血清葡萄糖的测定.ppt
（GOD-POD法）,实验九血清葡萄糖浓度的测定,CONTENTS,1.相关临床知识,血液中的葡萄糖称为血糖。,1.相关临床知识,空腹血糖3.9-6.1 mmol/L,正常餐后两小时,糖尿病,空腹,餐后两小时,7.0mmol/L,11.1mmol/L,1.相关临床知识,胰岛B细胞,靶细胞,胰岛素,I 型糖尿病（T1DM）别名：青年发病型糖尿病或胰岛素依赖性糖尿病。原因：胰腺产生胰岛素的细胞已经彻底损坏。易发病人群：年龄轻，大多30岁治疗：依赖胰岛素治疗,II 型糖尿病（T2DM）别名：非胰岛素依赖型糖尿病原因：自身能产生胰岛素，但细胞无法对其做出反应。易发病人群：中老年人，肥胖者治疗：需要胰岛素单独或与口服药联合应用的治疗,有些患者血糖含量并不稳定，有什么办法进一步更准确诊断？,1.相关临床知识,口服葡萄糖耐量试验（OGTT）,概念：是一种葡萄糖负荷试验，用以了解胰岛细胞功能和机体对血糖的调节能力，是诊断糖尿病的确诊试验,原理：正常人进食糖类后血糖会暂时升高，0.51小时后升到最高峰，但不超过8.9mmol/L，2小时后回到空腹水平。,1.相关临床知识,OGTT操作步骤,1）.试验前3天内，每日碳水化合物摄入量不少于150g。,2）.空腹取血后，5分钟内口服溶于250300ml水内的75g无水葡萄糖粉的糖水，妊娠妇女用量为100g，儿童按1.75g/kg体重给予，不超过75g.,3）.服糖后半小时、1小时、2小时、3小时分别在前臂采血测血糖,采血同时，每隔1小时取尿液作尿糖试验。试验过程中，受试者不喝茶及咖啡，不吸烟，不做剧烈运动,4）.OGTT 2小时后血糖11.1mmolL可以确诊糖尿病,OGTT诊断1.当静脉空腹血糖6.1mmolL，OGTT 2小时血糖7.8mmolL，说明人体对进食葡萄糖后的血糖调节能力正常。2.当静脉空腹血糖7.0mmolL或OGTT 2小时血糖11.1mmolL，说明人体处理进食后葡萄糖的能力明显降低，可以确诊糖尿病。3.当静脉空腹血糖7.0mmolL，并且OGTT 2小时血糖介于7.811.1mmolL之间，说明人体对葡萄糖的调节能力轻度下降，可以诊断糖耐量减低。4.当静脉空腹血糖介于6.17.0mmolL之间，且OGTT 2小时血糖7.8mmolL，说明人体对进食葡萄糖后的血糖调节能力尚好，但对空腹血糖调节能力轻度减退，可以诊断空腹血糖受损。,1.相关临床知识,2.实验目的,1.掌握酶法测定血清葡萄糖浓度的原理2.掌握血糖变化的临床意义,3.实验原理,血糖测定的方法有哪些？,（一）无机化学法：Folin-Wu法，基于葡萄糖醛基的还原性,（二）有机化学法：邻甲笨胺法，联笨胺法等,（三）酶法,Cu2+,OH-,Glu,Cu+,磷钼酸,显色,1.己糖激酶法（HK）2.葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）,邻甲笨胺+Glu,葡萄糖基胺,蓝绿色化合物,分子重排,脱水,希夫氏碱,缩合,特异性差,3.实验原理,葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）,葡萄糖氧化酶（GOD）将葡萄糖氧化为葡萄糖酸酶，同时释放过氧化氢。,过氧化氢酶（POD）催化过氧化氢氧化色素原（如4-氨基安替比林和苯酚），并使色素原氧化成红色醌类化合物，即Trinder反应。,红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。,葡萄糖+O2+H2O,葡萄糖酸+2H2O2,GOD,2H2O2+4-氨基安替比林+苯酚,红色醌类化合物,POD,4.实验器材和试剂,(一）器材5ml移液管，微量可调式移液管，721E分光计，37恒温水浴（二）试剂1.苯甲酸钠溶液（12mmol/L）2.酶酚混合试剂 酶试剂+酚溶液 1:13.葡萄糖标准工作液（5mmol/L）,防止氧化，葡萄糖为单糖,含醛基,易氧化成羧基,5.实验操作,取试管3支，按表操作,混匀，置37水浴中，保暖25min,在波长510nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管的吸光度。,计算公式,血清葡萄糖浓度=,A测定,A标准,5mmol/L,参考值 空腹血清葡萄糖浓度：3.896.11mmol/L,临床意义,1.生理性高血糖 可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。2.病理性高血糖 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进，引 起各自对抗胰岛素的激素分泌过多，或升高血糖的激素增多引起的高血糖 现已归入特异性糖尿病中。颅内压增高：可刺激血糖中枢，如脑膜炎，颅外伤，颅内出血等，引起血糖增高。脱水引起的高血糖：如呕吐，腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。3.生理性低血糖 见于饥饿和剧烈运动时。4.病理性低血糖 特发性功能性低血糖最多见，其次是药源性，肝源性和胰岛素瘤等。,注意事项,1.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。这是因为尿液中的尿酸等干扰性物质浓度过高，可干扰过氧化氢酶反应，而造成假性偏低。2.对于血液样品需及时分离血细胞。因红细胞的酵解将导致测定结果偏低。建议测定样品以草酸钾-氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解。3.严重黄疸，溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。,THANKS,
