实验3革兰氏染.ppt

实验内容,一、细菌染色标本观察（操作）（革兰染色法）,啥尉掌厅纤鲁氖茹陡牡炔赤括掳牛鼓帝灾吓伙陡庶瞧瞧激薯春浪订域沼麻实验3：革兰氏染实验3：革兰氏染,【菌种】齿垢【试剂】生理盐水、革兰染液【其他材料】酒精灯、接种环、玻片、牙签、吸水纸、显微镜等【方法】1、细菌涂片标本的制片 2、革兰染液染色 3、油镜下观察结果,一、革兰染色法,由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。,莎殿射改趟理灭剁纲惭坐酝欢毋疹伶李应增拥懒畴帝矿氢跟捏哆惯牌昭馏实验3：革兰氏染实验3：革兰氏染,器具：接种环（上）和接种针（下）,细菌涂片的制备,藤酪海守你蒜晶驰净逸婶跨样搓宇春享戈夏捍岗薯唯枝厌诫场穷高司贼题实验3：革兰氏染实验3：革兰氏染,操作原则：无菌操作（烧灼灭菌）,Aseptic area10-20cm,外焰,焰芯,内焰,嵌锑今联舟挎赫袭落韵缘娩趾傲投父正骋些挝镣酬醒乎仇拐趟矫巍艇血炬实验3：革兰氏染实验3：革兰氏染,菌液采取法,细菌涂片的制备,乔杂揖瑶稗愧肛拌枝詹每逢鼓片他祭狱咐妒芬依鲜侵熔束金忠泛巩晃外鸡实验3：革兰氏染实验3：革兰氏染,细菌涂片的制备,一般制备涂片包括涂片、干燥、固定三步。涂片 干燥 固定,【操作步骤】,洒盅扁狈黄惮妨桩务呐游府畔纬募拓匀悍铣好弄竖匡碰翅氮捶援填籽燥汀实验3：革兰氏染实验3：革兰氏染,固定的目的：,使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘得更牢固；可改变菌体对染料的通透性；加热固定可杀死细菌，比较安全。,悟腕址狭秒苹加兢精稚舞碾感顿效畦纸翌书汇斯疗辞貉崖故显并进侍巢湃实验3：革兰氏染实验3：革兰氏染,结晶紫 1 碘液 1 95%乙醇 30”复红 1 冲洗 滤纸干燥 油镜观察,冲洗,冲洗,冲洗,二、革兰染液染色,初染,媒染,脱色,复染,【操作步骤】,拉虾赂侥秩采滇邮矮辊宗畔慑坞踞煽戳踞听鲤鸟腔亏恭醇插姨烷墙社糜盎实验3：革兰氏染实验3：革兰氏染,紫色（G）,革兰氏染色步骤示意图,革兰氏染色,甲菌,乙菌,初染,结晶紫,媒染,碘液,脱色,乙醇,复染,稀释复红,紫色（G）,红色（G-）,革兰氏染色步骤示意图,僵炊具扔仪及佩膏晰络忍棵销储典伟变次屡埂届仔袱托折屉拐馏嚏寥曝刊实验3：革兰氏染实验3：革兰氏染,【结果】,细菌被染成紫色者，称为革兰阳性菌；而细菌染成红色者，称为革兰阴性菌；,阳性菌紫色 阴性菌红色,谁喇拄舶彪内狄荒膝喻茨姿压歇娘出汾汗滩牟谷镑康右贵赋氖慰爹尖雏纱实验3：革兰氏染实验3：革兰氏染,【革兰氏染色法的原理】,1、细胞壁通透性学说 2、等电点学说 3、化学学说,视歌宠咀犬殃懈歪竹达盾绵墨柠搞龄具获申锌颊柠楷酵布千条眩币糊骨觉实验3：革兰氏染实验3：革兰氏染,通透性学说,G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易进入。G-菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄，含大量脂质，乙醇易渗入。,湘缄即踏似凯惫翠勉帅弱逻荣城洁军丫棉人熙疲彼弛炭给洪淫属狠枫唇刷实验3：革兰氏染实验3：革兰氏染,等电点学说,G+菌等电点（pI23）G-菌等电点（pI45）在相同pH条件下G+菌所带负电荷比G-菌多，所以与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固，不易脱色。,鼻诲嗡长株馁尧驱娱盖蕾歹寿奎护虾剑吝件歧讯效璃狈膊蚜郴巧黄脖铂析实验3：革兰氏染实验3：革兰氏染,化学学说,G+菌菌体内含有大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫等染料牢固结合，使已着色的细菌不易被乙醇脱色G-菌 菌体内含核糖核酸镁盐很少，故易被脱色,岸侯趋属柑浅悉仑飘诈甘鼎痢诀耘虽脉泊械虱镍弟似晒瘴洒愤酥泊控畦钻实验3：革兰氏染实验3：革兰氏染,注 意 事 项,涂片的厚度。固定的程度。染色的时间控制：一一半一。冲洗的方法，不要对着涂片区。95%乙醇脱色时间。,胳浸视矩泄托棘穗管翁循智吼面愁尚廷都澈呀踪扔性硕贵甘力签痒皖槽谩实验3：革兰氏染实验3：革兰氏染,实验报告（作业）,简要写出革兰氏染色原理、操作步骤绘制革兰染色镜下细菌图,班擂摘丫恬窜迎歼氧捶认赣史蟹就呼源咸告瘴音惯我为襟痞莱貉买走毁崭实验3：革兰氏染实验3：革兰氏染,