首都科技条件平台生物医药专业孵化器.doc

首都科技条件平台生物医药专业孵化器中关村生物医药园农业生物技术开放实验室服务手册北京中关村上地生物科技发展有限公司2004年9月一、简 介中关村生物医药园生物工程实验室主要从事农业微生物技术研究和植物基因工程技术研究工作，面向以农业生物技术为研发对象的企业和科研院所。实验室配有多名博士、硕士和专业技术人员，为项目的服务提供了可靠的技术保障。农业微生物技术研究室拥有微生物培养与纯化系统、细菌鉴定系统、实时荧光定量PCR系统、凝胶成像等完备的仪器设备。在兽医微生物方面，可完成病原学、疾病诊断技术、细胞培养技术和免疫增强技术、疫苗开发等研究工作；在饲用微生物方面，可完成菌种筛选、发酵工艺和稳定化技术的研究工作；在生物农药方面，可完成菌种筛选、发酵工艺和新型制剂技术的研究工作。植物基因工程技术研究室拥有组织培养系统、实时荧光定量PCR系统、基因枪、超速离心机等完备的仪器设备，可完成功能基因的分离、克隆和优化；高效植物表达载体的构建技术；功能基因的高效转化技术；分子标记辅助育种技术；转基因生物和产品的分子检测；农作物种子纯度与真伪性的分子鉴别等工作。二、服务流程 （1）客户根据服务项目内容，选择填写生物工程实验室病原微生物检测单、生物工程实验室cDNA文库订购单、生物工程实验室研发服务项目申请单、生物工程实验室分析测试申请单； （2）与客户就服务内容的可行性、进度、实施方案及收费标准等内容进行洽谈，必要时签订服务合同；（3）双方恪守各自职责，协调完成服务项目；（4）对于实验过程中出现的问题，应与客户及时沟通，协商解决，以客户满意为目的； （5）项目成果移交客户，记录服务效果。三 服务内容（一）农业微生物技术研究室1 菌种筛选 本实验室提供兽医微生物、饲用微生物和生物农药菌种筛选的服务。根据客户提出的要求，选用合理的方案。2 原核蛋白的表达与纯化将克隆化基因导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法在蛋白质纯化、定位、功能分析方面都是很有价值的。 提供的服务如下：l 目的基因的克隆：我们有多种原核表达载体（如：pET System、QIAexpress System）供客户选择，完全能满足不同的实验要求。我们会提供克隆好的质粒、菌株及测序报告，时间为23周。l 蛋白质的原核表达及纯化：我们将这一过程分为前期发酵条件的初步实验，纯化工艺的确定，后期的蛋白质的大量制备以及蛋白质鉴定三个部分，时间为13个月，最终我们提供给您 初步的发酵条件；比较合理的、可以放大的纯化工艺；纯化后的蛋白10mg左右，及SDS-PAGE蛋白电泳结果和详细的实验记录；l 交付的蛋白将通过Western检验以确定表达的蛋白的正确性，Western所用的抗体由客户提供。3 真核与原核表达载体的构建由客户提供基因和表达载体，构建流程由客户或本室确定。预计完成时间：13个月。根据构建步骤的多少和难易程度而定。4 真核蛋白的表达与纯化将克隆的基因导入毕赤酵母细胞用于表达大量蛋白质的方法在蛋白质纯化、功能分析及临床应用方面都是很有价值的。用该系统成功表达的外源基因有三十多种，其中大部分为医药制品，如人白介素2、人血清白蛋白、肿瘤坏死因子、乙肝表面抗原、人巨细胞病毒抗原、抗凝血银子水蛭素衍生物等，有些即将进入市场。也可在毕赤酵母细胞中生产完整的天然蛋白质分子，以研究其功能。我们提供的表达与纯化的工艺见第4条。5 抗体的制备l 抗体委托生产内容: 鸡、兔或羊的多克隆抗体生产 l 客户需要提供以下物品中的一种：（1） 目的cDNA或EST克隆 （2） 目的抗原（蛋白或多肽）l 服务成果：（1） 至少20mg 高效价特异性抗体。（2） 提供ELISA检测及相应报告；（3） 根据客户需要，可提供Western Blot及免疫组化检测服务，包括提供全部实验数据及照片； （4） 如果客户需要，可提供亲和纯化的多克隆抗体。 6 分析检测（1） ELISA检测实验室备有美国BIO-RAD公司生产的Model 550型酶标仪，可方便地进行蛋白样品的ELISA检测。（2） 病原微生物检测本实验室具有动物疫病诊断检测工作平台、分子生物学技术研究平台和酶标诊断技术研究平台，拥有先进的仪器设备和高级专业技术人才，可对猪、鸡等动物病原菌进行检测。（二）植物基因工程研究室1 植物基因组文库的构建本实验室可以为客户提供从总DNA提取、随机剪切、载体连接、转化、扩增到保存的基因组文库构建的全程服务。2 cDNA文库的构建l 技术路线：提取总RNA、纯化mRNA、合成cDNA双链、去除小片段、将双链cDNA连接到载体、转化或包装、扩增及保存。l 参数：库容大于106克隆/5g mRNA，插入片断大于300bp, 平均插入片断长度可达1.3Kb。