生物工程11《免疫学实验》原理考核复习思考题.doc

免 疫 学 实 验 原 理 考 核 复 习 题1、 叙述抗血清的制备、鉴定、纯化和保存的基本原理与步骤制备：用具有抗原性的物质注入健康动物机体后，将引起免疫应答，并会形成浆细胞，分泌抗体。抗体主要存在于血清中，经一定次数注射，使血清中的抗体组达到要求浓度，然后采集动物血液，再从血液中分离出血清，从而获得抗血清。鉴定：抗体特异性的鉴定：双向免疫扩散法抗体效价的鉴定：凝集试验 、双向免疫扩散试验、ELISA 抗体纯度的鉴定：SDS-PAGE 、双向免疫扩散试验、免疫电泳 抗体亲合力的鉴定：平衡透析法、ELISA、RIA竞争结合试验 纯化：盐析法：硫酸铵盐析法、硫酸钠盐析法 凝胶过滤法：常结合盐析法 离子交换层析法：DEAE纤维素、QAE-sephadex、QAE纤维素 亲和层析法：纯化抗原或SPA交联Sepharose 4B制成亲和层析柱 保存：28保存：短期保存冰冻保存：保存5年真空干燥保存：保存510年2、 叙述淋巴细胞分离的基本原理与方法原理：外周血中单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞，其体积、形态和密度与其他细胞不同，红细胞和多核白细胞密度较大，在1.090左右，而淋巴细胞和单核细胞密度为1.0751.090，血小板为1.0301.035.为此利用一种密度介于1.0751.092之间而近似于等渗的溶液做密度梯度离心、。3、 叙述固相酶联免疫吸附检测人血清中乙肝表面抗体的原理，请另外设计一个方案，来检测乙肝抗体原理：使抗原吸附于载体上，然后加入被测血清，如有抗体，则与抗原在载体上形成复合物。洗涤后加酶标记的抗球蛋白（抗抗体）与之反应。洗涤后加底物显色，有色产物的量与抗体的量成正比。胶体金免疫层析法：基本原理是将已知的特异性抗原或抗体固定于硝酸纤维素膜上某一区带作为检测带，在样品区滴加样品后，借助毛细作用，样品泳动至玻璃纤维膜，金标复合物溶解，并与样品进行抗原抗体反应，形成复合物，继续泳动至硝酸纤维素膜的检测区，带有金标记的复合物被检测区抗原或抗体捕获，呈现红色条带。如样品中没有待测抗原或抗体，则不发生结合，即不显色。4、 兔耳静脉注射的要点。耳缘静脉注射要点： 充分暴露耳背外缘耳缘静脉。 左食指、中指轻夹耳根部使静脉充盈。 注射点的选择。 从远心端以30角度进针刺入静脉后顺血管平行方向深入1cm。 左手拇指、食指在刺入部位将针头与兔耳固定。 注意注入速度和密切观察家兔的反应。 注射完后注意止血。5、 耳静脉注射时，如何判断是否已经成功注射到静脉？若注射阻力较大或出现局部肿胀，说明针头没有刺入静脉，应立即拔出针头，若推注不大阻力，可将药物徐徐注入，注射完毕后将针头抽出，随即以棉球压迫止血。6、 兔子皮下、肌肉注射的要点。皮下：提起脊背间的皮肤，将针头顺着皮褶刺入11.5厘米深（皮下注射采用平行针进针，即平行于地面刺入）一定要保定好你的爱兔，以防兔兔在打针时挣扎，针头误刺伤骨头及内脏；肌肉：将针头延30度角刺入大腿肌肉11.5厘米深7、 请设计一个方案，检测兔子注射鸡瘟病毒后，是否产生抗体？抗体的效价如何判别？取兔子的血液制成血清。用酶联免疫吸附法。将鸡瘟病毒吸附在固相载体上，通过洗涤去除不牢固抗原，洗涤后加入血清，然后形成的酶标二抗的复合物与该酶底物反应生成有色产物、借助分光光度计的光吸收计算待测抗体的量。8、 请设计一个方案，检测兔子注射鸡白痢沙门氏菌后，是否产生抗体？抗体的效价如何判别？9、 请叙述鸡白痢灭活疫苗制备的基本步骤凝集抗原的制备：用接种环刮下菌苔，用0.4%甲醛灭菌盐水冲洗，并吸入离心管以2500rpm离心10min后，弃上清液，将下沉菌体用0.4%甲醛灭菌盐水悬浮，然后用标准比浊管标定浓度，配制成130亿的灭活菌液，置37温箱24h，并加入结晶紫用于诊断抗原。10、 请叙述沙门氏菌诊断制剂制备的基本步骤将沙门氏菌的种子液放在琼脂板上培养，37C 23d ，加入生理盐水洗下培养物，过滤，离心，将下沉的的菌体悬浮于生理盐水中，置于冰箱210C保存考试题目：随机抽取5题考试，每题20分，总分100分。考试时间：下周四（5月23日）12：30-13：30考试地点：3126考试要求：请每一位同学自己带纸（随便什么纸张），准时参加考试特别提醒：不要参照一个标准答案去记忆，动物细胞培养原理考核中发现，许多同学的答案相似且错误很多，请大家一定要有自己的思路、方法。