第十四章维生素类药物的分析AnalysisofVitamins.ppt

第十四章 维生素类药物的分析 Analysis of Vitamins,Pharmaceutical Analysis,学习要求掌握维生素A、维生素B、维生素C、维生素E的化学结构、理化性质以及与分析方法间的关系，它们的专属鉴别反应、主要的含量测定方法与原理。熟悉维生素A、维生素B、维生素C、维生素E的有关物质、检查方法与原理。了解维生素D性质和分析特点。,维生素：是维持人体正常代谢机能所必需 的微量营养物质。脂溶性：VitA、D2、D3、E、K1 等 水溶性：VitB族(B1、B2、B6、B12)、VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺,维生素的共同特点：这些化合物或其前体化合物都在天然食物中存在；它们不能供给机体热能。也不是构成组织的基本原料，主要功用是通过作为辅酶的成份调节代谢过程，需要量极小；它们一般在体内不能合成，或合成量不能满足生理需要，必须经常从食物中摄取；长期缺乏任何一种维生素都会导致相应的疾病。,维生素缺乏导致的病症,维生素A缺乏夜盲症、干眼病（动物内脏、富含胡萝卜素的蔬菜水果）维生素B1缺乏脚气病（谷类、豆类、坚果类、瘦猪肉及动物内脏）维生素C缺乏坏血病（新鲜蔬菜和水果）维生素D缺乏小儿佝偻病与成人骨软化病(足够的日光、海鱼、动物内脏、蛋黄)维生素E缺乏一般不缺乏（体内驻留时间长）。（植物油）,R:-H 维生素A醇-COCH3 维生素A醋酸酯-COC15H31 维生素A棕榈酸酯,第一节 维生素A,一、结构与性质,环己烯,共轭多烯醇,结构特点：,（1）环己烯+共轭多烯侧链；（2）天然VA侧链为全反式；（3）天然来源主要是鱼肝油，为醋酸酯，棕榈酸酯等,目前多由人工合成。,性质：1、紫外吸收具有共轭多烯侧链紫外吸收。最大吸收波长在325328nm，随VA存在状态以及所用的溶剂，最大吸收波长的位置有所不同。有干扰物质存在（VitA2、VitA3、鲸醇）。,VitA2,VitA3,鲸醇,脱水,去氢,二聚体,2、不稳定性：共轭多烯侧链易被氧化，或有金属离子存在时氧化,环氧化物,VitA醛,VitA酸,CHCl3,3.与三氯化锑发生呈色反应（鉴别、含量测定）,4.溶解性：不溶于水，易溶于有机溶剂和植物 油等。,条件：无水、无醇,CHCl3,二、鉴别试验,1.三氯化锑反应,蓝色,紫红,注意事项：无水水可使三氯化锑水解成氯化氧锑（SbOCl）白色沉淀，干扰比色。无醇乙醇可以和碳正离子作用使其正电 荷消失。,max326nm一个吸收峰,max350390nm三个吸收峰,2、UV法（BP 2000）,去水VitA（VitA3）,VitA,3、TLC法 BP 杂质对照品法 显色剂：三氯化锑 USP 显色剂：磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值,三、含量测定UV法:三点校正法（ChP 2010 第一法）三氯化锑比色法HPLC法（ChP 2010 第二法）,1、为何要采用三点校正法？维生素A原料药中常混有杂质，如维生素A2、维生素A3等，这些杂质在维生素A的最大吸收波长附近有吸收，采用三点校正法可以消除这些杂质的干扰。2、测定原理1）在310340nm范围内，杂质吸收呈一直线，且随波长的增大吸收度下降。2）物质对光吸收呈加和性。,三点校正法,3、波长的选择：一点选在维生素A的最大吸收波长处（1），其它两点选在1的两侧。第一法（等波长差法）波长为1=328nm、2=316nm、3=340nm；测定对象：VA醋酸酯第二法（等吸收比法）波长为1=325nm、2=310nm、3=334nm；测定对象：VA醇,4、测定方法首先判断用哪个吸收度(A328 or A328(校正)）进行含量计算。第一法：供试液浓度为915IU/ml，溶剂为环己烷，在300、316、328、340、360nm五个波长处测定吸收度。1）最大吸收波长在326329nm之间，计算吸收度比值Ai/A328，并与规定值相减，差值不超过0.02，则用A328计算含量。