生物化学生物化学生物化学第三章酶.pptx

第三章 酶,Enzyme,酶的概念,目前将生物催化剂biocatalyst分为两类：,*酶 Enzyme：*核酶 Ribozyme：RNA或DNA,本章主要内容：,第一节、酶通论 第二节、酶促反响动力学 第三节、酶促反响的机理 第四节、酶的调节 第五节、维生素与辅酶,General Disscusion of Enzyme,第一节、酶通论,一、酶的研究历史,*公元前两千多年，我国已有酿酒记载。,*1857年 Pasteur提出酒精发酵是酵母细胞活动的结果。,*1897年 Buchner兄弟证明不含细胞的酵母汁也能进展乙醇发酵。,*1926年 Sumner首次从刀豆中提出脲酶结晶。,证明了酶是蛋白质,*1930年 Northrop等得到了胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的结晶。,*某些RNA有催化活性 ribozyme，核酶,Thomas Cech University of Colorado at Boulder,USA,Sidney Altman Yale University New Haven,CT,USA,2人共同获1989年诺贝尔化学奖。,酶及生物催化剂概念的开展,克隆酶、遗传修饰酶蛋白质工程新酶,蛋白质类：Enzyme,(天然酶、生物工程酶),核酸类：Ribozyme;Deoxyribozyme,模拟生物催化剂：,抗体酶：abzyme,二、酶的催化作用特点,(一)、酶与一般催化剂的共性,1、只能催化热力学上允许的反响，降低反响的活化能,2、不改变化学反响平衡常数,3、反响前后酶没有质和量的改变,1、高效性,二、酶作为生物催化剂的特点,*酶的催化效率通常比非催化反响高1081020倍，比一般催化剂高1071013倍。,*酶加速反响的机理是降低反响的活化能。,酶促反响活化能的改变,活化能(activation energy)：底物分子从初态转变到活化态所需的能量。,绝对专一性(absolute specificity)：相对专一性(relative specificity)：立体异构专一性(stereo specificity)：,2、专一性(specificity),绝对专一性,酶只作用于特定构造的底物，进展一种专一的反响，生成一种特定构造的产物。如：,乳酸脱氢酶Lactate dehydrogenase,立体异构专一性,3、反响条件温和,4、酶的催化活性可调节控制,*对酶生成与降解量的调节*对酶活性的调节,*酶促反响一般在常温、常压、中性pH 条件下进展。*强酸、强碱、高温条件下条件，将引起酶的失活。,三、酶的分子组成,*单纯酶(simple enzyme)*结合酶(conjugated enzyme),辅助因子按其与酶蛋白结合的严密程度分为,辅酶(coenzyme):结合疏松，可用透析或超滤的方法除去。,辅基(prosthetic group):与酶蛋结合严密，不能用透析或超滤的方法除去。,酶蛋白和辅助因子单独存在均无催化活性，只有结合为全酶才有催化活性。,1、氧化复原酶类(oxidoreductases)2、转移酶类(transferases)3、水解酶类(hydrolases)4、裂解酶类(lyases)5、异构酶类(isomerases)6、合成酶类(ligases,synthetases),四、酶的分类,五、酶的活性和活性单位,1、酶活力:又称为酶活性，指酶催化一定化学反响的能力。,2、酶活力单位U Unit：又称酶单位，在规定条件最适条件下，一定时间内催化完成一定化学反响量所需的酶量。,3、酶活力的表示方法,1国际单位IU：1961年，在最适条件下每分钟转化1mol底物所需要的酶量为一个酶活力单位。即 1IU=1mol/min2国际单位Kat：1972年，指在最适条件下1秒钟内转化1mol底物所需的酶量。即 1 Kat=1mol/s Kat和IU的换算关系：1 Kat=6107 IU，1 IU=16.67n Kat,(3)比活力specific activity 酶的比活力比活性：每单位一般是mg蛋白质中的酶活力单位数酶单位/mg蛋白。,对同一种酶来讲，比活力愈高那么表示酶的纯度越高含杂质越少。,比活力是评价酶纯度上下的一个指标。,现有1g淀粉酶制剂，用水稀释1000mL,从中吸取0.5mL测定该酶的活力，得知5分钟分解0.25g淀粉。