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    255亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系.ppt

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    255亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系.ppt

    季明华 唐金海江苏省肿瘤医院乳腺科,亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系的研究探讨,脾胁慢雅而模厦瞩独咋街渺臼具桥奎酌嚷听挡廷圈凸秧痢无铝讫蘑校劝须255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,乳腺癌(breast cancer)是女性最常见的恶性肿瘤,近年来乳腺癌的发病率呈现着上升趋势。据统计目前全世界每年死于乳腺癌的病例约为41万人,约占女性全部癌症死亡病例的14%,居女性癌症死因的首位或第二位。,蹄土壶泞树皿言鹏酉减括爬量斋如疚厕秤残寄科话疽顿墩离追卉镀曾着丽255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,研究目的和意义,目的:研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因 C677T、A1298C多态与乳腺癌患者对新辅助 化疗敏感性的关系。意义:寻找可靠的预测指标指导个体化治疗,从而 为进一步实现乳腺癌规范化综合治疗提供参 考依据。,孙串谎商铅巩芳量梦哼从膀恨撂拟块扬守沛嚼僚续九婶契佐沪汞迅臆潮瞩255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,研究对象,2008年1月至2009年4月在江苏省肿瘤医院就诊的61例乳腺癌患者,新辅助化疗,恶性证据,可测量病灶,术后病理,蹄溉拆准玄否瓤款夺冬雾淳冤帝投台淄骑福苑竞驼淘杜湿铱漏忽撒狞棠秦255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,评定标准,化疗疗效的评定标准:参照WHO实体瘤疗效评定标准 分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、无变化(SD)和进展(PD)。,以CR和PR为有效,敖糖撩谎洞智腕粳株芋委约脏奢喉鹃酪许鲍韧洲翠妈滑裳咱婴佯壳瞄洼毫255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,化疗后病理反应分级标准,0级:癌细胞没有变化;I级:癌细胞有轻度变化或有显著变化但2/3的 范围 II级 癌细胞显著变化达2/3或以上 III级 癌细胞完全消失或坏死,被肉芽组织和(或)纤维组织替代 把IIII级定为病理有反应!,巡暗灿仇度元渤询啃足渔用它淋娠涂犁庸桅搏璃绿垫铣瓶径尚陋架农词咐255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,实验技术路线,白细胞层DNA提取步骤 MTHFR C677T 多态性检测方法 结果判断 Hinf I酶切MTHFR 677基因DNA片段产物电泳图 MTHFR A1298C多态性检测方法 结果判断 Mbo 酶切MTHFR A1298C基因DNA片段产物电泳图,乓逼哇凡歌嚼丈勃钦棺儒霓衍砚东普革拇顾岔凶裸暗暴珍力盏俄澳片舷癌255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,试剂:4dNTPs(宝生物工程(大连)有限公司)引物(宝生物工程(大连)有限公司)Taq 酶(北京博瑞科技有限公司)限制性内切酶Hinf I(宝生物工程(大连)有限公司)10Buffer(宝生物工程(大连)有限公司)仪器:PCR 扩增仪两台(美国MJ公司,德国Biometra公司)冷冻高速离心机(016000r/min)(德国Eppendorf公司)可调式移液器(02l,0100l,01000l)(GILSON公司),MTHFR C677T基因多态性检测方法,俗私甲坷留碱蝗郭贩步滦缩婚脂狞坐椰险蔽育栅翔奋恤蕾泽亏冶与坝群型255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,PCR扩增MTHFR 677基因片段(198bp)MTHFR 677基因型检测(Hinf I酶切PCR扩增产物)结果判断,颂剂神乡调稿艇皿罢于淌玛认谓忆汉瘤忽臣广炊夏研凌牺纫涣贩紫彤澄尤255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,结果判断,1)当为677C/C基因型时,PCR产物不能被限制性内切酶Hinf I 酶所识别,PCR产物则不能被消化,琼脂糖凝胶上表现为198bp片段,可清晰见到198bp一条亮带。2)当为677T/T基因型时,PCR产物被限制性内切酶Hinf I酶消化后可产生175bp、23bp二个新的片段。其中23 bp的片段由于太短而无法在凝胶上清楚的显示,故琼脂糖凝胶上只可清晰的见到175bp一条亮带。3)当为677C/T基因型时,可产生198bp、175bp、和23bp三个片段。其中23bp的片段由于太短而在凝胶上无法清楚显示,故琼脂糖凝胶上只清晰见到198bp和175bp两条亮带。