实验九动物细胞培养文档资料.ppt

一、实验目的,掌握无菌操作；掌握原代和传代细胞培养；了解培养成纤维细胞的形态。,原代培养：培养直接来自动物机体的细胞群，将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶称为传代或传代培养。细胞株：从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。细胞系：从肿瘤组织培养建立的细胞群或培养过程中发生突变或转化的细胞，可无限繁殖。,二、实验原理,三、实验器材与试剂,1.器具显微镜、电热恒温水浴锅、天平、CO2培养箱、蒸汽灭菌器、超净工作台、解剖刀、眼科剪、眼科镊、培养皿、锥形瓶、容量瓶、纱布、培养瓶、移液枪。2.材料9-12 日龄发育良好的鸭胚。,3.主要试剂双蒸水、Hanks液、0.25%胰蛋白酶、EDTA、NaHCO3、台盼蓝、洋红。营养液：DMEM培养基（含8%小牛血清、1万单位/ml青、链霉素）。维持液：DMEM培养基（含5%小牛血清、1万单位/ml青、链霉素）。,四、原代培养,1.酒精棉球消毒鸭蛋，剥出鸭胚，去头、翅、爪和内脏，加Hanks 液，剪碎为0.5-1mm3 的小块，Hanks 液洗涤2-3 次。2.组织块移入培养瓶，间距0.5cm摆放后倒置培养瓶，加少量营养液，保持湿润，37 培养，2hr后翻转培养瓶，添营养液继续培养。3.定期观察细胞贴壁生长状况，如颜色变黄，说明细胞生长，3-5天后更换培养液。4.倒置显微镜下观察拍照。5.单层细胞用Hanks 液洗涤后，加入维持液，用于原代细胞维持。,五、传代培养,当培养细胞接近汇合成片时，倾去培养液。加入0.25%（含0.02%EDTA）消化2-3分钟，倾去大部分消化液，留少量消化液浸润细胞。发现细胞层出现裂痕或空洞后，加入Hanks 液洗去残留消化液，终止消化。加适量营养液吹打分散，补加营养液后，1：2分装培养。汇合后挑取少许细胞，染色，观察拍照。,原代培养的绍鸭成纤维细胞，相差显微镜照片,正常细胞,凋亡细胞,分裂中期细胞,传代培养的绍鸭成纤维细胞形态（DAPI染色）,六、作业,1.细胞培养过程中应该注意哪些事项？2.描绘培养成纤维细胞的形态（或提供照片）。,