啤酒厂化验室设计.doc

啤酒厂化验室设计广西工业职业技术学院设计说明书课题名称： 啤酒厂微生物实验室设计 姓名： 廖国旭 专业： 食品药品监督管理 班级： 药监1031班 起止日期： 指导教师： 韦丽 前言设计化验室目的在于对啤酒原辅料及成品进行检验，确保啤酒的质量与安全，全面控制和管理生产，保证和监督啤酒质量和卫生指标，提高质量安全和达到食品可接受水平，保证饮品质量，维护消费者权利，为企业提供有力销售保障，使企业强有力的立足于世界市场。化验室基本任务是对啤酒原辅料、半成品及成品进行检验，确保啤酒的质量与安全，全面控制和管理生产，保证和监督啤酒质量和卫生指标，提高质量安全和达到食品可接受水平，保证饮品质量。化验室功能是为啤酒的质量提供有效的保障，让啤酒达到消费者可接受水平，保证啤酒质量，通过工作人员运用精密的检测仪器设备对啤酒进行检验与验证，以合格的身份进入销售市场，让消费者买的放心喝得开心。化验室主要由理化实验室、微生物室、值班室、办公室、仪器室、天平室、更衣室、洗涮室、缓冲间、无菌室、准备室。摘要对于啤酒生产来说，质量检验的重要性是不言而寓的。化验室应该摆脱仅仅进行化验的狭隘定义，而要为啤酒生产的各个工序提供指导，对啤酒质量进行有效的控制。为保证分析结果的准确性，就要从多个方面对化验室进行建造，建立合理完善的管理制度。本分析化验室主要担任本厂所有原料、半成品及成品的检测,起到控制和管理生产,保证和监督本厂生产的味精的质量和卫生指标的作用,也为开发新产品、制定合理的工艺参数提供数据依据.本分析化验室主要包括:办公室、仪器室、试剂室、理化实验室、准备室、微生物检验室.啤酒厂分析化验室的主要任务是对原材料分析、半成品化验分析、成品化验分析起到控制和管理生产，保证和监督食品质量和卫生指标作用。在成品成厂时，必须对出厂的各规格啤酒，经过检验，各理化指标、技术质量均要符合卫生标准，以保证人民健康和商品信誉。本分析化验室的整体目标是完成对原料、辅料、半成品及成品的检测和质量控制，保证产品的质量。并对新产品、新工艺的开发。目录1.啤酒原料、半成品及成品的检测项目及标准······················41.2原料的检测项目及标准······································41.3半成品检测项目及标准······································41.4成品检测项目及标准········································52.啤酒原料、半成品及成品的检测方法····························62.1啤酒原料的检测方法········································62.2啤酒半成品的检测方法···································72.3啤酒成品的检测方法······································7-233.试剂和仪器清单·············································243.1试剂清单·················································253.2玻璃仪器清单············································263.3设备清单················································273.4化验室的月试剂消耗量······································274.化验室的平面布置图及设计说明································284.1化验室设置···············································294.2化验室的平面布置图·······································304.3设计说明（包括水、电、平面布置说1明）······················315.化验室人员配制和组织管理····································326.化验室的岗位责任制··········································347.参考文献····················································368.谢辞···················································361.啤酒原料、半成品及成品的检测项目及标准1.1啤酒半成品检测项目及标准序号微生物检验检测标准1致病菌、厌氧菌不得检出2乳酸菌数1×106cfu/mL1.2啤酒成品检测项目及标准序号微生物检测项目检测标准1菌落总数502大肠菌群33致病菌不得检出2.啤酒半成品及成品的检测方法2.1半成品2.1.1酵母死活细胞（死亡率）的测定活的菌体，由于新陈代谢不停的进行着，细胞内氧化还原值（rH）较小，而还原力强。这时如有像美蓝那样的无毒染料进入活的细胞内，即被还原脱色：而死的细胞代谢停止，无还原力，即被染成蓝色。美蓝无毒，且能为活细胞还原成无色故多用于区别细胞的死活。但美蓝浓度、作用时间等都用影响，因此以制片后五分钟内计算的死细胞数为据。检查方法：取0.1%美蓝一滴，置载玻片中央，然后去酒母液少许和入美蓝液中，搅拌均匀，加盖玻片，在显微镜下检查数已变蓝的细胞及未变蓝的细胞（可数56个视野的细胞数），计算死细胞占总细胞数的百分率。死亡率的计算：酵母死亡率一般用百分数表示，即死亡细胞占总细胞数的百分数，在显微镜下数一定的细胞数，并记录死活细胞数，按下式计算死亡率死亡率=b/a%2.2成品2.2.1志贺氏菌检验2.2.1.1范围本标准规定了食品中志贺氏菌(Shigella)的检验方法。本标准适用于食品中志贺氏菌的检验。2.2.1.2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a恒温培养箱：36±1；b冰箱：25；c膜过滤系统；d厌氧培养装置：41.5±±1；e电子天平：感量0.1g；f显微镜：10×100×；g均质器；h振荡器；i无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头；j无菌均质杯或无菌均质袋：容量500mL；k无菌培养皿：直径90mm；lpH计或pH比色管或精密pH试纸；m全自动微生物生化鉴定系统。