新穿心莲内酯体内外抗炎文档资料.ppt
Abstract,新穿心莲内酯，是一个来自穿心莲植物的一种提取物。本文主要研究新穿心莲内酯在体内和体外的抗炎作用及机制。研究发现口服新穿心莲内酯（150毫克/千克）显着抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀。口服新穿心莲内酯（100150毫克/千克）也能减少醋酸致小鼠血管通透性增加。在体外进行研究，利用巨噬细胞系RAW 264.7探讨新穿心莲内酯抑制phorbol-12-myristate-13-acetate刺激呼吸系统和脂多糖诱导产生一氧化氮、肿瘤坏死因子（肿瘤坏死因子-）。,通过光学测量，结果显示新穿心莲内酯抑制有刺激因子刺激呼吸系统产生炎症因子，新穿心莲内酯抑制LPS诱导的巨噬细胞产生的一氧化氮和肿瘤坏死因子-，促进抗炎活性的作用。这些结果表明，新穿心莲内酯具有显著的抗炎作用。关键词：新穿心莲内酯；耳水肿；血管通透性；一氧化氮；肿瘤坏死因子-；巨噬细胞炎症。,Materials and Methods,制备新穿心莲内酯的主要方法：冷浸法，干叶（1千克）被浸渍在95%乙醇在室温下保存三天。过滤后，乙醇溶液是在真空蒸发去除溶剂。残留（320克）浸膏用乙酸乙酯对水和乙酸乙酯部分（45克）在硅胶柱进行层析，洗脱用石油醚/丙酮（7:3），产生2克纯新穿心莲内酯。新穿心莲内酯的化学结构鉴定红外，紫外，核磁共振和质谱等进行测定。其纯度大于96%，以高效液相色谱分析（图1）。该新穿心莲内酯溶解在二甲基亚砜（DMSO）存放在20的环境中。,其他化学试剂：醋酸豆寇酯、内毒素（脂多糖），青霉素，链球菌霉素，鲁米诺（苯巴比妥），三乙胺和其他生化试剂等。醋酸豆寇酯溶解在DMSO中，脂多糖（50克/毫升）不是加入的磷酸缓冲溶液。都存放到-20C 的环境中。实验动物：小白鼠（282克）,抗炎活性的新穿心莲内酯化学结构,实验一：二甲苯引起的小鼠耳肿胀局部应用二甲苯50微升，涂于老鼠的左耳，右耳为对照。新穿心莲内酯分为三个不同的剂量（50，100和150毫克/千克）一小时前让小白鼠口服，再加一组地塞米松（20毫克/公斤）作为阳性对照,实验二：醋酸刺激诱导小鼠内脏痛模型 把小鼠分成5组，分别给予动物腹腔注射1毫升/100克醋酸（0.6%，体积比）。30分钟后注射醋酸和腹腔冲洗正常盐水（3毫升）1小时后口服新穿心莲内酯（50，100和150毫克/千克），0.2毫升伊万斯蓝染料（0.25%生理盐水）静脉注射部位在尾静脉。对照组注入地塞米松（20毫克/千克）同等剂量和生理盐水相比较。在610纳米条件下对染料进行检测。,实验三：新穿心莲内酯对LPS诱导的巨噬细胞中一氧化氮生产的影响新穿心莲内酯并没有显著影响基底原料264.7巨噬细胞。然而，新穿心莲内酯在没有生产的巨噬细胞治疗内毒素的情况下是剂量依赖性地抑制内毒素（图4），在浓度从30到150m。结果的基础上的微量细胞活力检测，新穿心莲内酯无毒性从30到90m（细胞存活超过95%与对照组相比）。只有在最高剂量（150m），一些细胞（细胞存活率明显低于65%与对照组相比）。,实验四：在LPS诱导的巨噬细胞下新穿心莲内酯对肿瘤坏死因子-生产的影响。肿瘤坏死因子-是一个重要的炎症介质分泌的脂多糖，诱导264.7巨噬细胞系巨噬细胞。图5显示，新穿心莲内酯从30到150m，肿瘤坏死因子-浓度在LPS处理组剂量依赖性减少，相比于对照组在无脂多糖诱导下。,Result,实验一：新穿心莲内酯显著（0.05）的二甲基苯致耳毒水肿在150毫克/千克剂量后二甲基苯应用（表1）。地塞米松也有显着抑制水肿。新穿心莲内酯对在不同时间段由醋酸刺激小鼠所引起的内脏绞痛诱导模型，而使其血管统透性增加有一定的抑制和调解作用。化学诱导的血管通透性（如乙酸）会立即持续反应。口服100150毫克/公斤新穿心莲内酯诱发一个明显的剂量相关的抑制醋酸致小鼠血管通透性增加（表2）。抑制表明，新穿心莲内酯可有效地抑制急性炎症的渗出期。,实验二：新穿心莲内酯随着剂量的增加能显著增加血管的通透性。,实验三：新穿心莲内酯对LPS诱导的巨噬细胞中一氧化氮的生产 具有明显的抑制作用,实验四：在LPS诱导的巨噬细胞新穿心莲内酯对肿瘤坏死因子-生产有明显的抑制作用。,Discussion,穿心莲提取物已被用于传统中医治疗细菌性感染和炎症性疾病。然而，这些机制的生物活性尚未完全澄清。在目前的研究，一个从穿心莲植物中分离出来的二萜内酯类化合物新穿心莲内酯在体内和体外的抗炎机制和作用我们发现：体内药理结果发现新穿心莲内酯具有抗炎活性在甲基苯致小鼠耳肿胀模型和醋酸所致刺激的内脏伤害小鼠模型。为了澄清新穿心莲内酯抗炎机制，新穿心莲内酯对活化巨噬细胞的抑制作用介绍在体外进行试验。在炎症过程，在具体的和非特异性免疫过程中。被激活的巨噬细胞释放大量的炎症介质，如活性氧、白三烯、白细胞介素、肿瘤坏死因子-等。所有这些抗炎物质有能力诱导组织损伤直接或间接增加炎症反应。因此，一种药物能够防止释放炎症介质应该可能具有抗炎作用。,从本报告数据表明，新穿心莲内酯引起剂量依赖性抑制一氧化氮和肿瘤坏死因子-产生在LPS诱导的巨噬细胞中。新穿心莲内酯，对加脂多糖诱导的巨噬细胞炎症介质产生有抑制作用但没有细胞毒作用。这表明，新穿心莲内酯并不是由于细胞死亡从而减少和减轻炎症介质的释放和作用。低浓度新穿心莲内酯有轻度刺激免疫反应的作用对在体内没有生产免疫因子的时候。这可能意味着，新穿心莲内酯，在低浓度时，可作为免疫刺激剂。可以进一步的研究其机制和构效关系的进展。总之，新穿心莲内酯的抗炎活性可能有助于对改善炎症性疾病在早期阶段的巨噬细胞活化。因此，穿心莲植物中所含的新穿心莲内酯是其一个主要参与抗炎作用的组成部分。,
