细菌涂片制备及染色.ppt

实验二 细菌的涂片及染色,目的要求染色剂及染色原理实验材料实验步骤思考题,本次实验内容,一、目的要求,学习细菌涂片的基本技术掌握细菌的简单染色和革兰氏染色法,二、微生物染色的基本原理借助物理和化学因素的作用而进行1、物理因素如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等。2、化学因素如：正负离子之间的相互吸引等,染色剂，按其电离后所带电荷的性质分：1、酸性染料酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑2、碱性染料碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶紫、美兰、甲基紫等，细菌易被碱性染料染色,3、中性染料：伊红、美兰等，Wright染料和Gimsa染料等（常用于细胞核染色）4、单纯染色：这类染料的化学亲和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类的染料。,三、实验材料,菌种 牙垢细菌；大肠杆菌24 h培养液；枯草杆菌12 h 培养液载玻片、接种环、镊子、酒精灯、染色液、火柴显微镜、吸水纸、酒精乙醚溶剂,四、实验步骤,(一)细菌染色方法 1单染色法：用一种染色液染菌体后，就可以观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物及它的特殊构造 2复染色法：用两种或两种以上染色液进行，常用：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法、细胞染色法等染色技术：涂片 干燥 固定 染色 媒染 脱色 复染水洗 干燥 镜检,四、实验步骤,(二)牙垢细菌单染色法 菌种：牙垢细菌涂片干燥：自然气干或酒精灯高处微微加热固定染色：在整个涂面上滴加石碳酸复红，染色1 min水洗：倾去染液，用自来水细流冲洗至流下水中无染料颜色为止干燥：空气中自然干燥镜检：在油镜下观察牙垢中的各种细菌形态并绘图,示范照片,简单染色视频,四、实验步骤,(三)革兰氏染色法,革兰氏染色是Gram发明的一种细菌鉴别染色法，通过染色，可将细菌分为两大类：一类被染成紫色，称为革兰氏阳性细菌，另一类被染成红色，称为革兰氏阴性细菌。这种染色的结果主要与细菌的细胞壁结构和化学组成有关。,步骤,涂片初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1 min，倾去染液，流水冲洗至无紫色媒染：先用新配的碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1 min，后水洗脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约30 sec，后立即用流水冲洗复染：滴加番红染色液，染1 min，水洗后用吸水纸吸干镜检：观察染色结果并绘图,革兰氏染色视频,思考题,要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作？,注意事项,革兰氏染色成败与否与许多因素有关 菌龄 涂片厚薄 脱色时间（最为关键）,