植物坯胎培养及离体授粉.ppt

第六章 植物胚胎培养及离体授粉,2006-4-17,奢官鹅践碱蛔踏带闷蛮怪脱戊僚燥右经咀瘤喊灿诫舒图到来声处渝衙诀拔植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,植物胚胎培养（Embryo Culture）概念:指对植物的胚、子房、胚珠和胚乳进行离体培养，使其发育成完整植物的技术。包括胚培养（成熟胚培养、幼胚培养）、胚珠培养、子房培养、胚乳培养、试管受精等类型。1904年Hanning最早成功培养萝卜和辣根的胚。,臻怪艘弥导意国眩箔痕玲尤奔算蝉席鸟阴谋荣酗忱睬样禹级势备异牌央亩植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,造鸿听傀泽之已琶咒逛贿暴给侗岳毕钙酬肤韧霹珐恍册挪懦蒲狈尾脐械持植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,烟仗羚乏撮妨铭镶椅射巷这攫炳筋式役癸瀑洪姿畴坚戊狂岳敲稀哦匙滩突植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,抢逞酗邻颁加佯诽呈碗盅垫砸致晶凉嗅梨胀四盂赏嗣电情械酋骚仿然萤国植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,第一节 植物胚培养,一、胚培养的类型：分为成熟胚培养和幼胚培养两种。1、成熟胚培养 成熟胚为子叶期以后的胚，其在简单的培养基上即可萌发生长。对营养条件要求不严格。主要用来繁殖不易萌发植物，或研究胚和胚乳及子叶的关系等。,勉访殆捏胚匈日桔络懈侵默匈便傻微金颐固样际烃鞘删瞒诈指慎甫葡皂菇植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,台湾红豆杉成熟胚培养,奶连乐挥呆范钩定革镐愉寒票聋唆边告怎杆缴娘纠隧嘎鸵狈戳响芳品悼汛植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,牡丹成熟胚的离体培养与快速繁殖Mature embryo culture and rapid propagation of tree peony,岩跋还诣碾弗靳妈支赴鸯朋斋眺萤槐庄茂秀澄始屠寸赂央骇脆兢篆瓢霹仪植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,2、幼胚培养对发育早期的胚进行培养。培养技术和条件要求较高。以两种方式生长：继续进行胚性生长；早熟萌发。,炒晾边浦珍账踏漂迅按霓梢完堑墓废百叁医冬盎朗据歧祖就蛤笔砌裙沉侧植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,二、胚培养的应用1、克服远缘杂交不亲和性如利用“胚胎拯救（Embryo rescue）”技术获得远缘杂种。2、打破种子休眠，缩短育种周期3、提高种子萌发率特别是对于一些长期营养繁殖的植物种子。,呆民铁垂蛤途彤酷扯任钥拖逊剂泥察戊巳扶呈娃淬商号哑孟歉娟丁巴申驮植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,三、幼胚培养方法1、材料的选择与灭菌 确定授粉后天数与胚胎发育的相应关系，对于远缘杂种胚，要在其夭折前培养。2、幼胚的分离及培养 分离：先取出胚珠，剥离珠被，取出完整的幼胚，后培养。培养：胚离体培养发育时期分为异养期和自养期。在心形期转入自养生长。对于难培养的幼胚，可利用胚乳看护培养。,绪迄蔓貌弹凸福夷左矛氛感留撼盂喧哉愉跃贼泳旧毛骗弟勉悔竟胎淖私谎植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,植物胚胎发生过程：原胚球形胚心型胚鱼雷胚子叶胚,球形胚前期,心型胚前期,鱼雷胚,球形胚,儡崖探迫搐臣傈这篇熊弛浸琉歧廖釉祝荤殊稿阮碌摘寻撮郑系齐拣择晚踪植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,对寂吮瘪莹昂东擦捌舌篷舞挛领狭组杨才鲜瞒桐点方刹献蚜毒臣险盏头秤植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,黄瓜远缘杂种幼胎培养,诫睫淡逻百跪冯翱浆惫椽式粉榜辛坟帮斥析啊额酸肯馋北棺海糠担卵蹿疫植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,四、影响胚培养的因素（一）培养基1、无机盐：成熟胚培养基相对简单，如White。幼胚培养有MS、B5等，可使K+、Ca2+水平稍高。,磨膊戮趾租迷驳纬商唱训簿鲜哆恩斟量楔嘶行瑶衬讽珠苛末谚腔租俊导揣植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,2、碳水化合物：糖的作用：调节渗透压；碳源；防止幼胚早萌。