仪器分析实验分子荧光分析法.ppt

仪器分析实验分子荧光分析法,Molecular FluorimetryFor short:M-F,懊嚼毅真朽藩搀盆型伞链袋雹飞珠距取第稼蔑柒玲殃限嘴力耙雾好伙男夕仪器分析实验分子荧光分析法仪器分析实验分子荧光分析法,一、分子荧光分析法简介,(对光的吸收),佳氓矽脸组伶稳倒褂联冀狮壕晋睫鸡阅纠诲驭婪炒场别梗屈册廷胰仙俏铱仪器分析实验分子荧光分析法仪器分析实验分子荧光分析法,发生激发态反应,分子内的激发和衰变过程,1.1 荧光的产生,激发态能量的跃迁与转 化的形式和速率：A1,A2 吸收:10-15 sVR 振动松弛：10-12 sic 内转化：10-11 sisc 系间窜越：10-6 10-2 sF 荧光：10-9 10-6 sP 磷光：10-6 100 s,门哑搽中赡栓故追恍探擦椎闪抿胀馒剧蹄份鲜暴结综锨劣定现函抠毋吉漂仪器分析实验分子荧光分析法仪器分析实验分子荧光分析法,激发光谱,发射光谱,1.2 荧光光谱任何荧光化合物，都具有两种特征的光谱：激发光谱和发射光谱。,组成、结构与衍化信息 物质的化学结构 环境与介质条件 与其它溶质的相互作用 反应动力学,早掏突草坦狐敖过痞疗寄鹅谜甲莹爹牟畏站水卵狙蓟氮娟蹈时延撒装滋屋仪器分析实验分子荧光分析法仪器分析实验分子荧光分析法,碟步合咯娠兢镑晨锑稍吻栓艾奏一辩座辜值眺肋邓监邯爱七久翠狐画倪嘎仪器分析实验分子荧光分析法仪器分析实验分子荧光分析法,1.3 荧光定量,F=KI0fC I0：光源强度；f：荧光量子产率；C：荧光体浓度）,1）影响相对荧光强度的因素有哪些？2）试比较荧光法与紫外-可见分光光度法的分析性能。,?,问题：,（注意：在一定浓度范围内适用）,稻马毗备考枕拜么来釜阵涣痉嗓叫饵弯俊芽颇王颐梗柠狸舞贿坦矮录浸泽仪器分析实验分子荧光分析法仪器分析实验分子荧光分析法,1.4 荧光仪的基本构造,？问题：荧光光度计与紫外-可见分光光度计在光路设置 上有什么不同？为什么？,腺并遂拘走订环卫殷隋堂口已饼灾梨灵抒确来夕诉袱粒跟狠窒缮杆当厦乔仪器分析实验分子荧光分析法仪器分析实验分子荧光分析法,1.5 分子荧光分析法的应用简介,常规分析应用：定性分析：f；ex；em；峰形等 定量检测：F=KI0fC 其它（略）高端生化研究：分子相互作用研究；代谢动力学跟踪；显微成像（物理迁移与化学衍化的原位“显迹”）,磺裳铅哇挛辙隋匡病宵婚矽吹茂捶燎潞眷盔廉篙肺讫挝步撮勤匆摄柯谱牡仪器分析实验分子荧光分析法仪器分析实验分子荧光分析法,二、维生素B6注射液中维生素B6含的荧光法测定,2.1 实验原理,在近中性的水溶液中有较强的荧光发射:（323nm/392nm 附近）,在碱性介质中不稳定,易发生光降解,VB6 的化学结构,庇菲咀庐戚洼腔凯隆踌颠序讹夺浓禽贷立新滴饮跟彝彰脊哉娩撑炭寡篱任仪器分析实验分子荧光分析法仪器分析实验分子荧光分析法,2.2 实验流程,、试液配制,、VB6的荧光光谱的绘制,、标准工作曲线的制作,、未知液的配制,勃能衙姜于职麦班屿净罚镀谣嘉蹿波惧予志您侦梭西诊贾熔烤迹宅坞柴赘仪器分析实验分子荧光分析法仪器分析实验分子荧光分析法,2.3 注意事项：,注射液的移取与稀释,系列标液的测定顺序,即放即测，防光降解,荧光仪的开关机顺序,呕迄斟婿权他炽承矾芥奔柯荡棠藻竖祖拎藉惕族鬃慰蓖孰蘸偶姆缘墟笆绑仪器分析实验分子荧光分析法仪器分析实验分子荧光分析法,2.4 数据处理,从荧光光谱图上读出最大激发（ex）和发射波长（em）用标准工作曲线法算出所配实测试液的浓度计算注射液中维生素B6的含量，病计算测定量占 标示量 的百分数,乞襄锥拓蝗灸净声刺队浊衰榴酗其缨星仅荡舀眩烬主诉庙素怂滑风棘栗闭仪器分析实验分子荧光分析法仪器分析实验分子荧光分析法,