l EST测序。3 农业重要功能基因的分离、克隆、优化2.1 克隆、亚克隆客户提供基因序列和材料,由本实验室设计并合成引物,通过PCR扩增,将扩增的基因片断回收,将其克隆到通用的载体上。2.2 Rapid amplification of cDNA Ends （RACE）通过对文库的筛选或使用简并引物进行PCR反应，常常只能获得不完整的cDNA序列，为了得到cDNA全长，还需克隆出其余部分。RACE便是为此而设计，它使采用传统筛库的方法寻找全长基因的过程从几个月，缩短为几天。尤其对于低丰度基因的克隆优势更为显著。4 单子叶与双子叶植物表达载体的构建由客户提供基因和表达载体（也可由本实验室提供），构建流程由客户或本室确定。预计完成时间：13个月。根据构建步骤的多少和难易程度而定。5功能基因的高效转化技术本实验室具有水稻、玉米、棉花等各种农作物的转化体系，并能够承担相关功能基因的高效转化。6 分子标记辅助育种DNA分子标记辅助育种技术，是通过利用与目标性状紧密连锁的DNA分子标记对目标性状进行间接选择的现代育种技术。该技术对目标基因的转移，不仅可在早代进行准确、稳定的选择，而且可克服再度利用隐性基因时识别难的问题，从而加速育种进程，提高育种效率。本实验室负责设计引物、定位群体的构建、目标基因的精细定位以及分子鉴定。7 原核蛋白的表达与纯化将克隆化基因导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法在蛋白质纯化、定位、功能分析方面都是很有价值的。提供的服务如下：l 目的基因的克隆： 我们有多种原核表达载体（如：pET System、QIAexpress System）供客户选择，完全能满足不同的实验要求。我们会提供克隆好的质粒、菌株及测序报告，时间为23周。l 蛋白质的原核表达及纯化：我们将这一过程分为前期发酵条件的初步实验，纯化工艺的确定，后期的蛋白质的大量制备以及及蛋白质鉴定三个部分，时间为13个月，最终我们提供给您 初步的发酵条件；比较合理的、可以放大的纯化工艺；纯化后的蛋白10mg左右，及SDS-PAGE蛋白电泳结果和详细的实验记录；l 交付的蛋白将通过Western检验以确定表达的蛋白的正确性，Western所用的抗体由客户提供。8 DNA、RNA的提取、纯化植物基因工程实验室备有超速离心机和不同规格的高速冷冻离心机，能够提取人类、动物、植物和微生物不同组织和器官的DNA、G-DNA、RNA。9 质粒DNA的提取、纯化、酶切、连接实验室备有的各种离心机，恒温孵育器和核酸电泳系统，能够方便地对质粒DNA进行各种操作，以便构建各种真核和原核载体。10 大肠杆菌感受态细胞的制备、转化美国BIO-RAD公司的Gene PulserII型电转化仪能够制备高效的大肠杆菌感受态细胞，便于进行基因克隆。11分析检测（1）转基因生物与产品的PCR检测客户仅需提供样品和基因的序列。本室负责引物的设计、合成，样品DNA的提取，PCR反应程序的确定以及PCR结果的电泳分析等等。（2） 农作物种子纯度与真伪性的分子检测采用SSR分子标记来检测。微卫星（ SSR ）是广泛分布于真核生物基因组中的短串联重复序列（17bp）， SSR 实验一般检测到的是一个单一的多等位基因位点；是共显性遗传，可鉴别杂合子和纯合子；结果重复性很高。通常使用聚丙烯酰胺凝胶电泳，分辨率高，可检测出单拷贝差异。SSR 引物需由用户提供，也可由用户提供引物序列，委托本公司合成。参考收费标准：￥1500/课题；样品量：30个样品/课题。详情面谈。（3） 核酸、蛋白质含量的测定瑞典生产的GeneQuan Pro型蛋白质核酸定量测定仪可提供单、双链DNA、寡聚核苷酸、蛋白质的定量测定、Lowry法和BCA的测定服务。（4） DNA、RNA电泳分析植物基因工程实验室备有不同电压、功率的双稳和三稳核酸电泳仪，以及不同规格的最新电泳槽，可对DNA和RNA分子量进行分析，结合凝胶成像系统进行分析，还可判断核酸的相对含量。（5） 常规PCR、Real-time PCR分析实验室备有多台普通型PCR、梯度PCR以及实时定量PCR仪，可方便地进行基因扩增，并提供高通量的PCR检测分析。（6） 蛋白电泳分析实验室备有美国BIO-RAD公司生产的不同型号和规格的电泳仪和电泳槽，可提供判断各种蛋白分子量大小分析服务，确定目的物及其它杂蛋白的含量。（7） 蛋白质纯度分析实验室备有日本岛津公司生产的LC-2010型高效液相色谱仪，可提供蛋白质等样品的纯度分析服务。 