2.2.1.3培养基和试剂a志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素。b麦康凯（MAC）琼脂。c木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD）琼脂。d志贺氏菌显色培养基。e三糖铁（TSI）琼脂。f营养琼脂斜面。g半固体琼脂。h葡萄糖铵培养基。i尿素琼脂。j-半乳糖苷酶培养基。k氨基酸脱羧酶试验培养基。l糖发酵管。m西蒙氏柠檬酸盐培养基。n粘液酸盐培养基。o蛋白胨水、靛基质试剂。p志贺氏菌属诊断血清。q生化鉴定试剂盒。2.2.1.4操作步骤2.2.1.5增菌以无菌操作取检样25g（mL），加入装有灭菌225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均质器以8000r/min10000r/min均质；或加入装有225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1min2min，液体样品振荡混匀即可。于41.5±，厌氧培养16h20h。2.2.1.6分离取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于36±1培养20h24h，观察各个平板上生长的菌落形态。宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌。若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48h再进行观察。志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表1。表1志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板志贺氏菌的菌落特征MAC琼脂无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐XLD琼脂粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐志贺氏菌显色培养基按照显色培养基的说明进行判定2.2.1.7初步生化试验2.2.1.8自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，分别接种TSI、半固体和营养琼脂斜面各一管，置36±1培养20h24h，分别观察结果。2.2.1.9凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸（发酵葡萄糖，不发酵乳糖，蔗糖）、不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体）、不产硫化氢、半固体管中无动力的菌株，挑取其2.2.1.6中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验和血清学分型。2.2.1.10生化试验及附加生化试验2.2.1.11生化试验用2.2.1.8中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验，即-半乳糖苷酶、尿素、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶苷的分解试验。除宋内氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌13型的鸟氨酸阳性;宋内氏菌和痢疾志贺氏菌1型，鲍氏志贺氏菌13型的-半乳糖苷酶为阳性以外，其余生化试验志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。另外由于福氏志贺氏菌6型的生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌相似，必要时还需加做靛基质、甘露醇、棉子糖、甘油试验，也可做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属。志贺氏菌属生化特性见表2。表2志贺氏菌属四个群的生化特征生化反应A群：痢疾志贺氏菌B群：福氏志贺氏菌C群：鲍氏志贺氏菌D群：宋内氏志贺氏菌ß-半乳糖苷酶a-a+尿素赖氨酸脱羧酶鸟氨酸脱羧酶b+水杨苷七叶苷靛基质/()/甘露醇c+棉子糖甘油()()d注：+表示阳性；-表示阴性；-/+表示多数阴性；+/-表示多数阳性；（+）表示迟缓阳性；d表示有不同生化型。a痢疾志贺1型和鲍氏13型为阳性。b鲍氏13型为鸟氨酸阳性。c福氏4型和6型常见甘露醇阴性变种。2.2.1.12附加生化实验由于某些不活泼的大肠埃希氏菌（anaerogenicE.coli）、A-D（Alkalescens-Disparbiotypes碱性-异型）菌的部分生化特征与志贺氏菌相似，并能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集；因此前面生化实验符合志贺氏菌属生化特性的培养物还需另加葡萄糖胺、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验(36培养24h48h)。志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别见表3。表3志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别生化反应A群：痢疾志贺氏菌B群：福氏志贺氏菌C群：鲍氏志贺氏菌D群：宋内氏志贺氏菌大肠埃希氏菌A-D菌葡萄糖铵西蒙氏柠檬酸盐dd粘液酸盐dd注1：+表示阳性；-表示阴性；d表示有不同生化型。注2：在葡萄糖铵、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验三项反应中志贺氏菌一般为阴性，而不活泼的大肠埃希氏菌、A-D（碱性-异型）菌至少有一项反应为阳性。2.2.1.13如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，可根据表3的初步判断结果，用4.3.1中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。