Sanger测序技术的发展史.docx

一站式科研技术服务商武汉金开瑞生物Sanger测序技术的发展史DNA测序技术是分子生物学研究中常用的技术，它的出现极大地推动了生物学的发展。 成熟的DNA测序技术始于20世纪70年代中期。1977年Maxam和Gilbert报道了通过化学 降解测定DNA序列的方法。同一时期，Sanger发明了双脱氧链终止法。20世纪90年代初出 现的荧光自动测序技术将DNA测序带入自动化测序的时代。这些技术统称为第一代DNA测序 技术。第一代测序技术在分子生物学研究中发挥过重要的作用，如人类基因组计划 (humangenomeprojec， tHGP)主要基于第一代DNA测序技术。目前基于荧光标记和Sanger 的双脱氧链终止法原理的荧光自动测序仪仍被广泛地应用。Sanger法因操作简便，得到广泛的应用。后来在此基础上发展出多种DNA测序技术， 其中极为重要的是荧光自动测序技术。荧光自动测序技术基于Sanger原理，用荧光标记代替同位素标记，并用成像系统自动 检测，从而大大提高了 DNA测序的速度和准确性。早在1985年，Smith等采用激光激发标 记的荧光，并用CCD检测，比常规电泳测序速度提高9倍，测序速度达到8000bp/h以上。20世纪80年代初 Jorgenson和Lukacs提出了毛细管电泳技术 (capillaryelectrophoresis)。1992年美国的Mathies实验室首先提出阵列毛细管电泳 (capillaryarrayelectrophoresis)新方法，并采用激光聚焦荧光扫描检测装置，25只毛细 管并列电泳，每只毛细管在15h内可读出350bp，DNA序列分析效率可达6000bp/h。1995 年Woolley研究组用该技术进行测序研究，使用四色荧光标记法，每个毛细管长35cM，在目前，应用广泛的应用生物系统公司(appliedbiosystems, ABI)3730系列自动测序仪 即是基于毛细管电泳和荧光标记技术的DNA测序仪。如ABI3730XL测序仪拥有96道毛细管， 4种双脱氧核苷酸的碱基分别用不同的荧光标记，在通过毛细管时不同长度的DNA片段上的 4种荧光基团被激光激发，发出不同颜色的荧光，被CCD检测系统识别，并直接翻译成DNA 序列。Sanger测序是DNA测序技术的金标准，曾在人类基因组计划中发挥了关键推动作用， 并且现在仍被用来获得高度准确且可信赖的测序数据。