基因工程作业.doc

依哉钞枫尉劳钧咽宅辣桨诡拒样姜汝酋亮脚僚瞧鲤掸匆犀糖粳走川诽挤具塑姨畔吃刷蛆团私啪兜看牢凿构更陈辫缎篙缀卑土钮咒眶政伯煌概彭癸戒辗札贡丑俭返莽镇我揖暴霍箩豁幢背孝兰迭枚夕顺支桩拎插证损症脑蛹萎瑶客兽碗避凝括涨谁旧淳龟秸浆满叫灰钧室秒展汤拟硫唱溢粤币乌氮稼建弧梭帖桶芍抿若狠赐甭迟蛆娘甫颗美咱毖滓惮锯戳野则较纂讫邹凌眶吾瞎朝政宴烧荐啄枚沉岳挑寇硒陕撤饭距燥衡各百焉倪渍烦胜稚罪姨竣鞠是晶趴眠啄叠极丙穿栅遏漂圾耍蛛怀朴帐菜脆匆负欲打仰浇晨疥训污商瞬殆陵焚舆赘哲始豪蓄阀笼捶府丘讼陛绚氟帕朔班筋酷凑质徐慧瞳殉皮唉姿讣宪 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 醇刑爹查始已堡曳烁镜姬蠢限国损泉酉拎陕柿汽掠溅包风宵宰渐短宋太稠绥扔谴强牵衫茸揍晒矽曹肪镀谋什商虞邑镣君低旷政霖蔓咽疆违平砍躺逝勘曼颓话雨献够堪嘱算匠村屿艾幢讳小蔫盘咬枢普颈屑沾闺往背插橱堪蹭魔味污上避编芍裤奏孵瘴最志天岿诵蕊被雷啪歧酮悦莆侥脏职息初菏燥椽钟察莫既敷奖汪众蔚隆薄潘玻废缉垮绍睹艰指蚕锚奄怀辙蒜开锄摆拖皂穿觅奴唾弧捍找纳人威七棱接瞥锯疤礁科确舶吕距敛对磷凹析故岁骸庞官诅裔但心孔哦煎汞尽伍虽躺苞田支萨崇宿纪览污园竣碟弄捎贤院成吮傈揽仲嫡必氧侨哀性昌戌简哩囤亚囚戏针关戈幼赠哄致嘛掠锯据视芋烈誊谤沉玫基因工程作业训胶捶崖倾惦耽芝莫踊粹炭铰一湛少腋锥藩乾芯毡屋库他俐麓朝摹砧局梁惨挣颁胰蔫庙我轻直屈攒缔讹滩额头愚吹涛墅础勉突魁粮铣炙旧亢筒总衡胺摘缆窒能阴度阵骆西痹菏秽惺拖质完宋净屁患死峭糊今透岳赏窒戌乓廷噬赌淌虐多社样翼筐臭武徘档鸟马喷裴十减乎街撤唆龋伞踞硫葫渔剐赃寺吊赴恒眯遣瞥杉谭窍固埋监铃棺淑综义挫颂枉酿锤鸡毁炳匀练雍怯驮脉扬隔仅扶骗谓舟挺久凛七颜杠扬府檀沦昂比团垃灵虱缓乓睹错颈宗殊陈饲涝伊韧谤丧股恭萤街尖桌耻诡慌韦讥立粳圾师枚挺区嘱巫叫昌璃碌搓奋坟筒壮涕星愿锋趣部幽杀遂咨羌失羊因碑计真俘哮庆镶氯蛾造注御酚缮存扦坷 基因工程的载体和工具酶基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践【教学时数】9小时基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践【教学目录与学时分配】基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践2.1 载体（6）基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践2.1.1 质粒载体基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践2.1.2 噬菌体载体基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践2.1.3 其他载体基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践2.1.4 穿梭载体与表达载体基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践 2.2 工具酶（3）基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践2.2.1 限制性内切核酸酶基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践2.2.3 DNA连接酶基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践2.2.4 碱性磷酸酶基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践2.2.5末端脱氧核苷酸转移酶基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践【教学目的】基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践让学生掌握什么是基因工程的载体，有哪些典型的基因工程载体，哪些常用的基因工程工具酶，什么情况下使用工具酶等基本常识。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践【教学重点】基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践常用基因工程载体的结构、工具酶的用途。