免疫学实验课沉淀反应.ppt

1,免疫学诊断、沉淀反应,2,实验室安全门窗、水、电、火源实验结束后关闭门窗、水、电、火源酒精灯和易燃物的使用注意事项；棉塞着火须报告老师电源空气开关水的使用实验室安全生物安全白大褂的穿着要求不得将实验无关物品带入实验室不得在实验室内饮食不得擅自开UV灯污染及潜在污染物品须进行消毒处理,实验室规则要点,3,实验课要求遵守上述规则必备物品：实验指导、实验报告、红蓝铅笔、白大褂注意保护自己、爱惜实验室仪器和设施按照实验要求，认真完成实验并如实记录实验报告实验结束后整理本组的台面实验废弃物分类（污染/潜在污染物、普通废弃物）放置；在确认普通废弃物没有着火隐患后，倒入垃圾桶,实验室规则要点,4,值日生的职责：检查实验台面的整理整理实验室及垃圾关闭所有非必需的电器和电源逐一检查并确认水槽水龙头的关闭关闭窗、门最后离开实验室,实验室规则要点,5,1.录像2.双向免疫扩散试验（操作）3.对流免疫电泳（示教）,本次实验内容,6,类型：单向免疫扩散,免疫比浊法,双向免疫扩散,对流免疫电泳,沉淀反应:可溶性抗原（血清蛋白质、细胞裂解液、组织浸液、微生物蛋白等）与相应抗体，在一定的抗原抗体比例下，在一定离子浓度的缓冲体系中，发生结合后出现沉淀物称沉淀反应。沉淀原，沉淀素。环状法、絮状法、琼脂扩散法,7,2.可见性,3.可逆性,1.特异性,抗原抗体反应的特点（比例合适!）,8,(三)影响抗原抗体反应的因素,1.温度：一般最适温度为37 4，过夜,2.电解质：常用生理盐水 离子强度，盐析,3.pH：一般最适pH6-8 电荷，等电点,9,(1)单向免疫扩散,抗原的定量技术Method:Ab-in gel Ag-in well,10,该方法常用于患者血样中IgG、IgM以及C3含量的检测Q:如使用单向免疫扩散试验检测患者血样中的IgG，那么患者血样是放在琼脂糖胶中，还是放入孔中？,11,(2)双向免疫扩散,抗原或抗体的定性、组成和两种抗原的相关性分析。抗原抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向四周扩散;两者相遇时在比例合适处形成沉淀线。,抗原,抗体,12,13,双向琼脂扩散试验,14,(3)对流免疫电泳检测血清中AFP,1、3孔加抗AFP抗体2孔，AFP阳性对照血清4孔，待检血清pH 8.6巴比妥缓冲液,1,2,3,4,+,-,15,电场力,pH8.6,pI7.5,pI4.8,琼脂糖：在pH8.6的缓冲液中带负电,与琼脂糖接触的可移动液体：带正电,电渗力,合力移动方向,16,对流免疫电泳,17,双向免疫扩散实验(操作),1.琼脂板的制备(3-5ml)；2.打孔；3.加样；4.湿盒扩散；37C，24h,1,2,3,4,5,6,Ag,1,2,3,4,5,6,Ag,Note1块玻片上打2套孔，选较好的进行后续试验；注意检查加样样品是否正确，加样时勿溢出；将玻片的左上切去一小角，按上图顺序加样；加样时注意检查试管和吸管标识，勿将吸管放错。,中央孔加抗AFP血清，1、4孔加阳性对照，2、3、5、6孔加待检,