血涂片的制备与染色.ppt

血涂片的制备与瑞氏染色基本原理,血涂片制备与染色 外周血涂片检查是最有益的血液系统疾病检查手段，能为临床提供大量的信息。因此，血涂片制备和染色的质量直接影响血细胞形态的检验结果。一张合格的血涂片应该是厚薄适宜，血膜头、体、尾分明，分布均匀，两侧留有一定的空隙，边缘整齐。,一、血涂片制备（一）载玻片要求 制备血涂片使用的载玻片要有很好的清洁度。新载玻片常有游离碱质，应用铬酸清洗液或10%盐酸浸泡24h，然后再彻底清洗。已用过的载玻片可在含有适量肥皂水或合成洗涤剂的水中煮沸20min，用热水将肥皂和血膜洗去，再用自来水反复冲洗，擦干或烤干后备用。,（二）血涂片制备方法 1手工推片法（1）薄血膜推片法（表1-4-2）：临床常用的方法，主要用于观察血细胞形态及仪器法检测结果异常的复查。,（2）厚血膜涂片法：取新鲜血液1滴于载玻片的中央，用推片的一角将血滴由内向外旋转涂布，制成厚薄均匀、直径约1.5cm的圆形血膜，待自然干燥后，滴加数滴蒸馏水，使红细胞溶解，脱去血红蛋白，倾去水，血涂片干燥后即可染色并用显微镜检查。本方法特别适合检查疟原虫、微丝蚴等。,2自动涂片法 目前有许多型号的自动血液分析仪，配备有血涂片仪和染色仪，可以按照检验人员的指令执行自动送片、取血、推片、标记和染色等任务。【方法学评价】良好的血涂片是血细胞形态学检查的前提。血涂片制备的方法学评价见表1-7。,【质量保证】薄血膜推片法的质量保证项目与评价见表1-8，血涂片质量问题及可能的原因见表1-9。,（一）染料 1碱性染料、酸性染料和复合染料，其组成与特点见表1-10-0。,（二）染色方法 1Wright染色法（1）染色原理 1）物理吸附与化学亲和作用：血涂片染色过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用。由于血细胞内不同结构所含有的化学成分不同，对各种染料的亲和力也不同（表1-10）。,2）pH值的影响：血细胞多种成分属于蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随着溶液的pH而定。因此，血细胞染色对氢离子浓度十分敏感。,染色时常用缓冲液（pH6.46.8）来调节染色时的pH值，以达到满意的染色效果（表1-11）。,（2）试剂 1）Wright染液：Wright染液是由伊红和亚甲蓝溶解于甲醇而成。甲醇的作用：溶解伊红和亚甲蓝。具有很强的脱水作用，可以固定红细胞形态，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。2）磷酸盐缓冲液（pH 6.8）,（3）染色方法与结果判断：染色方法见表1-11-1。,2Giemsa染色法（1）染色原理：与Wright染色法基本相同。Giemsa染色法加强了天青的作用，提高了噻嗪类染料的效果。（2）试剂：染液放置越久，其染色效果越好。,（3）染色：Giemsa染色法的步骤与方法见表1-11-2。,3Wright-Giemsa染色法 Wright-Giemsa染色法结合了Wright染色法和Giemsa染色法的优点。在Wright染液配方的基础上，每1.0g Wright染料添加0.3g Giemsa染料。染色步骤与Wright染色法相同。【方法学评价】血涂片染色的方法学评价见表1-12。,【质量保证】染色过深、过浅与血涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、染液浓度、pH密切相关。Wright染色的质量保证见表1-13。血涂片染色不佳的原因及纠正措施见表1-14。,谢谢！,