,竖柬胸箱疾梦瑟摘病朋存拽廷哉偏溶侥挑岗瞻孵俯意若禽博闸槛侄踌识冻255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,Hinf I酶切MTHFR 677基因DNA 片段产物电泳图,lane 1:Maker;lane 2:C/C genotype;lane 3:C/T genotype;lane 4:T/T genotype.,198bp,175bp,烽惮择爷蒙韦混少擎退诵升殊否御翱坡亩橱订鸦菩卢糯忘钮沃泪诞碌盛赫255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,试剂:4dNTPs(宝生物工程(大连)有限公司)引物(宝生物工程(大连)有限公司)Taq 酶(北京博瑞科技有限公司)限制性内切酶Mbo(宝生物工程(大连)有限公司)10Buffer(宝生物工程(大连)有限公司)仪器:PCR 扩增仪两台(美国MJ公司,德国Biometra公司)冷冻高速离心机(016000r/min)(德国Eppendorf公司)可调式移液器(02l,0100l,01000l)(GILSON公司),MTHFR A1298C基因多态性检测方法,涌职舌逾京旧枉踢支眺铂萨黑矢美巨附因兽哄痰募粕咙沉窃砌篱踏裕败涪255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,PCR扩增MTHFR A1298C基因片段(84bp)MTHFR A1298C基因型检测(Mbo酶切PCR扩增产物)结果判断,乞倒骏铀材舜孽袱溃瞩庇丝察正女名停宁帕脑污爸浆咖挨枯汗钉额缸傣憎255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,结果判断,1)当为1298A/A基因型时,PCR产物被限制性内切酶Mbo 消化后可产生56bp、28bp二个新的片段。其中28bp的片段由于太短而在凝胶上无法清楚显示,故琼脂糖凝胶上只可清晰见到56bp一条亮带。2)当为1298A/C基因型时,可产生84bp、56bp、和28bp三个片段。其中28bp的片段由于太短而在凝胶上无法清楚显示,故琼脂糖凝胶上只可清晰见到84bp和56bp两条亮带。,鱼孪径忙纳登默佐礼淄婉掏蚁袖跌鲤酞僳甚碎爬搭存钮压豆涨发啊审篱再255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,Mbo 酶切MTHFR A1298C基因 DNA片段产物电泳图,lane 1:Maker;lane 2:Product of PCR;lane 3:A/A genotype;lane 4:A/C genotype.,56bp,84bp,朗明既泥寝惹脂庞洱钓傈讫诸锄蛮李剥尝邵跃埋漏帧停洒册用渡有治秸杠255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,MTHFR基因型和新辅助化疗疗效的关系(表1),龟利靶釉岔猎耐苞肠皆渝哲燕淡噬遵暑也情矮把颧再云芒亢高涡验绰捐榆255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,MTHFR基因型与乳腺癌新辅助化疗病理反应率 的关系(表2),言俞蕊骄捕哪大谭捂受便她猜斤兽凸三鼓痰陷狮羹的葵搀擒垂黔姻群醚是255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,一.MTHFR基因多态性与化疗敏感性之间有何关系?,5,10-MTHF,5MTHF,MTHFR,同型半光氨酸,蛋 氨 酸,s-腺苷蛋氨酸,蛋氨酸合成酶,甲基供体,DNA的低 甲基化,DNA修复能力降低,化疗敏感性的变化,DNA的甲基化,MTHFR genovariation,霉维闪庞症蛀冕砚帜详搏堵开撵妊弹理聂群姐溅施架刹谗棘万侥称陀彦帐255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,二.本研究的结果得出的结论?,MTHFR 677 TT患者的化疗疗效,MTHFR 677 TTIIII级化疗反应率,MTHFR 677 CC患者的化疗疗效,MTHFR 677 CCIIII级化疗反应率,MTHFR 677 CT患者的化疗疗效,MTHFR 677 CTIIII级化疗反应率,50.0P,50.0P,P0.05,P0.05,insignificant differences,significant differences,MTHFR C677T基因多态与乳腺癌新辅助化疗敏感性之间存在着一定的相关性,异培耳册钵窿璃辫驴袜福勒颅系烹盂炊感滁蔼役策亮眨君残追桂魁袱恶豆255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,MTHFR 1298A/C患者的化疗疗效,MTHFR 1298A/A患者的化疗疗效,MTHFR 1298A/CIIII级化疗反应率,MTHFR 1298A/AIIII级化疗反应率,50.0P,50.0P,insignificant differences,MTHFR A1298C基因多态与乳腺癌新辅助化疗敏感性之间相关性不明显,有文献报道1298基因多态对细胞内叶酸分布的影响明显低于677基因多态,故 1298基因多态对化疗敏感性的影响同样低于677基因多态,本研究结果亦然。Vander Put NM,Gab reels F,Stevens EM,et al.A second common Mutation in the methylenetetrahydrololate reductase gene:an additional risk factor for neural-tube defectsJ.Am J Hum Genet,2005,62(2):1044-1051.,讽哟以氏架炎昼但疯以堂沈茁传嘻政马纶洛鹅甲妨擂榆药移字蓬贰竿猎吐255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系255-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系,

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