DNA的粗提取与鉴定 (2).ppt

DNA的粗提取与鉴定,基础知识：1、DNA粗提取的原理2、提取DNA的溶解性原理包括哪些方面？,提取DNA的原理包括DNA的溶解性和耐受性两个方面。DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精。,思考1分析图51DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度有何特点？要使DNA溶解，需要使用什么浓度？要使DNA析出，又需要使用什么浓度？,在0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。,思考2 在溶解细胞中的DNA时，人们通常选用2mol/LNaCl溶液；将DNA分子析出的方法是向溶有DNA的NaCl溶液中缓慢注入蒸馏水，以稀释NaCl溶液。酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精（特别是95冷却酒精）但细胞中蛋白质可溶于酒精。问：采用DNA不溶于酒精的原理，可以达到什么目的？,将DNA和蛋白质进一步分离,思考3 提取DNA还可以利用DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。利用该原理时，应选用怎样的酶和怎样的温度值？,蛋白酶，因为酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对DNA产生影响。温度值为6080，因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。补充：DNA的变性是指DNA分子在高温下解螺旋，其温度在80以上，如在PCR技术中DNA变性温度在95。,DNA的鉴定原理 当鉴定提取出的物质是否是DNA时，需要使用什么指示剂进行鉴定？,在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色,原理总结：1、利用不同浓度NaCl溶液溶解或析出DNA，可以从细胞中提取和提纯DNA；2、利用酒精进一步将DNA与蛋白质分离开来 达到提纯的目的；3、利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是 DNA,1、实验材料不同生物的组织中DNA含量不同。在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。你认为教材提供的材料中哪些不适合提取DNA？从核DNA数目来看，猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，猕猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。,哺乳动物的血液和液体培养基中的大肠杆菌。,鸡血、猕猴桃。,2、破碎细胞，获取含DNA的滤液若选用鸡血和洋葱作实验材料，则怎样获取含DNA的滤液？在以上实验中，加入蒸馏水、洗涤剂和食盐的作用分别是什么？过滤时应当选用（滤纸、尼龙布）。,在鸡血细胞液中加入一定量蒸馏水并用玻棒搅拌，过滤后收集滤液；切碎洋葱，加入一定量洗涤剂和食盐，搅拌研磨，过滤后收集滤液。,血细胞在蒸馏水中大量吸水而张裂；洗涤剂瓦解细胞膜；食盐溶解DNA物质；选用尼龙布进行过滤。,思考：在处理植物组织时需要进行研磨，其目的是什么？研磨不充分产生什么结果？具体做法：10mL鸡血20mL蒸馏水同方向搅拌3层尼龙布过滤滤液,破碎细胞壁，使核物质容易溶解NaCl 溶液中；研磨不充分会使DNA的提取量减少,3、去除滤液中的杂质方案一：30mL滤液35gNaCl同方向搅 拌，DNA溶解加入蒸馏水DNA析出过滤得到过滤物放到2mol/LNaCl溶液中溶解DNA-NaCl溶解液方案二：30mL滤液嫩肉粉（木瓜蛋白酶）静置1015分钟DNA滤液方案三：30滤液6067处理过滤获得DNA滤液,方案一的原理：DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同方案二的原理：蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA；方案三的原理：蛋白质和DNA的变性温度不同。,4、DNA析出与鉴定（1）在滤液中仍然含有一些杂质，怎样除去 这些杂质呢？得到的DNA呈何颜色？滤液与等体积的冷却酒精混合均匀，静置23分钟析出的白色丝状物就是DNA。DNA呈白色。（2）怎样鉴定析出的白色丝状物就是DNA呢？阅读教材。,简述DNA的鉴定过程。具体做法：试管2支，编号甲、乙各加等5mLNaCl溶液甲中放入少量白色丝状物，使之溶解各加4mL二苯胺，混合均匀沸水浴5min观察颜色变化,DNA的鉴定,其它注意事项：1、在鸡血中加入柠檬酸钠防止凝固；2、鸡血静置或离心以提高细胞悬液浓度；3、使用塑料烧杯；使用尼龙布过滤；4、玻棒沿同一方向搅拌；5、玻棒搅拌要缓慢（细胞破裂快速搅拌）；玻棒不要碰到烧杯壁；6、二苯胺试剂要现用现配等。,拓展：,为了提高DNA纯度，在科学实验中通常使用的洗涤剂有十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、十二烷基硫酸钠（SDS）。,