生化基础知识-比色法.ppt

比色法原理(分光光度法),多么美丽五彩斑斓的春天啊,为什么上述溶液呈现不同的颜色？,自然光-赤橙黄绿青蓝紫,波长决定颜色,光谱-连续不同波长光的集合,物质对不同波长光的选择性吸收,由于物质对不同波长光的选择性吸收而引起，物质呈现的是被吸收颜色的互补色。,单色光互补光复色光,现在知道她的秘密了吗？,脑筋急转弯,1、红光照射红色溶液，看透过什么色？,2、红光照射绿色溶液，看透过什么色？,透光度（透射比）Transmittance,透光度定义：,T 取值为0.0%100.0%,吸光度定义：,T、A与颜色的关系 透光率（T）吸光度（A）1 0.000 0.75 0.125 0.5 0.301 0.25 0.602 0.17 0.770 0.1 1.000 0.05 1.301 0.01 2.000 0.001 3.000,？,测量物质光吸收的装置-比色计,比色计或分光光度计,物质的光吸收曲线-定性分析,吸光度与光径的关系,吸光度与浓度的关系,朗伯-比尔定律：A=-lgT=KCL,透光度（transmittance，T，透射率）TIt/I0吸光度（absorbance，A）光密度（optical density，D或OD）A-lgT lg I0/ItLamb-beer定律：AKCL K为吸光系数，C为浓度，L为光径cm摩尔吸光系数:当C1mol/L，L1cm，A=,比色定量与标准浓度物质溶液比较,比色计或分光光度计,比色法成立的基础,有色或有吸收单色光,