《非特异性免疫实验》PPT课件.ppt

,一、非特异性免疫吞噬作用 示教溶菌酶实验 1个平板/组补体传统途径激活实验溶血实验 1份/组二、机体细胞免疫功能测定 1、E玫瑰花环实验 示教 2、淋巴母细胞转化实验示教,2,一、吞噬细胞及吞噬作用,吞噬作用是指白细胞游出到炎症灶，吞噬病原体以及组织碎片的过程。完成此功能的吞噬细胞主要有两种，其吞噬异物的过程基本相同，但其结构和化学成分则有所不同。中性粒细胞 巨噬细胞,3,实验方法：中性粒细胞的吞噬作用,金黄色葡萄球菌1-2ml，注入小白鼠腹腔内5小时后，解剖，腹腔液涂片，染色观察小吞噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌的现象,4,实验方法：巨噬细胞的吞噬作用,10%鸡红细胞悬液注入小白鼠腹腔内分别于1,6,24小时抽取腹腔液涂片，染色观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象,5,二、溶菌酶试验,溶菌酶是正常体液与分泌液中所含的一种低分子量的碱性蛋白质，主要来源于巨噬细胞，是天然免疫中一种重要的体液杀菌成分。肽聚糖是细菌细胞壁中的重要成分，溶菌酶能够水解肽聚糖从而使细菌溶解。细 革兰氏阳性：溶解 菌 革兰氏阴性：肽聚糖外面有一层脂多糖和脂蛋 白，一般情况下不受溶菌酶的影响。,6,1、实验室准备：（1）带菌平板的准备：处理好溶壁微 球菌加入琼脂内,到平板,冷凝备用。（2）每平板打4个小孔，如图。,1,2,3,4,7,2、同学们操作步骤：,清水漱口将唾液涂于空平板中用吸管吸出，按下图滴入孔内37过夜明天上午测量溶菌环的直径，记录分析,8,4,1,2,3,PBS 阴性对照,鸡蛋清 阳性对照,3，4加入唾液标本,9,三、补体溶血实验,原理：补体经过经典途径激活后产生溶解细胞等作用。RBC（Ag）+溶血素（Ab）+补体 RBC溶解,10,方法,11,结果与判断,红细胞溶解，液体变为红色透明（+）不溶解，液体均匀浑浊或有少量红细胞沉于管底（-）,12,四、E玫瑰花环形成实验,实验原理T细胞表面标志CD2，即绵羊红细胞受体绵羊红细胞表面CD58可与CD2结合可用于T细胞的计数与分离,13,左:（甲紫染色，800）：可见2个被绵羊红细胞包围而形成玫瑰环的T淋巴细胞；右:（吖啶橙染色）：图中可见3个染成橙黄色荧光的T淋巴细胞被绵羊红细胞所包围。,T淋巴细胞玫瑰花环,14,实验结果,凡能结合三个以上绵羊红细胞者为玫瑰花形成阳性细胞。正常人的花环形成率50-70%，大致可以代表周围血中T细胞的百分数。,15,五、T淋巴细胞转化实验,T细胞受到特异性抗原或非特异性丝裂原刺激时，可发生转化。特异性抗原非特异性丝裂原：PHA、ConA等。正常人淋巴细胞受到PHA刺激后，其转化率为60-80%。,16,转化细胞形态特征,细胞体积：增大细胞核大小：增大染色质：疏松核仁：清晰有丝分裂：+/-细胞浆着色空泡或伪足,17,18,