《细菌菌落计数》课件.ppt

细菌菌落计数,直接法血球记数板活菌染色：美蓝、吖啶橙、TTC间接法,细菌计数板和血球计数板都用来侧微生物的总菌数。血球计数板用来测较大微生物如酵母菌和霉菌孢子的总数，细菌计数板用来测细菌的总菌数。两种计数板的构造相似，不同的是细菌计数板的深度仅为血球计数板深度的1/5。,直接法血球记数板,间 接 法,平板菌落计数法(Colony-counting Methods)一个活菌在合适的培养基表面，逐渐生长成一个 肉眼可见的菌落（菌落形成单位，colony forming unit,CFU），从而得知原始活菌含量。涂布平板法Spread Plate浇注平板法Pour Plate,间 接 法平板菌落计数法,涂布平板法,浇注平板法,方法：1.以无菌操作方法用灭菌吸管吸取 0.9 ml生理盐水，分别 加入6支灭菌EP管中。2.以无菌操作方法吸取0.1ml充分混匀的待检样本，注入盛有0.9ml灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:10稀释液。3.吸取1:10的稀释液0.1ml注入盛有0.9ml灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:100稀释液。按同法依次稀释成1:1000，1:10000稀释液等备用。（如此递增稀释一次，必须更换一支1ml灭菌吸管）4.用灭菌吸管取23个适宜稀释度的稀释菌液0.1ml，分别注入灭菌平皿内，每个稀释度重复做两个平板，涂布均匀后，置37，培养24-48h。,0.1ml,0.1ml,0.1ml,0.1ml,0.1ml,0.1ml,0.1ml,适用领域：1.广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。2.疾病诊断*泌尿系感染性疾病的诊断-尿培养 3.细菌感染及药物治疗效果*临床病人*实验动物,3、菌落计算方法（1）菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。（2）菌落计数的报告平板菌落数的选择 选取菌落数在30300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。,结果：总活细菌数（CFUs/ml）=某一稀释度的平均菌落数 10稀释度*注意事项见实验讲义,