2.2.1.14结果报告综合以上生化试验的结果，报告25g（mL）样品中检出或未检出志贺氏菌。2.2.3沙门氏菌检验2.2.3.1范围本标准规定了食品中沙门氏菌（Salmonella）的检验方法。本标准适用于食品中沙门氏菌的检验。2.2.3.2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：1）冰箱：25。2）恒温培养箱：36±1，42±1。3）均质器。4）振荡器。5）电子天平：感量0.1g。6）无菌锥形瓶:容量500mL，250mL。7）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。8）无菌培养皿：直径90mm。9）无菌试管：3mm×50mm、10mm×75mm。10）无菌毛细管。11）pH计或pH比色管或精密pH试纸。12）全自动微生物生化鉴定系统。2.2.3.3培养基和试剂1）缓冲蛋白胨水（BPW）。2）四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液。3）亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液。4）亚硫酸铋（BS）琼脂。5）HE琼脂。6）木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂。7）沙门氏菌属显色培养基。8）三糖铁（TSI）琼脂。9）蛋白胨水、靛基质试剂。10）尿素琼脂（pH7.2）。11）氰化钾（KCN）培养基。12）赖氨酸脱羧酶试验培养基。13）糖发酵管。14）邻硝基酚-D半乳糖苷（ONG）培养基。15）半固体琼脂。16）丙二酸钠培养基。17）沙门氏菌O和H诊断血清。18）生化鉴定试剂盒。2.3.3.4操作步骤2.3.3.4.1前增菌称取25g（mL）样品放入盛有225mLBPW的无菌均质杯中，以8000r/min10000r/min均质1min2min，或置于盛有225mLBPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min2min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH值，用1mol/mL无菌NaOH或HCl调pH至6.8±0.2。无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36±1培养8h18h。如为冷冻产品,应在45以下不超过15min,或25不超过18h解冻。2.3.3.4.2增菌轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，转种于10mLTTB内，于42±1培养18h24h。同时，另取1mL，转种于10mLSC内，于36±1培养18h24h。2.3.3.4.2分离分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于36±1分别培养18h24h（XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板）或40h48h（BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表1。表1沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板沙门氏菌BS琼脂菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。HE琼脂蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。XLD琼脂菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。沙门氏菌属显色培养基按照显色培养基的说明进行判定。2.3.3.4.3生化试验自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于36±1培养18h24h，必要时可延长至48h。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果见表2。表2沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结果三糖铁琼脂赖氨酸脱羧酶试验培养基初步判断斜面底层产气硫化氢KA（）（）可疑沙门氏菌属KA（）（）可疑沙门氏菌属AA（）（）可疑沙门氏菌属AA/非沙门氏菌KK/非沙门氏菌注：K：产碱，A：产酸；：阳性，：阴性；（）：多数阳性，少数阴性；/：阳性或阴性。接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时,可直接接种蛋白胨水（供做靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN）培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36±1培养18h24h，必要时可延长至48h，按表3判定结果。将已挑菌落的平板储存于25或室温至少保留24h，以备必要时复查。表3沙门氏菌属生化反应初步鉴别表反应序号硫化氢（H2S）靛基质pH7.2尿素氰化钾（KCN）赖氨酸脱羧酶A1A2A3/注：阳性；阴性；/阳性或阴性。反应序号A1：典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN和赖氨酸脱羧酶3项中有1项异常，按表4可判定为沙门氏菌。如有2项异常为非沙门氏菌。表4沙门氏菌属生化反应初步鉴别表pH7.2尿素氰化钾（KCN）赖氨酸脱羧酶判定结果甲型副伤寒沙门氏菌（要求血清学鉴定结果）沙门氏菌或（要求符合本群生化特性）沙门氏菌个别变体（要求血清学鉴定结果）注：表示阳性；表示阴性。反应序号A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。反应序号A3：补做ONG。ONG阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶阳性,甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。必要时按表5进行沙门氏菌生化群的鉴别。表5沙门氏菌属各生化群的鉴别项目卫矛醇山梨醇水杨苷ONG丙二酸盐KCN注：表示阳性;表示阴性。