,2）如果最大吸收波长在326329nm之间，5个波长下的差值有一个或几个超过0.02，这时先计算A328（校正）：,A328（校正）=3.52（2 A328-A316-A340）,A328（校正）-A328-100%A328,再计算,若所得的数值在3%，则仍用A328计算含量；若所得的数值在-15%-3%之间，则用A328（校正）计算含量；若所得的数值小于-15%或大于+3%，或最大吸收波长不在326329nm之间，则应采用第二法测定。,三点校正法第一法步骤小结：最大吸收波长是否在326-329nm间 符合-，不符合第二法：测定指定波长吸收度：计算（A指定波长/A328）比值,并与规定值比较 符合-，不符合：计算校正吸收度，并与实测值比较，判断是否需要校正：计算328nm处样品的E 1cm1%：计算效价及标示量的百分含量,维生素A醋酸酯的换算：IU/g=E 1cm1%1900,IU/丸 标示量%=100%标示量,第二法（皂化法，适用于维生素A醇）,第一法无法消除杂质干扰时用此法,5、讨论 1）维生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法推导而来：维生素A醇的吸收度校正公式是用相似三角形法推导而来。2）在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。如果仪器波长精度不准确时，会产生较大误差。因此，在测定前务必要校正波长，并可用全反式维生素A进行测定，比较测定结果和比值是否与对照品相符合，以进一步核对仪器波长是否准确。测定的样品应不得少于两份。3）中国药典（2010年版）收载的维生素A软胶囊采用三点校正法测定。,VitAD胶丸中VitA的含量测定 精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度，求本品中维生素A的含量。,A300：0.354A316：0.561A328：0.628A340：0.523A360：0.216,A300/A328：0.555A316/A328：0.907A328/A328：1.000A340/A328：0.811A360/A328：0.299,规定比值,A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.833A360/A328：0.344,0.555 0.907 1.000 0.811 0.299,+0.010.01 0+0.02+0.04,=,优点：简便、快速 缺点：呈色不稳定（510s内）水分干扰（反应需要无水条件）专属性差（有关物质的干扰）三氯化锑有腐蚀性（注意安全）,max 618nm620nm,2、三氯化锑比色法(标准曲线法),3、HPLC法（ChP2010新增的分析方法）适用于维生素A醋酸酯原料及其制剂中维生素A的含量测定。,第二节 维生素E,一、结构与性质 名称：消旋生育酚醋酸酯 母核：苯骈二氢吡喃衍生物 苯环上有一乙酰化的酚羟基 侧链：脂肪烷烃,化学性质：1、易溶于有机溶剂，不溶于水2、UV:284nm(乙醇)3、酯键易水解4、对氧敏感，易氧化,橙红色,二、鉴别,1.硝酸反应（chp2010）,取本品约30mg，加无水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在75加热15分钟，溶液应显橙红色。,生育红（橙红色）,生育酚,HNO3,强氧化剂,2.三氯化铁联吡啶反应,红色,生育酚,对-生育醌,弱氧化剂,3.UV法,284nm,254nm,4.TLC法,薄层板 硅胶G,展开剂 环己烷-乙醚（4：1）,显色剂 硫酸（105 5）,VitE Rf=0.7,三、检查：游离生育酚,硫酸铈滴定液（0.01mol/L）指示剂：二苯胺（亮黄灰紫）,2.试剂,1.原理：利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈,3、方法,取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过 1.0ml。,四、含量测定,1.GC法（ChP2010）,载气N2固定液硅酮（OV-17）担体硅藻土或高分子多孔小球柱温265检测器FID内标正三十二烷,色谱条件,适用性试验,n 500，R2,2、JP-RP-HPLC法,样品 dl生育酚固定相十八烷基硅烷键合硅胶流动相甲醇-水（49：1）检测波长292nm R2.6 RSD0.8%,色谱条件,原理：利用生育酚的易氧化性,指示剂：二苯胺（亮黄灰紫）,3、铈量法,氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱),Cl-HCl,第四节 维生素B1,一、结构与性质,3.