新人教版高中生物选修一《实验DNA的粗提取与鉴定》 .doc

新人教版高中生物选修一实验DNA的粗提取与鉴定实验原理:一.DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为0.14 mol/L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。二.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。三.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。目的要求:初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法，观察提取出来的DNA物质。材料用具:鸡血细胞液（5 10 mL）。铁架台，铁环，镊子，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量筒（100 mL，1个），烧杯（100 mL，1个，50 mL、1 000 mL各2个），试管（20 mL，2个），漏斗，试管夹，纱布。体积分数为95%的酒精溶液（实验前置于冰箱内冷却24 h），蒸馏水，质量浓度为0.1 g/mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2 mol/L和0.015 mol/L的氯化钠溶液，二苯胺试剂。方法步骤实验前需要制备鸡血细胞液（由教师完成），制备的方法是：取质量浓度为0.1 g/mL的柠檬酸钠溶液（抗凝剂）100 mL，置于500 mL烧杯中。将宰杀活鸡流出的鸡血（约180 mL）注入烧杯中，同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免凝血。然后，将血液倒入离心管内，用1 000 r/min（转每分）的离心机离心2 min，此时血细胞沉淀于离心管底部。实验时，用吸管除去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。（如果没有离心机，可以将烧杯中的血液置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀。）1.提取鸡血细胞的细胞核物质将制备好的鸡血细胞液5 10 mL，注入到50 mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20 mL，同时用玻璃棒沿一个方向快速搅拌5 min，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至1 000 mL的烧杯中，取其滤液。 2.溶解细胞核内的DNA将物质的量浓度为2 mol/L的氯化钠溶液40 mL加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌 1min，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。3.析出含DNA的黏稠物沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的黏稠物会越来越多。当黏稠物不再增加时停止加入蒸馏水。（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 mol/L。）4.滤取含DNA的黏稠物用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至1 000 mL的烧杯中，含DNA的黏稠物被留在纱布上。5.将DNA的黏稠物再溶解取一个50 mL烧杯，向烧杯内注入物质的量浓度为2 mol/L的氯化钠溶液20 mL。用钝头镊子将纱布上的黏稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃棒沿一个方向不停地搅拌3 min，使黏稠物尽可能多地溶解于溶液中。6.过滤含有DNA的氯化钠溶液取一个100 mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液中。7.提取含杂质较少的DNA在上述滤过的溶液中，加入冷却的、体积分数为95%的酒精溶液50 mL（使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳），并用玻璃棒沿一个方向搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNA。注意观察丝状物是什么颜色的。8. DNA的鉴定取两支20 mL的试管，各加入物质的量浓度为0.015 mol/L的氯化钠溶液5 mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4 mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。结论：将观察到的现象和得出的结论填写在实验报告册上。