如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，可根据5.4.1的初步判断结果，从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，用生理盐水制备成浊度适当的菌悬液，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。2.3.3.5结果与报告综合以上生化试验的结果，报告25g（mL）样品中检出或未检出沙门氏菌。2.2.4金黄色葡萄球菌检验2.2.4.1设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱：36±1。、冰箱：25、恒温水浴箱：3765、天平：感量0.1g、均质器、振荡器。无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。无菌培养皿：直径90mm。注射器：0.5mL。pH计或pH比色管或精密pH试纸。2.2.4.2培养基和试剂10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤。7.5%氯化钠肉汤。血琼脂平板。Baird-Parker琼脂平板脑心浸出液肉汤(BHI)。兔血浆。稀释液：磷酸盐缓冲液。营养琼脂小斜面。革兰氏染色液。无菌生理盐水2.2.4.3操作步骤2.2.4.3.1样品的处理称取25g样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000r/min10000r/min均质1min2min，或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min2min。若样品为液态，吸取25mL样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。2.2.4.3.2增菌和分离培养将上述样品匀液于36±1培养18h24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板36±1培养18h24h。Baird-Parker平板36±1培养18h24h或45h48h。金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直径为2mm3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。2.2.4.3.3鉴定染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5m1m。血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落1个或以上，分别接种到5mLBHI和营养琼脂小斜面，36±1培养18h24h。取新鲜配置兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加入BHI培养物0.2mL0.3mL，振荡摇匀，置36±1温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mLBHI，36±1培养18h48h，重复试验。葡萄球菌肠毒素的检验：未检出金黄色可疑食物中毒样品或产生葡萄球菌肠毒素的金黄色葡萄球菌菌株的鉴定，应按附录B检测葡萄球菌肠毒素。2.2.4.3.4结果与报告结果判定：符合5.2.3、5.3，可判定为金黄色葡萄球菌。结果报告：在25g（mL）样品中检出或葡萄球菌。2.2.4菌落总数2.2.4.1样品的稀释固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min10000r/min均质1min2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min2min，制成1:10的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。2.2.4.2检样25g(mL)样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释选择2个3个适宜稀释度的样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养皿内培养计数各平板菌落数计算菌落总数每皿中加入15mL20mL平板计数琼脂培养基，混匀报告用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。按上述操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。根据对样品污染状况的估计，选择2个3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。2.2.4.3培养琼脂凝固后，将平板翻转，36±1培养48h±2h。水产品30±1培养72h±3h。如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按6.2.1条件进行培养。2.2.4.4菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。选取菌落数在30CFU300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。2.2.4.5结果与报告若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。计算：（1）式中：N样品中菌落数；C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d稀释因子（第一稀释度）。若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。2.2.4.6菌落总数的报告菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。7.2.2菌落数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。2.2.5大肠菌群测定2.2.5.1范围木标准规定了食品中大肠菌群的测定方法。