《酶对固定化底物》PPT课件.ppt

酶对固定化底物的作用,无机化学张春丽 111102009,简介,如何用新的方法来监测酶对固定化底物的作用酶的可接近性酶的动力学，热力学性质总结,二新方法来监测酶对固定化底物的作用,双光子显微镜荧光显微镜共焦拉曼显微镜石英单晶微量天平基质辅助激光解吸飞行时间质谱法,应用双光子显微镜的实例一,丹磺酰氯(二甲氨基萘磺酰氯)是一种强荧光剂，可用于测定肽链的氨基末端，它能专一地与链N-端-氨基反应生成丹磺酰-肽，后者水解生成的丹磺酰-氨基酸具有很强的荧光,应用双光子显微镜的实例二,以香豆素为底物，在固相上发生酶促反应；,荧光基团 它是双香豆素衍生物，含有羧基用来固定在玻璃的表面和给电子基团（酚类或苯胺集团）作为与酶的结合部位。酶识别头包含一个独特的化学结构，作为酶的结合部位，不同的靶酶可做微调。,应用微阵列技术（是一种将核酸序列纵横排列成序，样品在固相载体上以便核酸分子杂交，结合在芯片上的不同点），通过TMP观测其荧光强弱，来鉴别酶的种类、专一性及活性。,应用石英单晶微量天平的实例,石英晶体微天平实时监测固定底物的量。这种方法非常敏感对于测量质量的增加和减少，可精确到在纳克水平。,首先加入的是糖原磷酸化酶，它与固定在固相物上的支链淀粉结合，导致大规模的增加。随后加入磷酸腺苷，激活磷酸酶，开始逐步催化溶解的淀粉、使质量大量减少。,三、酶在固相载体上的可接近性、热力学及动力学性质,分别在PEGA聚合物和水溶液中，嗜热菌蛋白酶催化合成缩氨多肽。即向苯丙氨酸中加入饱和溶液Ph=7.4的N-（9-芴甲氧羰基）甘氨酸Fmoc-Gly，在酶催下作用观察其平衡转化率如图所示。（疏水效应）,固相载体对酶催化反应的平衡位置的影响,四、总结,目前，已经有新方法来监测酶对固定化底物的作用，但需要提供一系列适合酶在固相反应。我们可以进一步改善来提供更方便，简单方法来监测空间分辨率和实时操作。进一步探讨研究酶在固相载体上的可接近性，热力学及动力学性质，有利于更好地了解这些系统。,谢谢,