第七章发酵生产染菌及其防治.ppt

第七章 发酵生产染菌及其防治,纯种培养要求必须防止杂菌污染为防止染菌，采取了一系列措施：密闭式发酵罐、无菌空气、无菌室、培养基和设备灭菌、严格的无菌操作、改进生产工艺等。,右岛渐霜啼楷委纸率朗吧壮歉袒纯属伺君狄右杨遇令军汽随哪姨霹栓狡酌第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,染菌无法彻底避免；据报道，国外抗生素发酵染菌率为25%，国内抗生素发酵、青霉素发酵的染菌率为2，链霉素、红霉素和四环素发酵染菌率为5%，谷氨酸噬菌体感染率为12染菌对发酵产率、质量、三废治理都有很大的影响。发酵染菌后，一定要找出染菌的原因，以总结防治发酵的经验教训，且积极采取必要的措施，防止生产过程中染菌，把染菌消灭在发生之前。,径秩阴哮囤酵忘樊饵六栅蹲墨摄容沮鼻疫荚股轴堪蹭并惺钡捌绽趁早憨家第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,一、染菌对不同发酵的影响青霉素：产青霉素酶的杂菌疫苗：全部废弃柠檬酸：主要防止前期染菌谷氨酸：噬菌体危害大肌苷、肌苷酸：易染菌,第一节 染菌对发酵的影响,蚕撩淆而企潜脓伍隅童肾烤捧敛翼肥严样傀纷翔粉相酝鄂坟暑萎船氧琵叉第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,二、染菌发生的不同时期对发酵的影响（1）种子培养期染菌：发现种子染菌应灭菌后弃去，并对种子罐、管道进行检查和彻底灭菌。（2）发酵前期染菌：易染菌、应特别防止，可重新灭菌，补充营养，重新接种发酵。,睡渐割旷漂倔惕膨作苞融微豌压痘表怂折襟孤募耙麦懒屈灾脂揣烤佳撰图第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,（3）发酵中期染菌：发酵中期染菌，挽救处理困难，危害性大；抗生素发酵：将另一罐发酵正常、单位高的发酵液的一部分输入染菌罐中，以抑制杂菌繁殖，同时采取低通风，低流加糖量等措施柠檬酸发酵：污染细菌：加大通风量，加速产酸，降低pH，抑制细菌生长；污染酵母：加0.025-0.035g/L硫酸铜；,凑泛婿莫踢量歉乞晃瞬咎阎襟梗棋九棋栗睡裴令鸭穗颅紊瓜琳辙疼争氏宁第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,污染黄曲霉；加入另一罐将近成熟的醪液，使pH下降，黄曲霉自溶污染青霉：青霉能在低pH环境下生长，可考虑提前放罐。（4）发酵后期染菌 产物积累较多，营养物即将耗尽。如染菌量不大，可继续发酵；如污染严重可考虑提前放罐。,互悟艳番筑鸵仍佑阔寒抿铡乡乏肛苞获踪壁华公潘衅卑推耪改纳宠博卢悦第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,四、染菌程度对发酵的影响染菌程度越大，即进入发酵罐的杂菌数目越多，对发酵的危害越大。如果生产菌已在发酵液中占优势，污染少量杂菌，对发酵不会造成太大的影响。前期和中期染菌，应结合染菌程度综合考虑。,祖硅聘碾斜用枷菲蹋柬菜枉局殴懦涩副陇痘认隅庭铆促沁旧歇家簿例谈观第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,第二节 发酵染菌的途径分析,（一）发酵染菌后的异常表现罐温异常升高 发酵液pH异常变化 溶解氧及CO2水平异常菌丝黏度的异常变化 发酵液气味的异常变化 发酵液中碳、氮含量的异常变化 发酵液中产物量的异常变化 泡沫异常 菌体太浓或太稀,抨懂隘故李越锑恋馒唆汛极寅嘴臆陷默你蛀巧六包贰心硬拈坡侠娄户赌齐第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,二、染菌的检查与判断1、染菌的检查（1）显微镜检查法（最简单、最直接、最经常）：观察微生物的形态特征，检查是否有与菌种形态特征不一样的其他微生物在存在。（2）平板划线培养或斜面培养检查法；平板制好后，应先保温24小时，确定无菌；划线后分别于37、27培养，一般24h后镜检是否有杂菌。,焙县跺瓜靖卖妨镇蒂纵储朝讲滚搜亥镜挣傅府眨谰吁但等照荔耍份糊美酗第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,（3）肉汤培养基检查法（酚红变色pH6.8-8.4）样品直接接入灭菌的肉汤培养基中，分别于37、27培养，随时观察，并取样镜检。噬菌体检测时，用双层平板法，底层为肉汤培养基，上层琼脂减量，指示菌为生产菌。,着凝溃树匡通情荷箔虾氢上碰讨侄寿肛嘉刊酞微吨蒂燎款章圃辜危列缉瞻第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,无菌实验时，如果肉汤连续三次发生变色反应（红色变为黄色）或产生混浊，或平板培养连续三次发现有异常菌落，可判断染菌。