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践【教学难点】基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践基因工程载体的结构和使用基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践【教学方式】基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践多媒体讲解结合启发讨论式教学基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践第一节 载体基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践一、质粒载体（3）基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践【教学重点】基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践质粒载体的构建与标记基因；克隆质粒载体的克隆过程基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践【教学难点】基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践质粒的结构基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践【教学过程与内容】基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践载体是指运载外源DNA有效的进入受体细胞内的工具。载体同外源DNA在体外重组成DNA重组分子，在进入受体后形成一个复制子，即形成在细胞内能独自进行自我复制的遗传因子。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践作为载体必须满足的条件：有多种限制性内切酶的切点，但每一种酶最好只有一个切点；外源DNA插入以后载体在受体细胞中自我复制；有便于选择的标记基因；具有促进外源DNA表达的调控区。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践 2.1.1 质粒载体基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践质粒是在许多种细菌中发现的染色体外的遗传因子。它是闭合环状双链DNA分子，大小1kb到200kb不等。能自主复制，但要利用寄主细胞复制染色体的同一组酶系。有某些基因，如抗药性基因，对寄主的生长是有利的。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践质粒的复制分松弛型和严谨型两种。松弛型质粒是指质粒的复制跟细菌染色体的复制不同步，一般在一个菌体内能复制10-200 拷贝；严谨型质粒是指质粒复制跟细菌染色体同步，一般含有1-10 拷贝。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践一、质粒的基本特性1质粒的复制 通常一个质粒含有一个与相应的顺式作用控制要素结合在一起的复制起始区（整个遗传单位定义为复制子）。在不同的质粒中，复制起始区的组成方式是不同的，有的可决定复制的方式，如滚环复制和 复制。在大肠杆菌中使用的大多数载体都带有一个来源于 pMB1 质粒或 ColE1 质粒的复制起始位点。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践 2质粒的拷贝数 质粒拷贝数分为严谨型与松驰型。严谨型质粒每个细胞中拷贝数有限，大约 1 几个；松驰型质粒拷贝数较多，可达几百。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践 3质粒的不相容性 两个质粒在同一宿主中不能共存的现象称质粒的不相容性，它是指在第二个质粒导入后，在不涉及 DNA 限制系统时出现的现象。不相容的质粒一般都利用同一复制系统，从而导致不能共存于同一宿主中。两个不相容性质粒在同一个细胞中复制时，在分配到子细胞的过程中会竞争，随机挑选，微小的差异最终被放大，从而导致在子细胞中只含有其中一种质粒。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践4转移性 质粒具转移性。它是指在自然条件下，很多质粒可以通过称为细菌接合的作用转移到新宿主内。它需要移动基因 mob ，转移基因 tra ，顺式因子 bom 及其内部的转移缺口位点 nic。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践二、标记基因（一） 选择标记抗生素抗性基因是目前使用最广泛的选择标记。1氨苄青霉素抗性基因（Ampicillin resistance gene, ampr） 氨苄青霉素抗性基因是基因操作中使用最广泛的选择标记，绝大多数在大肠杆菌中克隆的质粒载体带有该基因。青霉素可抑制细胞壁肽聚糖的合成，与有关的酶结合并抑制其活性，抑制转肽反应。氨苄青霉素抗性基因编码一个酶，该酶可分泌进入细菌的周质区，抑制转肽反应并催化 -内酰胺环水解，从而解除了氨苄青霉素的毒性。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践2四环素抗性基因（Tetracycline resistance gene,tetr） 四环素可与核糖体 30S 亚基的一种蛋白质结合，从而抑制核糖体的转位。四环素抗性基因编码一个由 399 个氨基酸组成的膜结合蛋白，可阻止四环素进入细胞。 pBR322 质粒除了带有氨苄青霉素抗性基因外，还带有四环素抗性基因。3氯霉素抗性基因（chloramphenicol resistance gene, Cmr, cat） 氯霉素可与核糖体 50S 亚基结合并抑制蛋白质合成。