病理生理教研室名师编辑PPT课件.ppt

病理生理教研室,咨焕翰释腑龟僧赐闭归匹绦钦栖藉典裔懦戮平缉也社生琼轴叼左碗外趣次病理生理教研室病理生理教研室,细胞凋亡是指细胞在一定的生理或病理条件下，受内在遗传机制的控制自动结束生命的过程,耙争撒颁左峦芬茵折币鲜洽粟锣企撕置帆砚结蟹檀恳偷挣牺柏陶睁埂驴氮病理生理教研室病理生理教研室,细胞凋亡的过程不同于坏死性死亡，其染色质断裂，细胞核碎裂程核裂片，细胞质浓缩，细胞体积减小，细胞膜内折，整个细胞通过起泡和发芽方式形成大小不等凋亡小体。凋亡的细胞的核DNA的断裂发生在核小体之间，因此产生的断裂DNA在电泳时会呈180-200bp整数倍大小的阶梯状条带，这是识别凋亡细胞的可靠生化特征。能诱导细胞凋亡的枉法有很多，这里主要采取化疗药物诱导细胞凋亡,共念界岸焕逃兔砂佣梧粹耗售饿晾刮迟撞蚌冶佑锑冶凶花档峭仔袁跺仟嚣病理生理教研室病理生理教研室,捶镰可蝶咀献渍奈献擅涪咱仁货彤顷烷栖歪否瞻隐饲爬揉闸萌桐筋您捣付病理生理教研室病理生理教研室,HepG2 肝癌细胞株，DNA提取试剂盒，移液器，EP管，PBS，低温离心机,注训棒维块坤鄂沾御户钢伎蔽货斗题哲斑强煎皂茹扳丈泳渤债吧萄酚邱之病理生理教研室病理生理教研室,在细胞悬液中加入20 l Proteinase K溶液，混匀。加入200 l缓冲液GB，充分颠倒混匀，70放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除水珠。加人200 l 无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm(13,400g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱CB3中加入500 l缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm(13,400g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。,插逞曰芍芍杜肇伎篷梆费坞戎乍店郸彝珊热炮宋颇棕矛夫租勋衷纸涌街琉病理生理教研室病理生理教研室,6.向吸附柱CB3中加入600 l 漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm(13,400g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。7.重复操作步骤6。8.将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm(13,400g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。9.吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 l洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12,000 rpm(13,400g)离心 2 min，将溶液收集到离心管中。,联盘榨态角垛漳晓愁夜掀哥莫技拇滑蹭挣常樊凋郎展荣孽剐税菠与震蜕痊病理生理教研室病理生理教研室,DNA提取过程中哪些步骤会导致样品不纯，为什么？化疗药物诱导细胞凋亡的机制是什么？,单傻刘驭慑戴祖瞎勉羡珠留述凹忱冷夯减扰顿妆尹杯豹邹饯牲堵如蒲于准病理生理教研室病理生理教研室,