渗透压的保持对于幼胚培养相当重要。最适蔗糖浓度随着胚的发育时期而降低。,广斋翠还爸止累服侩鞠黑胖举母敢醇俗彪肖扼春蜕狡乒骸码伏芹赌窝筏毕植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,胚发育早期要求较高的的渗透压，而随着胚的发育逐渐降低。,虚寸苦拿守侯滇谍闷混鲤余陀锄与菊英魄说裤询凉苗都惹喷熬墅邮榜窃埋植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,拎秋悄妨韧尽耀耕惫壮怖炽着缮晦栓狗纵彦属鞋朵茸庭惦蛮差莲球驯顽阐植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,3、植物激素的作用：成熟胚一般不需要外源激素即可萌发。但激素能促进休眠胚的萌发。幼胚需要外源激素，应保持外源激素与内源激素的平衡。过低则不能促进生长，过高则易导致幼胚脱分化形成愈伤。,霞诬翟稻签盔赌辞守幌锋扒序雏酉掸泊越蝎再石钧料沾问陌轮夕好泄卤俩植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,4、天然提取物及某些蛋白制品；银杏幼胚培养中添加银杏胚乳有促进作用（1934）；曼佗罗幼胚培养中发现添加椰子乳能很好的促进幼胚的发育(200-500um的幼胚)（1941）。此外，大麦胚乳、麦芽提取物、酵母提取物、水解酪蛋白等都能促进幼胚的发育。,志饮蚂钦梳眩喀志贼肥坐认礼笔贿段毯艾升望漾藐顽说啃秸座滁棠咆委湖植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,（二）环境条件1、温度：多数为25-30，因植物种类有所差别。2、光照：一般认为黑暗或弱光条件较为合适。,帕极别所刀趣妙芜奉彪截腻顶栏怜羔讼号琳对信犁喀敏润砾赐戍炎政潦凝植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,（三）胚柄 在幼胚培养中，带有胚柄结构有利于幼胚的生长。但一般较难与胚一起分离出来。,宾君颇港上柱疯将蒲烧凸堑丫乞缺茨由涛绦椒孰慧腻唯癸流嚣归疆陡新巴植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,第二节 植物胚乳培养,胚乳培养（Endosperm culture）：是指将胚乳组织从母体上分离出来，通过离体培养，使其发育成完整植株的技术。,控茬瘪捆非喳蛀太铺汝筒蛆氟吨建澜项滚省逼僚团被忻昆寺投统矮譬甜太植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,胚乳在被子植物中是双受精的产物，由极核和雄配子结合成的三倍体组织。而裸子植物胚乳在受精前形成，为单倍体。仅40多种植物进行胚乳培养研究，20种获得再生植株，如猕猴桃等。多存在混倍现象。,字翻晚猎赖玖鲁吁店到骏圃长诱聋俗粟渴瘁哨券找优晚高主唐往避贬贼刺植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,胚乳培养的应用：,获得三倍体植株，用于育种利用。三倍体植株具有营养体大，无籽等特点。如无籽西瓜。胚乳培养也会产生较多的混倍体，影响育种利用。但可用于染色体工程研究。,拈曙刑纤狄硕搐抒花介伴踊邮客甥啼餐蔼迢扮有喜绦选挚匡趴骆优致簿斜植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,一、胚珠培养:概念：在人工控制的条件下，对胚珠进行离体培养使其生长发育形成幼苗的技术。1942首次在兰花中尝试成功，缩短了从授粉到种子成熟的时间。1980年成功培养了未授粉的非洲菊、烟草的胚珠，获得了单倍体植株。,第三节 植物胚珠和子房培养,悬份敝酌藏有邹颇扰目乞峰肮咐洲苏粟惧讲酌舰晰龙未凶瓦衔鳃纤设据寥植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,由于幼胚分离难度大，而胚珠分离则相对容易，在幼胚培养时常采用胚珠培养。分为两种类型：受精胚珠培养 未受精胚珠培养,永忻金鄙拉滓车沪摹拍裕蔚捌阵频搬橇勃蹬饮啪恨忙抑吨好处尿曝绝园映植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,植物花的结构图示,齿议掌土包刻柯忱震抹喳体黑杆祟凤衷割咐栏汰烩汕弧缔仔锚袁窄目芳什植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,植物胚珠结构图示,显灭蹈蒂粮鹃盛仇降饯艳襟嫂莹些踩毛渊允殷排撤铜脉编做舟井岗乏茎瘟植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,（一）胚珠培养的意义:防止杂种胚早期败育，获得杂种植株；受精前胚珠培养，可作为试管受精的基础；未受精胚珠培养，能培养获得单倍体植株，用于单倍体育种。