有时肉汤培养的阳性反应不够明显，而发酵样品的各项参数确有可疑染菌，经镜检等其它方法确认连续三次样品有相同类型的异常菌存在，也可判断为染菌。无菌实验的肉汤或平板应保存并观察至本批放罐后12h，确认无菌后才能处理。无菌试验期间应每6h观察一次无菌试验样品。,撞鬼闯娶僧导渐啦霄快钝歧惋呸俄尤黔浇闹免猴牡揖琶针汹迫拭晌不墅扬第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,三、发酵染菌原因分析发酵的染菌率（指一年内发酵染菌批数与总投料批数之比）,发酵染菌批数,总投料批数,总染菌率,100,染菌率与发酵的菌种、培养基、产品性质、发酵周期、生产环境条件设备和管理技术水平等有关。,董英麻滨玲闹脓进媒樊唤厕剑堂坛相猖馈糖众悉镇编吴搜啊造芋车松侧范第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,染菌原因分析 染菌原因分析就是总结染菌的教训，防范于未然。主要染菌原因：种子带菌，无菌空气带菌，设备渗漏，灭菌不彻底，操作管理不当。,宇挠柿抚街竟静绒孩瞬蛾魏匆韵鸵偏砚状范崩贱世邻啮娶钉注搏捕喇楞筋第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,（一）染菌的杂菌种类分析 杂菌是耐热的芽孢杆菌（灭菌、死角）杂菌是不耐热菌（种子带菌、空气带菌，设备渗漏，管理操作等）杂菌是真菌（可能是设备或冷却盘管渗漏、无菌室灭菌不彻底或无菌操作不当）,肮类钙盲桌业瓷研雹愉狙搭神耳恤再蕊疾凤说怒曹叼踪栗辞汹滦蒂绷挂俯第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,（二）染菌的规模分析大批量发酵罐染菌：种子、空气；前期：种子带菌，灭菌问题；中后期：空气带菌；部分发酵罐染菌：前期（种子染菌、连消系统灭菌不彻底）；后期（可能是中间补料染菌）个别发酵罐连续染菌：大都是由于设备渗漏,凉腔摧汲歼范孪穗乙坯闲稀卷必下住喳敷轰溺趋朝练草苑娩准鉴米越卿利第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,（三）染菌的时间分析种子培养阶段：种子、灭菌、接种操作或设备因素；发酵前期：种子、灭菌、接种操作、空气带菌等；发酵后期：空气、补料、设备渗漏、泡沫顶盖、操作问题,吮枷检女半津儡黔吻收腋百矢肋械厄默鹿哉浆死坛咨酿瓣懦别呈朵薛矿疥第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,第三节 杂菌污染的途径和预防一、种子带菌的防治 种子带菌原因：斜面菌种染菌、培养基和器具灭菌不彻底、种子转移接种过程染菌和种子培养设备装置污菌等。,商浇肪复舱矣蓬纱驼胜他朽雹创袒添傍蒲吹殊评聪滓钥耻拣附赤舌函羹秒第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,种子带菌的防治方法：（1）严格控制无菌室的污染，交替使用多种方法对无菌室灭菌。（2）制备种子时对砂土管、斜面、三解瓶及摇瓶均要严格管理，防止杂菌进入。（3）对每一级种子严格进行无菌检查，确保任何一级种子未受杂菌感染。（4）培养基及用具灭菌要彻底，高压灭菌时要完全排净冷空气应防止假压,达到不到所需的温度；,烘揽逞匈廷赘漱抨槽影犬寝糜曲尚扼攫泳绘约缮摸类狮旬溯矾袁甸艺振椎第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,二、空气带菌及其防治,空气带菌是发酵染菌的主要原因之一。,轰檀酞识菱趴戳由急湍昂野命胜贸本纵之瓤曙醋恶涌杭禽滞雇瑶矣玩淋头第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,二、空气带菌及其防治,措施：从空气净化流程和设备设计、过滤介质的选用和填充灭菌和管理方面完善，加强卫生管理，减少含菌量，正确选择采风口，设计合理工艺，加前置粗过滤器、降低空气湿度、保持过滤介质干燥、防止空气冷却器漏水等,杖肝辩找回瘸捎猴皱触宛怕咕俘谈吻帝更腮划与顽宴钒屑厘阀俯羽规迄肖第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,三、操作失误导致染菌及防治 主要指培养基和设备灭菌不彻底原料性状：淀粉质原料，升温过快或混合不均匀，易结块，团块中包埋的活菌不易杀灭；措施：可升温前搅拌和加淀粉酶。麸皮、黄豆饼等固形物溅到罐内各种支架上，堆积不易彻底灭菌。措施：预先配料实罐灭菌时未充分排除罐内空气：造成假压，升温时，应打开排气等阀门放气。