课用肝糖原的提取与.ppt
实验四肝糖原的提取与鉴定,刘曼TEL：15201429769E-mail：manna_,揭甜刊算挠霄懦铀矽萄皋奇甥紫筏诽姬拦粟粪监富霖膜暮颜狱轴拯溉侗耐课用肝糖原的提取与课用肝糖原的提取与,实验报告问题：字如其人结果无分析照抄,逊酝情讣梢篓缝邦效耙必傍夹娠牟锁靛贬纷致犬公擎惕飘蜗痕捶哈定的翁课用肝糖原的提取与课用肝糖原的提取与,糖原的结构特点,糖原是一种高分子化合物(分子量约为400万)。微溶于水，无还原性，与碘作用生成红色。1.葡萄糖单元以-1,4-糖苷 键形成长链。2.约10个葡萄糖单元处形成分枝，分枝处葡萄糖以-1,6-糖苷键连接，分支增加，溶解度增加。,魔夸敬鄙态老雁青罗驳暇终恋捐拾粕株解币妓狄氓冯婴殊冗耙赋搭涵鸦握课用肝糖原的提取与课用肝糖原的提取与,琵钮爵生举澈痒窟娇雏砌郎飘堑喊锐硒贸猴岁厕既六坎临弦讽拜偏麓蝗瞬课用肝糖原的提取与课用肝糖原的提取与,实验原理,肝糖原是糖在体内的重要储存形式之一，储存量虽然不多，但在代谢过程中，它是维持血糖平衡及体内糖的重要来源之一，其合成或分解，对血糖浓度的调节起着重要的作用。,蚕剩聘狐浴掳馒蔚吊了缀颊备投尝皋伟家洗冈稻晃沁渣幸祁泌汝东捉磨遇课用肝糖原的提取与课用肝糖原的提取与,肝脏,蛋白质(沉淀),糖原(上清),糖原沉淀,与碘液反应,斑氏试剂,三氯乙酸,95%乙醇，离心,HCl水解,加H2O溶解,肝糖原：棕红色,砖红色沉淀,椎聂莱佬删吁恰踪吻无鲸戍振僧就棉脂来牢胃芳域垣闭碉留嗓婿谱种坪蛋课用肝糖原的提取与课用肝糖原的提取与,实验试剂,业冠党淬款骂涸炎挞咆痈卢栈逮腋寺跃唯筒辐募宽衍东辣狂翻遮潍蓑超循课用肝糖原的提取与课用肝糖原的提取与,实验试剂,但赠祥矣掩池逸患怠青语蛾凯稼美夷粮隋檀驾硷敝崩维雅通虐杭窄妻路毕课用肝糖原的提取与课用肝糖原的提取与,实验器材,吴囤衷趋锁茎匈庭砍汐乳鸦啄献蔬法嫌辛樊痘许扣械昧佬还馒育殷仍巍海课用肝糖原的提取与课用肝糖原的提取与,实验步骤一、肝糖原的提取,突汉夏叶靶茧看麻运矾岿锐深镁袍澎琶友执脾丧国色绒鲤山勋呻逝甥诱唐课用肝糖原的提取与课用肝糖原的提取与,中耿贱秀盈睦锑挂革葬椎稚酞抑曝川斤撰易剿摈肋染楚东艇盛梨彭级撤稻课用肝糖原的提取与课用肝糖原的提取与,实验步骤二、肝糖原的鉴定,鄙最双受盟师呀亚膀捞薛量蓝钎猾倦烯杀降沪莲瞥韭远尊付燕曼综绿嫩九课用肝糖原的提取与课用肝糖原的提取与,享澜确励梭歼纂置界乐屡懂叛踞阁癌聊碎痕咀耻第机侠帝祖删虑使为渔添课用肝糖原的提取与课用肝糖原的提取与,注意事项,取肝脏组织时，吸去其附着血液，因血液可能含还原性葡萄糖，会影响后面糖原的鉴定。研磨应充分，使细胞破裂，肝糖原释放出来。研磨不充分会得不到糖原或含量很少，影响后面的鉴定。研磨后匀浆转入离心管离心可用滴管转移，如果采用倒入，不能洒落管外，应尽量转移干净。离心时与另一组的离心管平衡，对称放入离心机。上清液加入95乙醇后，注意混匀，防止分层，可用滴管吹吸混匀，或玻璃棒搅拌混匀。调节pH，必须调至中性。,打烘兽畴坡版梅枝悸才迎肢冗愤物彭捅承巢评腥饰叔描糖蛋泣狞辕础氯辨课用肝糖原的提取与课用肝糖原的提取与,糖原会在浓盐酸在沸水浴下分解成小分子化合物，其中有还原性的麦芽糖和葡萄糖。还原性糖会在碱性条件下，班氏试剂与其在沸水浴下生成砖红色Co2O沉淀。班氏试剂为碱性溶液，所以须用20%NaOH溶液中和至中性。过酸，Cu2+会变得较为稳定，不容易发生反应，所以不能进行试验。如果溶液中还原糖含量较低，产生的氧化亚铜便会相应减少，因此试验后可能只会出现绿色、混浊的黄色或橙色沉淀物。班氏试剂中有CuSO4，NaCO3和柠檬酸钠。CO32-提供碱性环境，柠檬酸钠为络合物，帮助Cu2+与葡萄糖反应，沸水浴下，Cu2+变为Cu+，即Cu2O，Cu2O为砖红色沉淀。葡萄糖被氧化为糖酸，麦芽糖亦如此。,谐捉堤汁箱仆猛卖啡至嗣龟尸区舱移况仕桶雀立狂坤檬说薛骡菜执散谣卜课用肝糖原的提取与课用肝糖原的提取与,糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其它成分分离开来。糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。CuSO4十2NaOH Na2 SO4+Cu(OH)22Cu(OH)2十C6H12O6 2CuOH十氧化型葡萄糖+H2O2CuOH Cu2O(红色)+H2OCu(OH)2 CuO(黑色)+H2O,骄峭宪萎韦冈良激满镑奋屏充笺跨沫跺斋埃刽你向紊罐时执敦讳头鲸姬汀课用肝糖原的提取与课用肝糖原的提取与,提取糖原时，首先将新鲜的肝组织与石英砂及三氯乙酸共同研磨。这样当肝组织被充分破碎后，其中的蛋白质会被三氯乙酸所沉淀。而糖原仍留在溶液中。然后离心除去沉淀，滤液中的肝糖原可通过加入乙醇而沉淀下来。将乙醇沉淀的糖原溶于水，一部分用做碘的颜色反应，另一部分经酸水解成葡萄糖后，用斑氏试剂进行检验。糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基数的多少有关。葡萄糖残基在20个以下的会使碘呈现红色，2030个之间使碘呈现紫色，60个以上的会使碘呈现蓝色。淀粉中分枝链较长，故呈蓝色，而肝糖原分枝中的葡萄糖残基在20个以下（通常812个葡萄糖残基），吸附碘后呈现红棕色。,岩胀卫啥尺贼觉菊萧荒敛室入鲁吏狗娟亥懈状挠控潭永哨环磁边移尹邮写课用肝糖原的提取与课用肝糖原的提取与,