四、主要仪器设备清单 设备名称规格型号生产单位荧光定量PCR仪MJ Research OPTION2美国MJ Research公司小容量低温离心机Eppendorf5417R德国Eppendorf公司凝胶成像系统Gel Doc EQ System,Pc White Light Transitluminator (slinversion)for Gel Doc 200 白光屏(含操作软件)美国BIO-RAD公司蛋白电泳仪Power Pac Universal美国BIO-RAD公司蛋白电泳槽MP3多功能微型垂直板电泳槽(带转膜)美国BIO-RAD公司蛋白电泳槽BIO-RAD垂直电泳槽Sequi-Gen GT System (38*30cm)美国BIO-RAD公司超纯水系统赛多利斯611DI德国赛多利斯公司基因导入仪（电转化仪）Gene Pulser Xcell美国BIO-RAD公司基因枪Bio-radPDS1000/HE系统美国BIO-RAD公司超声波细胞破碎仪美国COLE-PARNER公司细菌鉴定系统半自动ATB法国梅里埃公司蛋白纯化系统AKTA prime美国AMERSHAM Biosciences普通PCR仪MYCYCLER带梯度美国BIO-RAD公司低温浓缩离心干燥机（冻干机）CHRIST ALPHA1-4德国CHRIST公司CO2培养箱MCO-15AC日本三洋连续进料玻璃反应釜Normak-NSCR德国Normak公司气谱岛津GC-14CPTF日本岛津湿性砂磨机DYNO-MILL-LAB瑞士粘度测定仪BROOKFILD DV-II+PRO美国博力飞激光粒度分布仪MASTERSIZERS2000英国生物安全柜Forma A/B3 、6Ft台式美国热电超净工作台江苏SW-CJ-2F 苏州净化设备公司中型台式高速冷冻离心机Eppendorf5810R德国Eppendorf公司连续紫外分光光度计756PC上海光谱仪器厂水份测定仪DL38 51107551梅特勒-托利仪器（上海）有限公司万能显微镜B241-32J02奥林帕斯五、附件生物工程实验室病原微生物检测单检验类别：报告编号：送样单位联系电话通讯地址临床发病情况：病理剖检情况：免疫情况：送检样品备注样品数量检测项目及依据标准：要求诊断结果时间双方确认以上事项，按以上标准（方法）进行相应项目的检测。收样人（签字）送样人（签字） 检测结果： 年 月 日备注生物工程实验室cDNA文库订购单公司收单编号： 收单日期-l 客户信息 报告编号：l 样品信息样品名称样品种类（请选择）Total RNA mRNA 细胞 组织 样品描述组织来源RNA质量要求实际浓度：g/l 浓度要求1ug/ul实际纯度： 纯度要求A260/A280>1.8RNA总量Total RNA _ul _ugmRNA _ul _ug请多预备 l, 供预实验使用请确保样品-70保存客户要求载体类型 质粒 噬菌体 产物形式连接液 cDNA文库 转化质粒 cDNA平均长度1kb交货内容Eppendorf管（-70保存）A4纸的实验报告电泳图谱 其他要求（请注明）备注注：l 若提供total RNA，需经mRNA抽提后才能建库，相应费用会有所提高。如直接提供新鲜组织，则计为RNA抽提和建库两项服务。l 若提供total RNA, 请附电泳图谱照片。客户签名： 日期： / / 生物工程实验室研发服务项目申请单 报告编号：客户姓名单位 （单位公章）职称、职务固定电话手 机电子邮箱通讯地址邮 编研发项目 项目类别自然科学基金 863 国家科技攻关计划 地方政府基金 企业创新基金 其它 自拟项目目的意义项目主要内容使用主要仪器名称大致时间实验费用金额（元）拟以何种方式付费： 现金、支票、转帐预 交 费拟完成实验时间实验人员填 表 日 期生物工程实验室分析测试申请单报告编号: 年 月 日申 请 单 位样 品 名 称批 号数量样品状态描述熔 点沸点 样 品 性 质（）有腐蚀 易燃 易挥发有 毒 易爆 易吸潮 无溶剂（）甲醇 乙醇 乙醚 丙酮 氯仿DMSO 水 吡啶 其它 样 品 保 存（）室温 干燥器 避光4 -20 -80用户提供有关资料检 测 项 目检测标准及其它技术要求试样提示（性质、成分、分子量、分子式及可能结构式，蛋白样品还应提供等电点、一级结构等）报 告 发 送 自取 邮寄 传真检测费 元备 注委 托 单 位检 测 单 位地址：电话：传真：邮政编码：电子邮件：地址：电话： 传真：邮政编码：网址：电子邮件：帐 户： 开户行：帐 号：经 手 人经 手 人收报告人发报告人说明：本单经手人签字生效，一式两份，检测单位和申请单位各执一份。申请单位凭本委托书取检测报告。本表填写应完整、清晰，不需申明的项目请填写“无”。申请人未经检测方同意，不得将检测结果用于商业广告等用途，违者检测方将依法追诉。若因申请人之不当使用检测报告致检测方名誉受损，检测方将依法要求损害赔偿。