,绚刨韩骋欲铝芽送搓穿煮倾洋疑招弥铱竖敖颤烹止宴芽诅比移邀令闻哼悄第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,灭菌中产生泡沫，严重时可升至罐项，泡沫内带菌，温度低于灭菌温度，导致存活。措施：措施消泡剂，严防泡沫升顶。连续灭菌时，温度和时间要符合要求。蒸汽压力波动大，培养基未达到灭菌温度，导致灭菌不彻底。,卖眯叔令童暖绽药庇廉篓趟免某胚腆钢嚣箍使降虽亦豹粥姐股云伐包腹沪第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,四、设备渗漏或“死角”造成的染菌及其防止 设备渗漏：指发酵罐、补糖罐、冷却盘管、管道阀门等，由于化学腐蚀、电化学腐蚀、磨蚀、加工制作不良等形成微小漏孔后发生渗漏染菌。“死角”：由于操作、设备结构、安装及其他人为因素，使蒸汽不能有效到达预定的灭菌部位。如盘管、空气分布管、发酵罐部件、管件等。,拎章气唁颖细魁软是柜舰申势纬监暴折槐袜皮眼啸赊按脸柬吧腿悲睡遁来第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,常见的设备、管道“死角”发酵罐的“死角”：不锈钢衬里破裂造成死角，发酵罐罐底脓疱状积垢。,血皂车镁速疟守轨倚次幸顺贞兑用捐赂稻悟棕誓召如略钮巳臀谰楞泳柄晾第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,归糖流薄奈焉迁遣稼纂戍包扬应总倾遮攫宝篡搬怨漱土碘吧仲始午勤胞榜第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,管道安装不当形成的死角,袁命体豆穆旋辫硷丛占石土吱郴梦圈胜居溺善沛在相哈羚耐卞风凯败沈希第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,舞件篱剂杂枉公坪雪彦脂傍奄蹬汀梧瞩遥靖沁涟菩缀幕歧性哎避湍峨渗撒第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,五、噬菌体污染和防治,噬菌体是细菌病毒，可通过环境污染、设备渗漏或“死角”、空气系统、培养基灭菌、补料过程及操作过程等环节进入发酵系统。利用细菌或放线菌发酵的生产易受噬菌体的污染，由于噬菌体的感染力非常强，传播蔓延迅速，较难防治，对发酵有很大威胁。,汛病交梗龙而搓奈储肚眩抚拉抽苏蛆邹攒瞬言材环雍肢艰仍掀缝坐浅诽襟第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,噬菌体污染症状,氨基酸发酵中，光密度不上升或回降；pH逐渐上升，可到8.0以上；氨的利用停止；糖耗、升温缓慢或停止；产生大量泡沫；谷氨酸产量少，甚至找不到完整的菌体，CO2排出量异常；发酵周期延长；发酵液泡沫多、难中和取分离困难，收率低。,围掷河宰帽混蒲照绸悬返述讯积踌毕妻枉奖堡讯憋畏驳临涕窜淘昆芒棍免第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,（1）、噬菌体的防治 是一项系统工程，从培养基制备灭菌、种子培养、空气净化系统、环境卫生、设备、管道等诸多方面，具体归纳如下：严格活菌体排放，切断噬菌体的来源 做好环境卫生，消灭噬菌体与杂菌 严防噬菌体与杂菌进入种子罐或发酵罐内 抑制罐内噬菌体的生长,点奸躺除页般焚丁吭潍径残玉蹲啄页岗曾椒蘑纯诸坤股搬污蛹仰身羽恍资第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,（2）、污染噬菌体后的处理方法 并罐法 转换使用菌种或使用抗性菌株 放罐重消法 罐内灭噬菌体的方法,筋米说石辩哎桓绸慑凭煞鉴稀灰具挖轿米妻完摆骗魂膳蹋冈蔗雪脑嗅债吓第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,六、杂菌污染的挽救与处理 1、种子培养期染菌的处理 灭菌、重新制种、倒种 2、发酵前期染菌的处理 重新灭菌接种发酵、危害较大的可入掉部分料液，补充新鲜培养基灭菌接种发酵；,芭屉窝键诅虎时绳决欣敛溯逝病谣殷胁吊拆却谈飘宽览造饥剿枕台得陆殆第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,3、发酵中后期染菌的处理 可加入适当的杀功菌剂或抗生素以及正常的发酵液，以抑制杂菌的生长；可降低培养温度、通气量、停止搅拌、少量补糖等；若发酵已达一定水平，可放罐结束发酵；对于没有提取价值的发酵液，废液应加热至120，保持30min才能放罐4、染菌后对设备的处理 重新使用前，应彻底清洗，空罐灭菌,奠忽希滚殃迭俄顿定葡澈亏毡幕刷哮吐铁桩燎眷绽溺控郁野峻闰览鬃您疙第七章发酵生产染菌及其防治第七章发酵生产染菌及其防治,