蛋白质含量的测定微量凯氏定氮法.ppt

蛋 白 质 含 量 的 测 定微量凯氏定氮法,王冬亮 讲师,二、实验原理：,1.氮元素：蛋白质区别于糖和脂肪的特征，绝大多数蛋白质的氮元素含量相当接近，一般恒定在1517%，平均值为16%左右。只要测定出生物样品中的含氮量，再乘以相应的蛋白质换算系数（均值为6.25、乳制品为6.38），就可以计算出样品中的蛋白质含量。,2.含氮量的测定 先高温条件下强酸(浓H2SO4)把样品中的蛋白质的有机氮全部消化为无机氮形式 再强碱高温水蒸气蒸馏出氨气 用硼酸吸收氨气 用标准盐酸进行滴定,反应方程式,（二）蒸馏、吸收,微量凯氏定氮蒸馏装置,传统装置,1：电炉2：水蒸气发生器3：螺旋夹4：小玻杯及棒状玻塞5：反应室6：反应室外层7：橡皮管及螺旋夹8：冷凝管9：蒸馏液接收瓶,三、试剂(已制备),1、消化液：硫酸2、催化剂：硫酸铜、硫酸钾3、碱溶液：40%氢氧化钠4、吸收液：2%硼酸5、混合指示剂：0.1%甲基红乙醇溶液：0.1%甲基蓝乙醇溶液=（1：1）6、标准滴定液：0.2M HCL,半自动凯氏定氮仪,1、确保仪器运行正常、管道内部干净、管道及其连接口密封性好2、准备好吸收液（200ml 2%硼酸+2ml 混合指示剂）并做好标记3、将碱溶液及去离子水桶与仪器连接好，放入盛装消化好样品的消化瓶，放入盛装吸收液的锥形瓶并保证管口插入液面下。4、设置并启动程序,程序设置：,（三）滴定：,至灰色或蓝紫色,至灰色或蓝紫色,X：样品蛋白质含量（g/100g 或g/100mL）V1、V2：测定用样、试剂空白消耗盐酸标准溶液的体积（mL）C：盐酸标准液的摩尔浓度（mol/L）0.014：1mol/L盐酸标准液1mL相当于氮的克数m：样品质量（g）或体积（mL）F：蛋白质换算系数6.25,五、结果计算:,作业实验报告的撰写：实验题目实验原理实验结果（空白滴定的结果可以共享）实验讨论（操作中现象的出现原因；结果的影响因素；与商标 上显示的结果对比等。）结果每个小组可以相同，但是讨论不能相同！,（一）消化,1、标记消化瓶2、将下列物质加入消化瓶：牛奶1ml、浓硫酸5ml、催化剂（K2SO4，CuSO4）、玻璃珠3、将消化瓶放入智能数控消化炉进行消化，至液体变为无色或淡蓝色250 1h左右350 40min左右450 2.5h左右,观察浓硫酸刚加入牛奶中的颜色？,作用？,