硫色素反应,4.碱性：嘧啶环 伯氨，噻唑环 季铵,可与酸成盐 与生物碱 含量测定 非水碱量法,1.溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性2.UV:246nm(盐酸液),1.硫色素反应（维生素B1专属反应）,二、鉴别试验,H+,H+,2.沉淀反应,H+,3、硝酸铅反应,4、氯化物反应,三、含量测定,1.非水溶液滴定法（ChP2010）,喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）,加入醋酸汞的目的消除氢卤酸盐对非水滴定的干扰。,2.UV法,246nm,3.硫色素荧光法,NaOH,自学-维生素D:了解杂质检查中麦角甾醇的检查；2.初步掌握正相高效液相色谱法的应用。,L抗坏血酸,第五节 维生素C,一、结构与性质,1.强还原性：烯二醇结构,50,2.结构与糖类相似，具糖的性质-糖类的显色反应,3.UV特征(243nm),4.溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性。,5.酸性：一元酸,C3OH，pKa=4.17,C2OH，pKa=11.57,6.水解反应：与碱反应,二、鉴别试验,1.与氧化剂的反应,1)与AgNO3反应(ChP2010),2)与2，6-二氯靛酚反应(ChP2010),氧化型,玫瑰红色,（还原型）,3)与碱性酒石酸铜反应（USP）,4)与KMnO4反应,2.糖类的反应,糠醛：,3.UV,0.01mol/L HCL液中，max243nm,指示剂：淀粉指示液,三、含量测定1.碘量法（ChP2010）,取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6,酸性环境：减慢VitC被O2氧化速度新沸冷H2O：赶走水中O2 立即滴定：减少O2的干扰附加剂干扰的排除：,片剂 滑石粉 过滤,注射剂 抗氧剂 丙酮,Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5,2.2，6-二氯靛酚滴定法,自身指示剂终点法,（1）酸性环境（HPO3-HAc）：,稳定VitC,（2）快速滴定（2min内）：,防止其他还原性物质干扰,（3）剩余比色测定,（4）缺点,需经常标定,贮存一周,干扰多 氧化力较强,（5）专属性比碘量法高，多用于维生素C 制剂的分析。,不稳定,在三氯醋酸或盐酸存在下，经水解、脱羧、失水后，加入吡咯即产生蓝色产物的药物应是 A.氯氮卓 B.维生素A C.普鲁卡因 D.盐酸吗啡 E.维生素C,习 题,中国药典（2005年版）采用以下何法测定维生素E含量 A.酸碱滴定法 B.氧化还原法 C.紫外分光光度法 D.气相色谱法 E.非水滴定法,下列药物的碱性溶液，加入铁氰化钾后，再加正丁醇，显蓝色荧光的是 A.维生素A B.维生素B1 C.维生素C D.维生素D E.维生素E,既具有酸性又具有还原性的药物是 A.维生素A B.咖啡因 C.苯巴比妥 D.氯丙嗪 E.维生素C,测定维生素C注射液的含量时，在操作过程中要加入丙酮，这是为了 A.保持维生素C的稳定 B.增加维生素C的溶解度 C.使反应完全 D.加快反应速度 E.消除注射液中抗氧剂的干扰,能发生硫色素特征反应的药物是 A.维生素A B.维生素B1 C.维生素C D.维生素E E.烟酸,可发生以下反应或现象的药物为 A.维生素B1 B.维生素C C.两者均能 D.两者均不能 1.与碘化汞钾生成黄色沉淀 2.麦芽酚反应 3.在乙醚中不溶 4.与2,6-二氯靛酚反应使颜色消失 5.硫色素反应,A,D,C,B,A,维生素A的鉴别试验为 A.三氯化铁反应 B.硫酸锑反应 C.2,6-二氯靛酚反应 D.三氯化锑反应 E.间二硝基苯的碱性乙醇液反应,维生素E在酸性或碱性溶液中加热可水解生成游离，当有氧或其他氧化剂存在时，则进一步被氧化成醌型化合物。,生育酚,维生素C是 元弱酸，具有强 性，易被氧化剂氧化，常用作其它制剂的 剂。,一,还原,抗氧,