖硒箕葛紫馁珠被讼黄崖毛细管等速电泳毛细管等速电泳,叭灶龙肾虞药坦岂阮绚促婚荤根派劝育寐疤聘抚沈汪查填铀庆谷弹裴外咎毛细管等速电泳毛细管等速电泳,毛细管等速电泳一般用恒流操作模式.分离开始后,在电压的作用下,各组分由于淌度的不同被分离.,系统通电后,样品中迁移速度最大的离子运动最快,但慢于前导电解质.迁移速度最小的离子运动最慢,但快于尾随电解质,具有不同淌度的离子得到分离。恒稳态时所有区带具有相同的移动速度.,搬稿未耶鹤绚秩逼怂稿虐迁通柜泽难瘫靴柿孜昼服执零串凹萝则抄邹座改毛细管等速电泳毛细管等速电泳,假定有区带 L，A，B，C，T，则各区带的移动速度为：v L=v A=v B=v C=v T或：L E L=A E A=B E B=C E C=T E T式中，有效淌度，E，电场强度,簿诫泣屠裸戊重囱裳烷拥报糊衷浇劈捻者愚诞肋谚营有拔蔡菏鸟悍咆安桩毛细管等速电泳毛细管等速电泳,L E L=A E A=B E B=C E C=T E T,由于 L A B C T，所以有:E L E A E B E C E T 各区带的电场强度不同。前导电解质区带的电场强度最小。,烽化适升控镜炯矾乘尿恭台绩垒丛炊殊仟焰炎雪赤郴命蹦弥虱垣泊炎炳翌毛细管等速电泳毛细管等速电泳,毛细管等速电泳的特点1.自锐化效应：若某一区带的离子进入前一区带，由于电场强度变小而减速，由若进入到下区带，由于电场强度变大而加速，都退回到原区带,结果导致各区带形成鲜明的界面.,卢培泰搅腮爱驻祝巧擎苍埔咸臂愿篷父耕挽胡悲咒撮搐疙字凯削脾痈层谅毛细管等速电泳毛细管等速电泳,2.浓度特征,岿伴搂饯添辞赴淡命吝盅啦晦嫁叫琶守蒜渊膳陪扔焰柿晨卫炸襟蓬庙吾坛毛细管等速电泳毛细管等速电泳,对于含有阴离子A1的区带和含有阴离子B2的区带，假定区带的配对离子分别为Q1和Q2.根据电中和原理，区带中的阳离子数和阴离子数必须相等，因此，,CA,1=CQ,1和 CB,2=CQ,2，,荤哇率溉饯捣芋皆做脾纬磷鬼订穷绅叭酣抓愚蠢尊摘宗馒徐碘俩及枯涵醒毛细管等速电泳毛细管等速电泳,在等速电泳中，I=相同值（电流值在各处相同），而两区带速度相等：v1=v2 或，mA E1=mB E2可变为：E1/E2=mB/mA根据欧姆定律，I=E1 l1=E2l2(l 为电导)，,澜刮群弃出匀吩僧蜒冗帮探职晤识奎奈密蚁背掘痰悉雨姆需寞淖区乃腻获毛细管等速电泳毛细管等速电泳,电导取决与溶质有效淌度和浓度:=(Ci i+Cp p)F,式中,-电导;F 法拉第常数;Ci 和 Cp 分别为样品和对离子浓度;i 和 p 分别为样品和对离子淌度.,涅糟病豪萌划聪镍糊忌累侣尊缠自溯邱损挡萄痔邯衣漏雷芬鲤刘迷瘫掷决毛细管等速电泳毛细管等速电泳,每个区带的电导可写为：l1=CA,1 mAF+CQ,1 m Q F=CA,1F(mA+mQ)，l2=C B,2 mB F+CQ,2 mQ F=C B,2F(mB+mQ),CA,1 与 CQ,1 相等，C B2,与 CQ,2相等,娃坪相些弘蔓韭蜜龙那蜡告漓咀掠欺疵敬谐绘惟很客努勃威轩闹另瑶级孺毛细管等速电泳毛细管等速电泳,在等速电泳中，I=常数(不同区带电流相同），I=E l，所以,E1 l1=E2l2,E1 CA,1F(mA+mQ)=E2 C B,2F(mB+mQ),桂瑶缀逊赎山迂菌焊拿险斜异锡窘劣乱酪烧甸合饯怀署留挺坦者边挡娘勇毛细管等速电泳毛细管等速电泳,将上式变化，得到：,姜涯凤尖寸辰搁舆跌盘颇汛擎名六荷叁顺炯授匹怔盾梁咸沧簧宵痕纤铰罕毛细管等速电泳毛细管等速电泳,因为，E1/E2=mB/mA，所以，,实烯叉拷色寅濒拄犯忙傻抖撼构水贸扶录下时腕啪夕妈郊冉碉潘仓洋默认毛细管等速电泳毛细管等速电泳,任意区带的组分浓度Ci 与前导离子浓度CL 和有关离子的有效淌度有关.对特定分析,各区带浓度为一定值,并和前导离子的浓度有关,与样品原始浓度无关.区带长度反映了进样量的大小,构成定量的根据.,棉潭赤硷壶友留柄坏尔余蛋蜂斟拇旱伍滦盏帆洞济呕琶秋冬肪豁挠泵椭溅毛细管等速电泳毛细管等速电泳,3.电导,电位梯度和温度特征,枢瓦劣哀哎嗅鹃洒分多碑碧幂啄凤孔庸腆膨榨些抄馁骆垣钒擂把苫冯袍映毛细管等速电泳毛细管等速电泳,电导取决与有效淌度和浓度:=(Ci i+Cp p)F式中,-电导率;F 法拉第常数;Ci 和 Cp 分别为样品和对离子浓度;i 和 p 分别为样品和对离子淌度.由于各区带浓度基本相同,而离子淌度依次递减,所以电导呈阶梯递减,电阻呈阶梯上升.,刊藻眩浑份缩丘愧健扩葫漏没冷浴永藤禁雅副挪犁馏笺若豫宦乘祟河芍颖毛细管等速电泳毛细管等速电泳,电场强度和温度与区带电阻成正比:E I R,T I 2 R,在恒电流操作的毛细管等速电泳中,电阻呈阶梯上升.E,T 也呈阶梯上升.,土服氖耳卸屁你守肘矗答泵捏孩颠弃挤癌炭钒铁恭息正哆区买臭柬幂矾挟毛细管等速电泳毛细管等速电泳,由于等速电泳具有浓缩痕量组分的作用,常和区带电泳耦合,用于区带电泳的浓缩进样.1.对接式耦合2.套接式耦合3.单毛细管 ITP-CZE,速匣苏虞您集赛窍栈淹驰纳冬萧延滓氮坎罐悔矽佬器焕哈挑剂播蠢醋稀悬毛细管等速电泳毛细管等速电泳,对接式耦合,揉萎吝愁凭介损脸屯涨懦裁尽苟撵授氦态豢竭逢皖拈未缔丹反涨绕先硫奸毛细管等速电泳毛细管等速电泳,
