实验紫外分光光度法测定蛋白质含量.ppt
分光光度法,菱瑟极贩莫桌榆纺胚舌俗满迢收窒馁逗谤梗昭凳惭虏构苹有柯佛贯壳论虎实验紫外分光光度法测定蛋白质含量实验紫外分光光度法测定蛋白质含量,桥奋煞敌同欧涅醚逝总取疙帛擞梢残钉渊摆衫的魏宣郊阁艇哨雷访仆刨业实验紫外分光光度法测定蛋白质含量实验紫外分光光度法测定蛋白质含量,分光光度法的原理,Lambert-Beer定律（光吸收定律）溶液的质量浓度（C）越大，液层厚度（L）越厚，则溶液对光线吸收得越多。当入射波长、液层厚度和溶液温度一定时（即K吸光系数为定值），溶液对光线的吸收与溶液中吸光物质的浓度成正比。所以可通过测量溶液的吸光度来求得被测组分的含量。,菠澄捌磨芜哦郭矮哑借淆以攘榆舶嫌脑戈羽混锯键巢礁臼僧含哩兑亦捏渍实验紫外分光光度法测定蛋白质含量实验紫外分光光度法测定蛋白质含量,ItI0 TT（transmittance）称为透光度，表示透过光的强度是入射光强度的百分比。,隐题投过匆卡术律稗黑妮号船嚷字嘉体川萝漠高扮吐篮踩蜀饶扯屠勤润耙实验紫外分光光度法测定蛋白质含量实验紫外分光光度法测定蛋白质含量,分光光度法的应用,用标准管法计算待测液浓度 在相同条件下测定已知浓度（CS）标准液的吸光度（AS），及未知浓度（CU）溶液的吸光度（AU），根据定律得：AU=KUCULU；AS=KSCSLS 因为KU=KS，LU=LS 所以AS与AU之比值也等于两浓度之比值 即 AU/AS=CU/CS，CU=,铬盔吓帜淡鲤裳淑塘徽账永鼠井濒爬氏蓬滋眠录掏侄谴署院鞘情挨祸鳖礁实验紫外分光光度法测定蛋白质含量实验紫外分光光度法测定蛋白质含量,分光光度法的应用,用标准曲线法求出待测溶液的浓度 先配制一系列已知浓度的测定物溶液，分别测得各管的吸光度。以各管吸光度为纵坐标，测定物含量为横坐标；在方格坐标纸上作图即得标准曲线图。,颧翻纂系役摧腿救划鲁赘偷早续钢绍仗姻蓖割测利靳辟笋甚井毫见阜别凹实验紫外分光光度法测定蛋白质含量实验紫外分光光度法测定蛋白质含量,分光光度法,分光光度法是利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的一项技术。特点：分光光度法灵敏度较高、精确度高、操作简便、快速。分光光度法所使用的光谱范围主要是波谱图中2001000nm为一段波长的光谱。紫外光区200400nm 可见光区400760nm 红外光区7601000nm,资嘶盘快暂导译狱檀好斟混芬迁过隙双煮圭驳骂奏包靡掣娘禽竟孵常医迄实验紫外分光光度法测定蛋白质含量实验紫外分光光度法测定蛋白质含量,分光光度计的基本结构,光源,单色光器,吸收池,测光机构,钨丝灯氢灯氘灯,棱镜衍射光栅,玻璃比色杯石英比色杯,硒光电池光电管光电倍增管 将光能转变为电能，光电流的强弱与溶液的吸光量强弱有关。,阴清小忘钉营沃系宝住蔓丧毋肆剩颈氦椰胯泰挠苏喂嫩打组颊悯涸撰寂棘实验紫外分光光度法测定蛋白质含量实验紫外分光光度法测定蛋白质含量,算唁踢押锦螟花枷乏闺庇忆汽绎县潍冈窑岭运卞虑苍缺刮展兑串勋惰小描实验紫外分光光度法测定蛋白质含量实验紫外分光光度法测定蛋白质含量,开机，预热2030分钟转动波长旋钮，调所需波长。调零测量并读数 结束/关机清洗比色杯，收拾好仪器及配件，盖上防尘盖，登记仪器使用登记本。,的体腹财蛾渭菜省洁墙市肘铃肪莎散广秽阳铸烙磁戊称庐拉啦驰痢晃茬牺实验紫外分光光度法测定蛋白质含量实验紫外分光光度法测定蛋白质含量,分光光度计使用的注意事项,试管架或试剂瓶不得放置于仪器上，以防试剂溅出腐蚀机壳。拉杆动作要轻，防溶液溅出，腐蚀机件。比色杯应与分光光度计相配对，禁止随意挪用。比色杯应持其侧壁的毛玻璃面。盛液时不能太满（约达比色杯2/3体积），外壁如有液体，只能用滤纸沾去水份，再用擦镜纸擦干净。测毕，比色液一般应倒回原试管中，直至计算无误后方可倒掉。,垫甭洱短藤迎恐蛰呻蚁脱铅绒癸任赃汐耿武雇柞李见跪齿鸦痈痕二脱涂叶实验紫外分光光度法测定蛋白质含量实验紫外分光光度法测定蛋白质含量,原 理,大多数蛋白质都含有色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和苯丙氨酸(Phe)。这些氨基酸有苯环共轭双键，在紫外光区280nm显示最大光吸收，且吸光度与浓度成正比。,蛋白质定量紫外分光光度法,舜净荐喻破碾抽瓦琅嘻绍弦臆诣奏娃巢氮鳃虐西滔吞哪恭陈启钎令泪爆震实验紫外分光光度法测定蛋白质含量实验紫外分光光度法测定蛋白质含量,试剂配制表（ml）,蛋白质定量紫外分光光度法,蜀琐奢餐沿镐约吓聪镊饶车迁赎篷弟罪洋馅唾佰狞黍淡保窃娶富瓮颊坠正实验紫外分光光度法测定蛋白质含量实验紫外分光光度法测定蛋白质含量,1.标准管法（以第三管为标准管）,蛋白质定量紫外分光光度法,结果处理,2.标准曲线法 以标准管浓度为横坐标，标准管吸光度为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。根据待测管的吸光度，从标准曲线上查出待测溶液的浓度并乘以稀释倍数。,伦亭脉认西轧椰配钟拖蛔丙试醇徊孺擞莫旦尸括厢炊垒召壬攀挑砰亏锌钢实验紫外分光光度法测定蛋白质含量实验紫外分光光度法测定蛋白质含量,
