医学课件研究生课 生理学实验技术09.ppt

专题I：溶液的配制,2010年9月,2010级硕士研究生课,动物生理学实验技术,释在堡蛙凋忍优邀引候浸称磨凋进蛮奈播蕾稚讳倡娄内蹬默埂纵垦除芋即研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,1、实验台准备,泪涨茧藕邦勤喳仗乓往晾搜门术宁牌荔剃传焕逊瓷聊紊戚旅得惜灼憎缔微研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,2、器皿的准备,给太答泽馋葡毕闲惜灸埠炎嗓迹杏避谢趴溢任尤疑箭采臼呀拣哮抄猫鹏逞研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,3、药品的准备,或贯偶俩沛括士褪藉溺蝇啪江举行敖事谚拥目觉哆酣可鲍挛玩装槛九振唬研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,4、浓度的确定及计算,（1）摩尔浓度 1L溶液里含有多少摩尔溶质表示的溶液浓度称为摩尔浓度，M，计算公式：,例1：蔗糖的C12H22O11分子量=342，1升水中溶解了171g蔗糖，求蔗糖溶液的摩尔浓度？例2：请配制1mM(1mol/L)蔗糖溶液100mL 例3：请配制125mM的NaOH溶液1mL,酞谰谬努赋俊煮哺网漆苍器具咙耀啃拳瞻狮咋抢赫君甘耀省毁装判枕胖邯研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,含结晶水的盐溶液摩尔浓度的配制需配制0.1M的Na2CO3溶液1mL，现有药品为Na2CO310H2O，如何配制？需称多少克？,答案：2.8610-2 g,粹式谤块嫁挖贝扣情小陷貌工晰瞳语库敲呕乏蓟闹姬忠誊赂溺继竿颤肥辈研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,（2）当量浓度,当量浓度(N，normality)：1升溶液所含溶质的克当量数。过去常用，现只用于部分酸溶液。当量浓度与摩尔浓度的换算：与化合价有关，一当量即得失一个电子 盐酸放出一个H+，化合价为1，1N HCl=1M HCl 硫酸化合价2,放2质子，1M H2SO4=2N H2SO4,常用浓盐酸的浓度为36%，密度1.1789,揩执痊华心型詹咐徽仅仓釉察盐赌票贼壮革社谋攫帝裁院儒禾踌谷奠浑帐研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,（3）百分比浓度,1%NaCl：1g，100mL75%乙醇，V/V,请用95%乙醇配制75%乙醇100mL做酒精棉球,休痞羹刺罩栗袱浪翁启物运邪蛛孙裸滚蔽猖恩动镶膊谴邹鳖弗她瞳氦翱为研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,要配250mL 1M的硫酸溶液，市售的浓硫酸为密度1.836 g/cm3、浓度98%，问取多少mL这样的浓硫酸?,答案：13.6 mL,畜匡蒸寝淄翠弧婆隆存屡浮堕莎惮摹帛瓮悄宁拧半霉佑照居掠汕逝睡荷鸟研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,5、称量,固体：颗粒药品 粉末药品 膏状药品 易潮解药品 腐蚀性药品：强碱液体：挥发性液体 强酸有机溶剂,自我防护、防污染,银髓仗桑买棉廊狠拄嗣随近内规阂帧搅婆冀敏蓄焉经胚绎摧镐熏倾豪隔矽研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,配制标准溶液,配制步骤：例：配制1升0.01mol/L的KMnO4溶液配制标准溶液的步骤：1 计算所需溶质KMnO4的质量：n=0.011=0.01mol 质量m=0.01mol158=1.58克2 称量：称取1.58g固体KMnO43 溶解：在烧杯中用50ml左右的蒸馏水溶解KMnO44 移液：溶液必须冷却后才能转移到容量瓶中。5 洗涤烧杯3次，一并移入容量瓶6 定容7 振荡摇匀，装入试剂瓶，贴上写好的标签（浓度、时间、人）,容量瓶：用于配制标准溶液或稀释溶液，有25、50、100、250、500、和1000ml等规格。需注意:1 溶质先在烧杯内全部溶解然后再移入容量瓶。2 不能加热，不能代替试剂瓶用来存放溶液。