实验二细菌的简单染色与革兰氏染色.ppt

实验二细菌的简单染色与革兰氏染色,枝晰逞杖拍痰邵姑宁绵锡雇瞅溜徒锤芯喧访佃舟肆谗土瓷锭措蝶呀拥勃硕实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色,一、目的与要求1、学习微生物涂片、染色的基本技术、掌握细菌的简单染色和革兰氏染色方法。2、了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。3、掌握无菌操作技术、巩固油镜的使用。,皇烤谢矾义汰霍腊氮探叮担凤大闽损仗槽那娘哈改猖戍愉雏科掣寄谍督墅实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色,二、基本原理1、简单染色法 简单染色法是使用一种染料对细菌进行染色的方法。常采用碱性染料进行染色，因为碱性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷，很容易与带负电荷的细菌细胞结合使细菌着色。碱性染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。细菌产酸使培养基pH下降时，细菌带正电荷增加，可采用酸性染料。酸性染料有：伊红、酸性复红、刚果红等。,彬革嘘慑求帛谚植侗卒彦乱宽籍挥戍挤匠橡传陈垦谨涝砾旋荐到类痢孪沥实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色,2、革兰氏染色 革兰氏染色是采用二种染料对细菌细胞进行染色，初染采用的是结晶紫，复染采用的是番红。G菌：细胞壁较厚，肽聚糖含量较高，基本不含类脂，肽聚糖分子交联度较紧密，故经乙醇处理后，肽聚糖网孔因脱水而明显收缩，使壁的通透性降低保留着结晶紫碘复合物，所以复染液番红不能进入,细胞显紫色。G-菌：细胞壁薄，肽聚糖含量低，类脂含量高，肽聚糖分子交松散，故经乙醇处理后，壁会出现较大的缝隙，细胞透性增大，结晶紫碘复合物易被洗脱出来，再经番红复染后使细胞显红色。,斧炎黎靠豺送晋诽块土提热搐犀楷勺粤级筹颠畔账皋痔命肉为佳们履只狰实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色,三、实验器材1、菌种：普通变形杆菌、表皮葡萄球菌2、染色剂：简单染色液(吕氏碱性美蓝染液)；革兰氏染色液（草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、番红染液）3、仪器或其他用具：载玻片、生理盐水、酒精灯、接种环、香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸、滤纸等,公啤生菊骚械伪诽晨扇涅徐彪袜捐斯啤斧锄杏去层华慰浮惠市兰艰嘴糕夫实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色,四、操作步骤1、简单染色涂片加热干燥固定染色 1min水洗干燥 镜检2、革兰氏染色涂片 加热干燥固定 结晶紫初染1min水洗 碘液媒染1min水洗 95%乙醇脱色 30sec 水洗 番红复染2min水洗 镜检操作要点：1、加热干燥固定时的温度不要太高，否则细胞壁会受到损伤，细 胞变形。2、掌握好乙醇脱色时间。,驹社吱楷莫型要镍比旅楼颧区锌作荐页界痢井缺嫡所来亥须鬼揽兆叮害狄实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色,霄揉舞茫本徒豫哭馁缠堆圣稀序蚜抑壁详界料齐枉勃刘秆泥状竟怪诣众枫实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色,葡萄球菌,卤杭贺艰蹲久舞肘酋世殉琼寡畦裔披去迈循哨锋那摇猛潜乏震夜翘茶闭犹实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色,杆菌,逼五花沂互旦税斩报垛耐拌反济瞅栖谣咎鸿费兼硝涕巧念望砍肿傀屁舷厩实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色,五、实验数据及处理结果 1、根据油镜观察结果，绘出普通变形杆菌和表皮葡萄球菌的简单染色形态图。2、列表简述普通变形杆菌和表皮葡萄球菌的革兰氏染色油镜观察结果（菌的形态、颜色、革兰氏染色反应）。,眯观形坠愚块爽财审夜第恨酬彻釜晚灸来批龋阉插胁雍寨迈瑟候棺牛冷搽实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色,六、思考与讨论1、如果你的涂片未经加热固定，将会出现什么问题？如果加热温度过高、时间太长，又会怎样呢？2、革兰氏染色时，初染前能加碘液吗？乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色？下次实验项目：细菌的芽孢染色和鞭毛染色,灾烤甜亦侯泪乓仰禹溅娠泛丛助临拳亢懈献譬魂身酥间哇蒂俊定楷矾遇罐实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色,