本标准适用于各类食品中大肠菌群的测定。2.2.5.2仪器和试剂冰箱:0-4。恒温培养箱:36士1。恒温水浴锅:46士1.显微镜:10X100X。均质器或灭菌乳钵。架盘药物天平:0g-500g,精确至0.5g.灭菌吸管1mL(具0.01mL刻度),10mL(具0.1mL刻度)。灭菌锥形瓶:500mL.灭苗玻璃珠:直径约5mm.灭菌培养皿:直径90mm.灭苗试管:16mm×160mm.灭菌刀.剪子、摄子等。2.2.5.3培养基和试剂乳糖胆盐发酵管。伊红美蓝琼脂平板。乳糖发酵管。EC肉汤。磷酸盐缓冲液.0.85%灭菌生理盐水.革兰氏染色液。2.2.5.4操作步骤2.2.5.4.1检样稀释以无菌操作将检样25g（mL)放于含有225ml，灭菌生理盐水或其他稀释液的灭茵玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以8000r/min10000r/min的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注人含有9ML灭菌内，振摇试管混匀，做成1：100的稀释液。另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递一次，换用1支1ml灭菌吸管。根据食品卫生标准要求或对检样污染情汉的估计，选择三个稀释度，每个稀释度，接种三管。2.2.5.4.2乳糖发酵试验将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1mL以及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种三管，置36士1温箱内，培养24h士2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为人肠菌群阴性，如有产气省，则按下列程序进行。2.2.5.4.3分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36士1温箱内，培养18h-24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。2.2.5.4.4证实试验在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1个2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36士1培养箱内培养24h士2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。2.2.5.4.5报告根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值.2.2.5.4.6粪大肠菌群(Faecalcoliform)用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见4.2)转种于EC肉汤管内，置44.5士0.2水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面)，培养24h士2h，经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性；如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置培养18h-24h，凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。2.2.5.5结果报告根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100mL（g）粪大肠菌群的MPN值（见表1）。表1大肠菌群最可能数（MPN）检索表阳性管数MPN100mL（g）95%可信限1mL（g）×30.1mL（g）×30.01mL（g）×3下限上限000000000123<30306090<590000011110123306090120<51300000222201236090120160000033330123901301601901111000001234070110150<51020021011111111012370110150190103023036011112222012311015020024030360111133330123160200240190222200000123901402002601030360370222222220123210280350420401004701500222233330123290360440530333300000123230390640950407015012001300380033332222012343075012001600701403002100230038003333222201239301500210029001503003503800440047003333333301232400460011000240003607101500130002400048000注1：本表采用3个稀释度1mL(g)、0.1mL(g)和0.01mL(g)，每稀释度三管。注2：表内所列检样量如改用10mL(g)、1mL(g)和0.1mL(g)时，表内数字应相应降低10倍；如改用0.1mL、0.01mL（g）和0.001mL(g)时，其余可类推。3.试剂和仪器清单3.1试剂清单试剂名称规格数量蔗糖500g2葡萄糖500g2D果糖25g2乳糖500g2淀粉酶250g2胰蛋白酶250g2琼脂粉100g2牛肉膏500ml2酵母膏500ml2大豆蛋白胨500ml2蛋白胨500ml2胰蛋白胨500ml2胰酪胨500g2植物蛋白胨500g2多胨500g2氢氧化钠500g2品红25g4异戊醇500ml2乙醇500ml2石蕊25g3乙醚500ml2浓硫酸500ml2甲基红25g4硫酸铜、500g4硫酸钾500g4硼酸250ml4溴甲酚绿25ml2酚酞25ml3盐酸500ml3磷酸500ml23.2玻璃仪器清单仪器名称规格（ml）需要量（个）烧杯100104004锥形瓶250105005漏斗2分液漏斗2镊子4吸管110210510105205255玻璃棒5灭菌刀或剪子5橡胶管5试管18*18010烧瓶5003酸、碱式滴定管50各3量筒102502100525055002温度计1005酒精灯5表面皿中号5