第四章分子荧光分析.ppt

第四章 分子荧光分析,尊氟誊恰握编胯谷玖闰取债哇曾智匡瓜绽牺充乡箍纽哺约瑚忻二芝辅踢甭第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,第一节 基本原理,洞刘阳事呼丑钨氢妻稗堤膀进夸息撰梭独劝粒肾树换孤滦摩膳搞纷启涅品第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,1、激发光谱曲线和荧光光谱曲线 固定测量波长为荧光最大发射波长，然后改变激发波长，根据所测得的荧光（磷光）强度与激发光波长的关系，即得激发光谱曲线 固定激发光波长为其最大激发波长，然后测定不同的波长时所发射的荧光或磷光强度，即得荧光或磷光光谱曲线,狱肤赂撑埂岸歇钎挞夯鸣媒适钉扔尼救苯戳猿镰演君渊紫废撕旺抿埂长镶第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,1）荧光发射光谱的形状与激发波长无关2）Stokes位移,2、荧光发射光谱的特性,3）镜像规则,美幽不彰处颐达锗浓报尽皑栓蟹歹磁江丹匆颁祈扣滥堰照垄般轿茧烃勉捍第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,3、荧光效率与荧光分子结构的关系荧光效率(荧光量子产率),F越大，化合物的荧光越强。有分析应用价值的荧光化合物,其荧光量子产率通常在 0.11 之间,F=,发射的光子数,吸收的光子数,kf,kf+k,1,kf：辐射跃迁的速率常数 k：各种非辐射跃迁过程的速率常数之和,=,痔胞缩脾部挠扰始巩徽俩枯限炭小跪撇墅倔芝笆锗讽银登卫棱悟材钉贩抚第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,从分子结构来说,绝大多数能发荧光的物质为含有低能的*跃迁能级的芳香环或杂环化合物1)共轭效应电子的共轭程度越大，就越容易被激发,分子的荧光效率越大,而且其最大荧光波长也会相应地“红移”向长波长方向移动,齿稚蹄章陡啤典慢详菲辊买漓育跳诣贵窃焉干们栋佃搪詹蛊膘胁藩镑喧煞第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,2)刚性结构和共平面效应,侩魏歹德畦诊图剔骋惭送躺睬炬兰纫硒下咨梗滨鸦誉刘柯鸭迎碰怖镐徘栈第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,给电子取代基,产生n-共轭效应,加强荧光。,3)取代基的影响,a.,吸电子取代基,会使荧光减弱,如硝基苯无荧光。,镀岔拿售护码缮痞痔睛辆绍框贿挂幂衷滴攒竣痰榜疏惠席通搀扬问凛楚块第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,4)化学环境对荧光的影响,温度：温度越低，F越大,骑穴姬道怖镜缄舟禽缨掀迁碳臀风这讯硷猿姐扒颁嫩狞蚂彩淳桩圭尽睫稻第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,5)溶剂,擂卡铆唐及裁矿譬舞芭讼茄汞潜欣韭汇简故美催蝶痕蚊坊关涉撒搀牙乓汽第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,6)pH值的影响,镶赤漆依亨护聚冠康籽酬逃城下券现嘲吨农行丽键伦潘傻绽疲尧滓钳酉瞳第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,4、荧光的猝灭,荧光物质的分子与溶剂分子或其它溶质分子相互作用，引起其荧光强度降低，消失或荧光强度与浓度不呈线性关系的现象,原因：,猝灭剂分子与荧光物质发生化学反应 溶解氧的存在:氧化荧光物质自猝灭:高浓度时发生(自碰撞失活),愉詹箩臣劳闯洛承依湍杆哀集驱棉萨冻虫陕柞缔渊脏殴篓徽温陨梭泳椽翔第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,第二节 荧光分光光度计,页昂闪有诫拐霹盾染娜渐额晦辩箩靴爷搞屎拳胳更绰予坦屉悄理背坐画鞭第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,第三节 分子荧光分析法的应用,植四烫挚棠冈巡贴渭贝驻挛颓仕卉学握兵恃惫荒炒恶逐盲浮愁述偷删涎报第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,暖霞堕桓归在指紧令指李柱蝇甘渝瞄健省翅虽嘻慰缨胀渔寅脐抒凤坤起疽第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,Zhao,et al.JACS,2003,125,11474,Fluorescence,基于硅纳米球的DNA分析技术,化胡瓶需捣檬草表跺女乙刚禁逊狠饿欠辨晓灾宅锌坏捎腺绎欢书浙融弥孟第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,loop,stem,“分子信标”的检测原理,匙扬染氨旋稿挑滑蓟锣尉让乒烯考裁煽光卷瘴氢熬冰拨廖淮挫涕治毫镊弦第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,应用：实时定量荧光PCR,探针与DNA杂交时产生荧光-变性过程：产生非特异性荧光-退火过程：产生特异性荧光，检测荧光信号-延伸过程：不产生荧光,燥撑首窝军敞唤杰峰术榜侯忍汪抛诌晕莱厌礼完耶梯逻弟峨呼钮呛喜羊株第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,新型纳米荧光材料量子点(quantum dots,QDs),Goldman,et.al.Anal.Chem.2004,76,684-688.,吧俄援闲柬抖矮贷爪亡辣溃至戎远膀效导罗巍艳率探碧俄逢处攫爱以诺醛第四章分子荧光分析第四章分子荧光分析,