细菌生理生化反应.ppt

2023/6/3,细菌生理生化反应,2010.10 2010.12,2,目的要求 学习并掌握细菌分类鉴定中常用的 生理生化反应。,3,实验原理,细菌的代谢与呼吸，主要取决于酶的催化作用，各种细菌具有不同的酶系统。不同的细菌分解大分子碳水化合物、蛋白质和脂肪的能力不同，所能发酵的类型和终产物也不一样。细菌代谢类型的多样性，具体表现在生化反应多样性，因此在细菌分类鉴定中，常利用其生理生化反应作为重要依据。,4,糖发酵试验,在肠道细菌的鉴定上尤为重要细菌可发酵的基质 糖（葡萄糖、蔗糖、乳糖）醇（甘露醇）糖苷（甘油）发酵后产生的有机酸 乳酸、醋酸、丙酸等发酵后产生的气体 甲烷、氢、二氧化碳等,5,葡萄糖发酵试验乳糖发酵试验,指示剂：溴甲酚紫（变色范围pH5.2-6.8,pH6.8紫色）安装倒立的徳汉氏氏小管（内充满液体）,6,乙酰甲基甲醇试验（V.P.试验）甲基红试验（M.R.试验）,细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖，所产生的丙酮酸，可被进一步代谢。细菌体内丙酮酸代谢途径的不同，可通过V.P.和M.R.这一对实验进行鉴别。,7,V.P.反应阳性途径：,8,吲哚产生试验,判断细菌是否（含色氨酸酶）能利用色氨酸。,9,实验材料,1.大肠杆菌（Escherichia coli）2.产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes)3.普通变形杆菌(Proteus vulgaris),10,实验方法与步骤,（一）液体培养基的制备与灭菌 1）蛋白胨培养基：蛋白胨 4.0 gNaCl 2.0 gH2O 400 mL 调pH 7.6，分出2管，然后加0.5ml 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液,溶液呈浅紫色；分装到装有倒立的德汉氏小管的试管中（6管）,11,2）10%葡萄糖溶液，10%乳糖溶液各20ml 112度，30分钟灭菌 3支德汉氏管中加葡萄糖溶液各1ml 3支德汉氏管中加乳糖溶液各1ml,12,3）葡萄糖蛋白胨培养基：葡萄糖0.5 g蛋白胨0.5 gK2HPO40.2 gH2O100 mL分装2管,13,（二）接种培养,14,（三）反应结果鉴定,葡萄糖/乳糖发酵试验 直接观察。VP试验：去塞，加40KOH 10滴，再加等量5%奈酚，用力振荡，37培养30min，观察。吲哚试验：加1ml乙醚（作用是萃取出吲哚）。振荡，静止片刻使分层，沿管壁慢慢加入吲哚试剂10滴，观察。,