计算每克酶制剂所含的淀粉酶活力单位数。淀粉酶活力单位规定为：在最适条件下，每小时分解1g淀粉的酶量为1个火力单位。,问题？,第二节、酶促反响动力学,The Kinetics of Enzyme-Catalyzed Reaction,*概念研究各种因素对酶促反响速度的影响，并加以定量的阐述。*影响因素包括有酶浓度、底物浓度、pH、温度、抑制剂、激活剂等。,一、底物浓度对反响速度的影响,*单底物、单产物反响*酶促反响速度一般在规定的反响条件下，用单位时间内产物的生成量来表示*反响速度取其初速度，即底物的消耗量很小一般在5以内时的反响速度*底物浓度远远大于酶浓度,研究前提,1、当底物浓度较低时，反响速度与底物浓度成正比；反响为一级反响。,2、随着底物浓度的增高，反响速度不再成正比例加速；反响为混合级反响。,3、当底物浓度高达一定程度，反响速度不再增加，达最大速度；反响为零级反响,1913年，德国化学家Michaelis和Menten根据中间产物学说，推导出了著名公式米氏方程。,一、米氏方程,二、米氏方程式的推导,酶促反响模式中间产物学说,Km S,Km值等于酶促反响速度为最大反响速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。,三、Km的推导,当反响速度为最大反响速度的一半时,1、Km是酶的特征性常数之一，与酶的浓度无关；2、Km可近似表示酶对底物的亲和力；3、同一个酶对于不同底物有不同的Km值。,四、Km的意义,Km值的意义：,双倒数作图法，又称为林-贝氏(Lineweaver-Burk)作图法,五、Km和Vmax的测定,两边同时取倒数,*当SE，反响速度与酶浓度成正比。,0,V,E,*关系式为：V=K3 E,二、酶浓度对反响速度的影响,三、温度对反响速度的影响,最适温度(optimum temperature)：,最适pH(optimum pH)：,0,酶活性,pH,胃蛋白酶,淀粉酶,胆碱酯酶,2,4,6,8,10,四、pH对反响速度的影响,酶的抑制剂(inhibitor)：,区别于酶的变性,抑制剂对酶有一定选择性，而变性的因素对酶没有选择性,五、抑制剂对反响速度的影响,抑制作用的类型,不可逆性抑制(irreversible inhibition),可逆性抑制(reversible inhibition)：,*竞争性抑制(competitive inhibition)*非竞争性抑制(non-competitive inhibition)*反竞争性抑制(uncompetitive inhibition),(一)、不可逆性抑制作用,*概念：以共价键与酶活性中心的必需基团相结合，使酶失活，不能用透析、超滤等方法予以除去。*举例：有机磷化合物 羟基酶解毒-解磷定(PAM)重金属离子及砷化合物 巯基酶解毒-二巯基丙醇(BAL),有机磷化合物对羟基酶的抑制,二、可逆性抑制作用,*概念：以非共价键与酶或酶-底物复合物可逆性结合，使酶的活性降低或丧失；抑制剂可用透析、超滤等方法除去。,竞争性抑制非竞争性抑制反竞争性抑制,*类型：,1、竞争性抑制作用,特点：,*抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力及S；,*I与S构造类似，竞争酶的活性中心；,*动力学特点：Vmax不变，表观Km。,举例,1、丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制,2、磺胺药对细菌FH2合成酶的抑制,2、非竞争性抑制,特点：,*抑制剂与酶活性中心外的必需基团结合；,*抑制程度取决于I；,*动力学特点：Vmax，表观Km不变。,3、反竞争性抑制,特点：,*抑制剂只与ES结合；,*抑制程度取决与I及S；,*动力学特点：Vmax，表观Km。,各种可逆性抑制作用的比较,六、激活剂对反响速度的影响,激活剂(activator),如：Cl-是唾液淀粉酶的激活剂。,凡能提高酶活力的物质都是酶的激活剂。,1、无机离子：Na+、K+、Mg2+、Ca2+,2、有机分子：EDTA、谷胱甘肽,第三节、酶促反响的机理,The Mechanism of Enzyme-Catalyzed Reaction,结合部位：决定酶的专一性。,催化部位：决定酶的催化效率和催化反响的性质。