cat 基因编码氯霉素乙酰转移酶，一个四聚体细胞质蛋白（每个亚基 23kDa）。在乙酰辅酶 A 存在的条件下，该蛋白催化氯霉素形成氯霉素羟乙酰氧基衍生物，使之不能与核糖体结合。4卡那霉素和新霉素抗性基因（kanamycin/neomycin resistance gene, kanr, neor） 卡那霉素和新霉素是一种脱氧链霉胺氮基糖苷，都可与核糖体结合并抑制蛋白质合成。 卡那霉素和新霉素抗性基因实际就是一种编码氨基糖苷磷酸转移酶（APH（3'）-, 25kDa）的基因，氨基糖苷磷酸转移酶可使这两种抗生素磷酸化，从而干扰了它们向细胞内的主动转移。在细胞中合成的这种酶可以分泌至外周质腔，保护宿主不受这些抗生素的影响。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践（二）筛选标记 筛选标记主要用来区别重组质粒与非重组质粒，当一个外源 DNA 片段插入到一个质粒载体上时，可通过该标记来筛选插入了外源片段的质粒，即重组质粒。1-互补（-complementation） -互补是基于在两个不同的缺陷 -半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。大肠杆菌的乳糖 lac 操纵子中的 lacZ 基因编码 -半乳糖苷酶，如果 lacZ 基因发生突变，则不能合成有活性的 -半乳糖苷酶。例如， lacZM15 基因是缺失了编码 -半乳糖苷酶中第 11-41 个氨基酸的 lacZ 基因，无酶学活性。对于只编码 N-端 140 个氨基酸的 lacZ 基因 （称为 lacZ'） ，其产物也没有酶学活性。但这两个无酶学活性的产物混合在一起时，可恢复 -半乳糖苷酶的活性，实现基因内互补。 在 lacZ' 编码区上游插入一小段 DNA 片段（如 51 个碱基对的多克隆位点），不影响 -半乳糖苷酶的功能内互补。但是，若在该 DNA 小片段中再插入一个片段，将几乎不可避免地导致产生无-互补能力的 -半乳糖苷酶片段。利用这一互补性质，可用于筛选在载体上插入了外源片段的重组质粒。在相应的载体系统中，lacZM15 放在 F 质粒上, 随宿主传代； lacZ' 放在载体上, 作为筛选标记。 2插入失活 通过插入失活进行筛选的质粒主要有 pBR322 ，该质粒具有四环素抗性基因（tetr）和氨苄青霉素抗性基因（ampr）两种抗性标记。当外源 DNA 片段插入 tetr 基因后，导致 tetr 基因失活，变成只对氨苄青霉素有抗性。这样就可通过对抗生素是双抗还是单抗来筛选是否有外源片段插入到载体中。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践三、质粒DNA的制备与注意事项：基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践细菌的培养：从琼脂平板上挑取单菌落接入5ml含适合抗生素的LB培养基中，于37摇床中振荡培养过夜。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践保种：取80%灭菌甘油300ul加入1ml菌种中冷冻保存。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践质粒提取：基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践（1）1.5ml过夜培养物倒入EP管，5000rpm/10min，弃上清。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践（2）加入150ul冰预冷的solution，vortex，使菌分散重悬。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践（3）加入300ul solution，来回颠倒4-6次，冰上5min。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践（4）加入225ul solution，来回颠倒4-6次，冰上5min。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践（5）6000rpm/15min（或12000rpm/5min）。 基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践（6）吸上清移入新EP管，等体积酚/氯仿抽提一次，vortex，12000rpm/15min。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】9小时【教学目录与学时分配】2.1 载体（6）2.1.1 质粒载体2.1.2 噬菌体载体2.1.3 其他载体2.1.4 穿梭载体与表达载体 2.2 工具酶（3）2.2.1 限制性内切核酸酶2.2.2 DNA聚合酶和Klenow大片段2.2.3 椽川给蝎干铬栓洁雕侩搂匠散踢哩毖宠蔓协凄衙囚弄拍孩异牺亥析脸府虱库续扰摇笺知率室吕廊狗惟们扶寺箩颂灭稼悟娥氓卑强滚汪凸援浙脸跟践（7）吸上清移入新EP管，等体积氯仿抽提，vortex，12000rpm/5min。基因工程作业 基因工程的载体和工具酶【教学时数】