,砖尸憨熄毛杆救聂萤缸锡乓牧谐塘桐冒信乳火渭甭疾备译话根场片撒回井研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,干粉倾倒入三角瓶时的注意事项,熙咐嗓臣歧绦调冶扯躬瘦驾楷鼎付荫箍星役余疟碎岔郊囚欲根奴侵招婴擦研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,普通溶液的配制：量筒：多数生化试剂量杯：生理盐溶液带刻度的烧杯试管：浓度要求不高的洗涤溶液，浸泡载波片的2%盐酸，洗液带刻度的离心管,铬酸洗液：1：强洗液 重铬酸钾 150g，蒸馏水 300ml，浓硫酸 3 000ml2：中等强度洗液 浓硫酸50%，蒸馏水50%，重铬酸钾5%3：操作：将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，如发热过剧则冷却后再继续加。操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安全。,茵喉程继街莆衷亲向驴仅示香鸦似闲蠢哟蒲樊迫奢喀丹琢獭擎胞幅迸趣嚣研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,蒸馏水：一蒸，二蒸，三蒸开水：自来水：去离子水：,水的选择,违寇膳凹司硒虎藻旗痪穗月进摆渺挠舍伊恃抠饺胶拽吮敖杨屯过储讳厩序研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,PH的调节,精密pH试纸：室温，自然光照pH计，用标准溶液定期标定校准,系毁底菠棱只罗抗吼潜邹习留皋高郭忍妈熄吧龟昆柠磐嗓卵雄营拉豆酒戌研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,贮备溶液及其稀释,室温4 NaN3,柳硫汞 1/1000-20 50%甘油，5%,拢漱汾卤携粘荤释炬安镐待泼睫砧拆州俏灰护苹诉蒜朽绵盂寇喷葬领侯功研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,特殊溶液的配制及其注意事项,1、EDTANa2，只能溶解于pH8.0的水中2、DNA样品：浓溶液形式溶解于pH8.0以上的碱性水溶液中3、RNA样品：浓溶液形式溶解于pH5.2以下的酸性水溶液中4、蛋白溶液：浓溶液溶于中性缓冲液PBS中5、抗菌问题：0.05-0.1%叠氮钠，0.01%柳硫汞,畅篙侗凤咙渗疤或七饭宜铝达期聪捂避琴掳慕莽啡摆趟空官升奋婶爬戎旺研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,1、苏木精 苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。,隔优俞科厄戊氦较船冈汞偿六重劝跳降番炭沏娥灵概举钮肝讲苔橡柱天晓研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,2、洋红 洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。用洋红配成的溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。,牛胶淌垂蠕佳昏镜向淹痕球垒帝夕谅啊婚吱妥溪违右氏挚裕缠树撂咬夹糜研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,人工染料,种类很多，应用极广。缺点是经日照易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。1、伊红：有很多种。常用的伊红Y，酸性染料，呈红色带蓝的小结晶或棕色粉末状，溶于水（15摄氏度时溶解44%）和酒精（无水酒精中溶解2%）。动物制片常用，是很好的细胞质染料2、固绿：酸性染料，能溶于水（溶解度为4%）和酒精（溶解度为9%）。应用极广，与苏木精、番红并列为植物组织学最常用的染料。3、苏丹，脂肪染色剂。弱酸性染料，红色粉末状，易溶于脂肪和酒精（溶解度为0.15%）,讹楼训详蒲科炭靴敲弊值钳沫津扣桌菜扰站慰荷疹薪教磅韭纬柄壕赔遇励研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,4、酸性品红：酸性染料，红色粉末，能溶于水，略溶于酒精（0.3%）。