,酶的活性中心(active center),一、酶的活性中心,底 物,活性中心以外的必需基团,结合基团,催化基团,活性中心,底物与酶的结合,酶活性中心的特点,*酶的活性中心只有几个氨基酸组成，多为极性氨基酸。*酶的活性中心是一个三维实体构造，*酶的活性中心与底物的结合通过次级键。*酶的活性中心具有柔性，可与底物诱导契合发生相互作用。*酶的活性中心位于酶分子外表的空穴“中，为非极性环境。,二、酶作用专一性的机制,1、锁钥学说(lock and key hypothesis),2、诱导契合学说(induced-fit hypothesis),1.锁 钥 学 说,锁钥学说：,认为整个酶分子的天然构象是具有刚性构造，酶：钥匙，底物：锁。一一对映。,2.诱 导 契 合 学 说,诱导契合学说:,该学说认为酶外表并没有一种与底物互补的固定形状，而只是由于底物的诱导才形成了互补形状。,三、酶作用高效性的机制,*邻近效应和定向效应,*“张力与“形变,*酸碱催化,*共价催化,*酶活性中心的疏水环境效应,邻近效应和定向效应,邻近效应和定向效应,第 四 节、酶 的 调 节,The Regulation of Enzyme,调节对象:关键酶,一、酶活性的调节,一酶原与酶原的激活,酶原(zymogen)：有些酶在细胞内合成或初分泌时只是酶的无活性前体，此前体物质称为酶原。,酶原的激活：从无活性的酶原转变为有活性的酶的过程。,酶原激活的机理：,胰蛋白酶原的激活过程,酶原激活的生理意义,防止细胞产生的酶对细胞进展自身消化，并使酶在特定的部位和环境中发挥作用，保证体内代谢正常进展。有的酶原可以视为酶的储存形式。在需要时，酶原适时地转变成有活性的酶，发挥其催化作用。,二、变构调节,*变构效应剂(allosteric effector),*变构调节(allosteric regulation),*变构酶(allosteric enzyme),变构调节举例,三、酶的共价修饰调节,共价修饰(covalent modification),常见类型磷酸化与脱磷酸化最常见乙酰化和脱乙酰化甲基化和脱甲基化腺苷化和脱腺苷化SH与SS互变,酶的磷酸化与脱磷酸化,酶蛋白,SerThrTyr,O,P,ATP,ADP,Pi,H2O,蛋白激酶,蛋白磷酸酶,同工酶：是指催化一样的化学反响，而酶蛋白的分子构造、理化性质乃至免疫学性质不同的一组酶。,四、同工酶Isoenzyme,活性中心相似或一样：催化同一化学反响。分子构造不同：理化性质和免疫学性质不同。,乳酸脱氢酶LDH)：由H和M两种亚基组成,在骨骼肌中占优势，富含碱性氨基酸,在心肌中占优势，富含酸性氨基酸,不同组织中LDH同工酶的电泳图谱,点样槽位置,丙酮酸,乳酸,乳酸脱氢酶,同工酶存在的意义,同工酶可能是机体对环境变化或代谢变化的一种调节方式，当一种同工酶受到抑制或破坏时，其他同工酶仍起作用，从而保证代谢的正常进展。,第五节、维生素与辅酶,Vitamine and Coenzyme,维生素vitamine是参与生物生长发育和代谢所必需的一类微量有机物质。绝大多数维生素作为酶的辅酶或辅基的组成成分，在物质代谢中起重要作用。,Vitamine，意为“Vital amine，中文意思就是“致命的胺，说明它的重要性。,一、维生素的发现和分类,*1519年，葡萄牙航海家麦哲伦率领的远洋船队从南美洲东岸向太平洋进发，船员生病。*1734年，生病的船员用野草充饥，不治而愈了。*1747年，英国海军在远航时多吃些柠檬，从此未发生过坏血病。*1890年，荷兰军医艾克曼的实验鸡群中爆发神经性皮炎。*1907年，将丢弃的米糠放回饲料中即可治愈鸡群。,主要脂溶性维生素的辅酶形式及主要功能,维生素 辅酶 功能1.维生素A1顺视黄醛视循环2.维生素D，二羟胆钙甾醇调节钙、磷代谢3.维生素E 保护膜脂质，抗氧化剂4.维生素K 参与氧化复原反响羧化反响的辅助因子,主要水溶性维生素和相应辅酶,维生素 辅酶 功能1.B1(硫胺素)TPP 醛基转移、-酮酸脱羧2.B2(核黄素)FMN、FAD 氧化复原反响、氢转移3.PP 尼克酸酰胺 NAD+、NADP+氧化复原反响、氢转移4.泛酸遍多酸 CoASH 酰基转移5.B6 吡哆醇醛、酸 磷酸吡哆醇醛 转氨、脱羧、消旋6.叶酸 FH4(THFA)传递一碳基团7.生物素 羧化辅酶8.C抗坏血酸 氧化复原作用9.硫辛酸 酰基转移、氧化复原反响10.B12氰钴氨素 分子重排、甲基化,本章内容完毕，谢谢！,