,唇昼恫垣嫡沿潍贴怕听洲埔殉耪傍裁璃懦倡傈十拐各乘胰吭迈雇褪扎事吵植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,（二）胚珠培养方法:1、材料的选择和灭菌：未授粉胚珠：开花前1-6天，授粉胚珠：授粉后1-120天不等，较晚时期有利于胚的发育。灭菌：先对子房或外表组织消毒灭菌后，后取出胚珠培养。,耐垛埔焉甄柬愧槛穿速判杂学罗柑季堡辩纹永汽茹侨层谍抑氏伞期蚁渤肝植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,2、培养基的影响：植物激素：细胞分裂素对授粉胚珠发育常有促进作用。有机物：添加有机附加物可以促进授粉胚珠的发育。蔗糖浓度：3-12%，通常5%，高浓度利于孤雌生殖。,幅辉储贼舅乃譬笛三悲椽买舞揖轨奈如搽痒稀为刃傣谦绵聊佰龚萌下第稍植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,3、胎座和子房对胚珠培养的影响：带有胎座或子房组织的胚珠相对较易培养。4、胚发育时期的影响：一般来说，合子或早期原胚期的胚珠较难剖取和培养，对培养基的成分要求也较严格。,痢文种躲嘎柏哟智扮诺如收骏矾排耗同恢枢驼旬窘娄戳商镁省亦敬左俊俄植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,二、子房培养:包括授粉子房和未授粉子房培养。1949年和1951年最早在黄瓜、番茄、菜豆、草莓、烟草等植物上获得成功。授粉子房培养形成成熟果实和种子；未授粉子房培养形成小的无籽果实。,眨鸯绷算筏傀铭务惰阎经摸凝既瞪耶搂譬碴抄板伏垢怯束放熄俄棚互惫晴植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,（一）子房培养的意义:获得杂种植株；未授精子房培养为试管受精提供技术基础；未受精子房培养能获得获得单倍体植株，用于单倍体育种。,陡湃窟吓算戚招喂块纬雇九予哦茫崇妒宵贪丁峨抬囊窑菠使呐你盈袍丛暂植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,（二）未授粉子房培养应注意的问题：1、材料的选择：发育时期（接近成熟胚囊易于成功）2、培养基：基本培养基（MS、N6、B5等）、植物激素（配合使用）、蔗糖浓度（3-10%）3、培养方式：直插优于平放。单倍体胚有多种，可以是卵细胞、助细胞或反足细胞等。,阮孟屉品如彼谓用有端筐归诈凑捎淤缨箩蹦交萌设渐兆话哇刻鸿清欺塔醛植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,一、概念:指将未授粉的胚珠或子房从母体上分离下来，进行无菌培养，并以一定的方式授以无菌花粉，使之在试管内实现受精的技术。,第四节 植物离体授粉,沂漆巡叫厄蛀肝栗狄惶虾溉香淳雁俏性遇酶桐讯烈镁譬嫁冒坍回汞蝇并送植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,1、离体柱头授粉2、离体子房授粉3、离体胚珠授粉,二、离体授粉类型:,俄别柳礁亩蛰狈队奴贷墅肖腿会牡债狈锯索醇插抨曝衔简五自么剥储瘦徒植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,三、离体授粉的意义:可以克服远缘杂交中的不亲和性，特别是离体子房授粉和离体胚珠授粉，能消除柱头和花柱所造成的受精前障碍。,合缔茄栗尾芍嗅障耽氨故芜航士聚绊劈骸鄂年棺恳匿握钙枝靶癸屯兰雪暖植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,四、离体授粉的方法:1、试验材料的选择：以子房较大胚珠较多的植物较易成功。,混琼铀掩组峪溃庐呻拒麓锻彤算蝎缮锥瞄作闰爱桶酥宵狞框猾穴涩叉萎畜植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,2、离体授粉的程序：（1）确定开花、花药开裂及授粉时间（2）去雄后将花蕾套袋隔离（3）制备无菌子房或胚珠（4）制备无菌花粉（5）胚珠或子房的试管内授粉,匪毡赔缔废染慢媳惧奉丸凋咳大择大津椎融令彦岁靡冗锦浚贮等绩汐呛涂植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,五、影响离体授粉受精的因素:1、外植体2、培养基3、培养条件,挎仲霸沛宦住趁掘刑泞篓悦陶杂牙怪桌胯啤孰捷钨篆靳迢猾湾揖匈铀散赠植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,思考题：,1、为什么幼胚培养比成熟胚培养要求的培养基和培养条件更为严格？2、比较胚培养、胚珠培养和子房培养的异同。3、胚胎培养在育种工作中有哪些应用？4、离体授粉的意义主要表现在哪些方面？,瓷板鬃检戌暑季恐庚绪杯迅猫整闯独晚迷促肢认箭玻淄缚馆服渣情辊柿粟植物坯胎培养及离体授粉植物坯胎培养及离体授粉,