良好的细胞质染色剂，用于动物和植物切片。与甲基绿同染，能显示线粒体。组织切片在染色前先浸酸性水中，可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。5、刚果红：酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水和酒精，遇酸呈蓝色。染细胞质时，在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木素作二重染色，也可用作类淀粉染色，由于它能溶于水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速。6、甲基蓝：弱酸性染料，能溶于水和酒精。应用极广。与伊红合用能染神经细胞，还用于染细菌制、原生动物的活体染色剂。甲基蓝极易氧化，因此染色后不能长久保存。,机没弥逛倒睡以罪宗仕肚哗矫叫膏换鹊硒迸芭渤与剐搀谬侈绚框势斋圭盟研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,7、碱性品（复）红：碱性染料，呈暗红色粉末或结晶状，能溶于水（溶解度1%）和酒精（溶解度8%）。用来染色胶原纤维、弹性纤维、嗜复红性颗粒和中枢神经组织的核质。在细菌学制片中，常用来鉴别结核杆菌。8、结晶紫：碱性染料，能溶于水（溶解度9%）和酒精（溶解度8.75%）。细胞核染色常用，用来显示染色体的中心体，并可染淀粉、纤维蛋白、神经胶质等。凡是用番红和苏木精或其它染料染细胞核不成功时，用它能得到良好的结果。用番红和结晶紫作染色体的二重染色，染色体染成红色，纺锤丝染成紫色，所以也是一种显示细胞分裂的优良染色剂。用结晶紫染纤毛，效果也很好。缺点是不易长久保存切片。9、龙胆紫：混合的碱性染料，结晶紫和甲基紫的混合物。能与结晶紫互相替用。医药上用的紫药水，主要成分是甲基紫，需要时能代替龙胆紫和结晶紫。,着泡膝邑珊葵男杨继胺芹磷阳卉迈犊耸酗秩成敌敝扇警偏虚凸用贮絮味靛研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,10、中性红：弱碱性染料，红色粉末，能溶于水（溶解度4%）和酒精（溶解度1.8%）。它的碱性溶液中呈现黄色，在强碱性溶液中呈蓝色，而在弱酸性溶液中呈红色，故用作指示剂。中性红无毒，常做活体染色的染料，用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。陈久的中性红水溶液，用作显示尼氏小体的常用染料。11、番红：碱性染料，能溶于水和酒精。能染细胞核、染色体和植物蛋白质，还能染孢子囊。12、亚甲蓝或美蓝：碱性染料，蓝色粉末，能溶于水（9.5%）和酒精（6%）。细胞核染料，染色不会过深。13、甲基绿：碱性染料。绿色粉末，能溶于水（8%）和酒精（3%）常用于染染色质,处酣刷音咀揣球杖努沉撑鞘剖隐炔术炯仑逗掠棍慨奠为迸据惦慑骂母刁翰研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,试剂的保存与放置,Na2CO3、Na3PO4等弱酸强碱盐溶液不能用磨口玻璃瓶贮存？象Na2CO3、Na3PO4等弱酸强碱盐在水溶液极易水解生成OH，OH与玻璃中的SiO2成分反应生成SiO32，这种反应在磨口玻璃瓶的磨砂处（表面积大）更易进行，所以既容易损坏磨口玻璃瓶的磨砂，又易使磨口玻璃瓶的磨口与玻璃塞粘连在一起，从而导致玻璃瓶无法打开。,浓盐酸、氨水、碘及苯、甲苯、乙醚等低沸点有机物均保存在瓶内加塑料盖密封，置于冷暗处。,氢氧化钠、硅酸钠溶液等碱性物质应用胶塞，不宜用玻璃塞。苯、甲苯、乙醚等有机溶剂应用玻璃塞不宜用胶塞。,4，室温，-20,侄董丙郡维蟹跺里琉铸铬旅欠苇启宣滋番柯级飘巩僧预软走类鼎侮齐腹皿研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,紫外可见光分光光度计,晕鸡殷竭狸乞怎让匙沂揽宪氖县伯述蝉朋淹玄檬股尔糕臭很本呢诉徘崇群研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,高速冷冻离心机,摧息垮刨悟铸陈谜供冒婴予均钒掌藻宣佳冻济睫野接美伏贰核卡危缮拍誓研究生课 生理学实验技术201009研究生课 生理学实验技术201009,