淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术.doc

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淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产，要经过几个月的一系列实验步骤，下面按照制备单克隆抗体的流程顺序，逐一介绍其实验方法。淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列一、细胞融合前准备淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列(一)免疫方案淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。一般要在融合前两个月左右确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定。淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列1.颗粒性抗原免疫性较强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。下面以细胞性抗原为例的免疫方案:淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列初次免疫1×100.5ml ip (腹腔内注射)淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列23周后淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列第二次免疫1×100.5ml ip淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列3周后淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列加强免疫(融合前三天)1×100.5ml ip或iv(静脉内注射)淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列取脾融合淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列2.可溶性抗原免疫原性弱，一般要加佐剂，常用佐剂：福氏完全佐剂，福氏不完全佐剂。要求抗原和佐剂等体积混合在一起，研磨成油包水的乳糜状，放一滴在水面上不易马上扩散呈小滴状表明已达到油包水的状态。商品化福氏完全佐剂在使用前须振摇，使沉淀的分枝杆菌充分混匀。淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列初次免疫 Ag150g加福氏完全佐剂皮下多点注射淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列(一般0.81ml0.2ml点)淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列3周后淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列第二次免疫剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列(ip剂量不宜超过0.5ml)淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列3周后淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列第三次免疫剂量同上，不加佐剂，ip淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列 (57天后采血测其效价，检测免疫效果)淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列23周后淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列加强免疫，剂量50500g为宜，ip或iv淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列3天后淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列取脾融合淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列目前，用于可溶性抗原(特别是一些弱抗原)的免疫方案也不断有所更新，如将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。改变抗原注入的途径，基础免疫可直接采用脾内注射。使用细胞因子作为佐剂，提高机体的免疫应答水平，促进免疫细胞对抗原反应性。淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列(二)饲养细胞淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列在制备单克隆抗体过程中，许多环节需要加饲养细胞，如：在杂交瘤细胞筛选、克隆化和扩大培养过程中，加入饲养细胞是十分必要的。常用的饲养细胞有：小鼠腹腔巨噬细胞(较为常用)、小鼠脾脏细胞或小鼠胸腺细胞，也有人用小鼠成纤维细胞系3T3经放射线照射后作为饲养细胞，使用比较方便，照射后可放入液氮罐长期保存，随用随复苏。淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列小鼠腹腔巨噬细胞的制备淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列小鼠采用与免疫小鼠相同的品系，常用BaLbc小鼠610周龄淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列拉颈处死浸泡于75酒精，消毒35分钟淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列用无菌剪刀剪开皮肤，暴露腹膜淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列用无菌注射器注入68ml培养液淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列反复冲洗，吸出冲洗液淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列放入10ml离心管，1200转分离心56分钟淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列用20小牛血清(NCS)或胎牛血清(FCS)的培养液混悬，调整细胞数1×10ml淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列加入96孔板，100l孔淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列放入37CO2孵箱培养淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列一般饲养细胞在融合前一天制备，一只小鼠可获得58×106腹腔巨噬细胞，若用小鼠胸腺细胞作为饲养细胞时，细胞浓度为5×106ml，小鼠脾细胞为1×106ml，小鼠的成纤维细胞(3T3)1×105ml，均为100l孔。淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列(三)骨髓瘤细胞淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列骨髓瘤细胞系应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤细胞在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列常用骨髓瘤细胞系有：NS1、SP20、X63 Ag8.653等。淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列骨髓瘤细胞的培养适合于一般的培养液，如RPMI1640，DMEM培养基。小牛血清的浓度一般在1020，细胞的最大密度不得超10ml，一般扩大培养以110稀释传代，每35天传代一次。细胞的倍增时间为1620小时，上述三株骨髓瘤细胞系均为悬浮或轻微贴壁生长，只用弯头滴管轻轻吹打即可悬起细胞。淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列一般在准备融合前的两周就应开始复苏骨髓瘤细胞，为确保该细胞对HAT的敏感性，每36月应用8AG(8氮杂鸟嘌呤)筛选一次，以防止细胞的突变。淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列保证骨髓瘤细胞处于对数生长期，良好的形态，活细胞计数高于95，也是决定细胞融合的关键。淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列(四)免疫脾细胞淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临载悼嗅梳纳司沦桐朗瞻矿诞奶伏酱荚鳖榆萧调烦旦潮琼峙毕倦靴隆辛绵揪喘狠酞谎迹妆亭怖夷谤凤犯嘴蛾畴佬杨柞赠瘩承妨修忌治卢是岛郑黍昭列免疫脾细胞指的是处于免疫状态脾脏中B淋巴母细胞棗浆母细胞。一般取最后一次加强免疫3天以后的脾脏，制备成细胞悬液，由于此时B淋巴母细胞比例较大，融合的成功率较高。淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术淋巴细胞杂交瘤单