食品中农药及兽药残留的测定课件.ppt

食品中农药及兽药残留的测定,第四章,食品中农药及兽药残留的测定,第一节 食品中农药残留的测定第二节 食品中兽药的测定,食品中农药及兽药残留的测定,第一节 食品中农药残留的测定 一、食品中有机氯农药残留量的测定（一）气相色谱法 1、原理 样品中六六六、滴滴涕经提取、净化后用气相色谱法测定，与标准比较定量。电子捕获检测器对于电负性强的化合物具有较高的灵敏度，利用这一特点，可分别测出微量的六六六和滴滴涕。在适合的色谱条件下，不同异构体和代谢物可同时分别测定。,食品中农药及兽药残留的测定,2、试剂 使用的试剂一般系分析纯，有机溶剂需经重蒸馏。丙酮、正己烷石油醚（沸程3060）、苯、硫酸、无水硫酸钠、硫酸钠溶液（20g/L）。六六六、滴滴涕标准使用液 将上述标准储备液以己烷稀释至适宜浓度，一般为0.01g/mL。3、仪器 小型粉碎机、小型绞肉机、组织捣碎机、电动振荡器、旋转浓缩蒸发器、吹氮浓缩器、气相色谱仪：具有电子捕获检测器（ECD）。,食品中农药及兽药残留的测定,4、测定步骤（1）提取 称取具有代表性的样品（适用于生的及烹调加工过的蔬菜、水果或谷类、豆类、肉类、蛋类）约200g，加适量水，于捣碎机中捣碎，混匀。称取匀浆2.005.00g，于50mL具塞三角瓶中，加1015mL丙酮，在振荡器上振荡30min，过滤于100mL分液漏斗中，残渣用丙酮洗涤四次，每次4mL，用少许丙酮洗涤漏斗和滤纸，合并滤液3040mL，加石油醚20mL，摇动数次，放气。振摇lmin，加20mL硫酸钠溶液（20g/L），振摇1min，静置分层，弃去下层水溶液。用滤纸擦干分液漏斗颈内外的水，然后将石油醚液缓缓放出，经盛有约10g无水硫酸钠的漏斗，滤入50mL三角瓶中。再以少量石油醚分三次洗涤原分液漏斗、滤纸和漏斗，洗液并入滤液中，将石油醚浓缩，移入10mL具塞试管中，定容至5.0mL或10.0mL。,食品中农药及兽药残留的测定,称取具有代表性的乳样品2.00g，于10mL具塞试管中，加4mL丙酮，振摇lmin，加4mL石油醚，振摇lmin。静置分层。将上层石油醚溶液移入另一25mL具塞试管中，再加lmL石油醚于原试管中，不摇。取出上层石油醚合并于25mL试管中，重复两次。再加与石油醚等体积的硫酸钠溶液（20g/L），摇混，分层。将上层石油醚溶液取出经无水硫酸钠滤入10mL具塞试管中，再加lmL石油醚于原25mL试管中，不摇。取出上层液合并于10mL试管中，重复两次。提取液定容至4.0mL。称取具有代表性的均匀食用油样品0.50g以石油醚溶解于10mL试管中，定容至10.0mL。,食品中农药及兽药残留的测定,（2）净化 5.0mL提取液加0.50mL浓硫酸，盖上试管塞。振摇数次后，打开塞子放气，然后振摇0.5min，于1600r/min，离心15min，上层清液，供气相色谱法分析用。（3）测定.气相色谱参考条件 色谱柱 内径34mm，长1.22m的玻璃柱，内装涂以OV-17（15g/L）和QF-1（20g/L）的混合固定液的80100目硅藻土。Ni-电子捕获检测器 汽化室温度：215；色谱柱温度：195；检测器温度：225；载气（氮气）流速：90mL/min；纸速：0.5cm/min。,食品中农药及兽药残留的测定,测量与计算 电子捕获检测器的线性范围窄，为了便于定量，选择样品进样量使之适合各组分的线性范围。根据样品中六六六、滴滴涕存在形式，相应的制备各组分的标准曲线，从而计算出样品中的含量。六六六、滴滴涕及异构体或代谢物含量按下式计算。式中 X样品中六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，mg/kg；Al被测定用样液中六六六或滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，ng；V1样品净化液体积，mL；V2样液进样体积，L；m1样品质量，g。结果的表述：报告平行测定的算术平均值的二位有效数。允许差：相对误差15。,食品中农药及兽药残留的测定,（二）薄层色谱法 1原理 样品中六六六、滴滴涕经有机溶剂提取，并经硫酸处理，除去干扰物质，浓缩，点样展开后，用硝酸银显色，经紫外线照射生成棕黑色斑点，与标准比较，可概略定量。2分析步骤（1）提取、净化 同气相色谱法。（2）薄层板的制备 称取氧化铝G4.5g，加lmL硝酸银溶液（10g/L）及6mL水，研磨至糊状，立即涂在三块5cm20cm的薄层板上，涂层厚度0.25mm，于100烘0.5h，置于干燥器中，避光保存。,食品中农药及兽药残留的测定,（3）点样 离薄层板底端2cm处，用针划一标记。在薄层板上点110L样液和六六六、滴滴涕标准溶液，一块板可点34个。中间点标准溶液，两边点样品溶液。也可用滤纸移样法点样。（4）展开 在展开槽中预先倒入10mL丙酮-己烷（1+99）或丙酮-石油醚（1+99）。将经过点样的薄层板放入槽内。当溶剂前沿距离原点1012cm时取出，自然挥干。（5）显色 将展开后的薄层板喷以10mL硝酸银显色液，干燥后距紫外灯8cm处照1020min，六六六、滴滴涕等全部显现棕黑色斑点。,食品中农药及兽药残留的测定,3计算 式中 X样品中六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，mg/kg；A被测定用样液中六六六或滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，g；V1样品浓缩液总体积，mL；V2点板样液体积，L；m样品质量，g。结果的表述：报告平行测定的算术平均值的二位有效数。允许差：相对误差15。,食品中农药及兽药残留的测定,二、食品中有机磷农药残留量的测定有机磷农药种类很多，按照其结构可分为磷酸酯和硫化磷酸酯两大类，常见的有机磷农药有：内吸磷（又名1059）、对硫磷（又名1605）、甲拌磷（又名3911）、敌敌畏（DDVP）、敌百虫、乐果、马拉硫磷（又名4049）、倍硫磷、杀螟硫磷（又名杀螟松）、稻瘟净（又名EBP）等，此外还有毒性很高的甲基对硫磷、乙基对硫磷（E-1605）、甲胺磷等。有机磷农药残留的测定常采用气相色谱法、薄层色谱-酶抑制法等。,食品中农药及兽药残留的测定,（一）水果、蔬菜、谷类中有机磷农药的多残留测定方法 1.原理 含有机磷的样品在富氢焰上燃烧，以HPO碎片的形式，放射出波长526nm的特性光；这种光通过滤光片选择后，由光电倍增管接收，转换成电信号，经微电流放大器放大后被记录下来。样品的峰面积或峰高与标准品的峰面积或峰高进行比较定量。2.试剂丙酮、二氯甲烷、氯化钠、无水硫酸钠、助滤剂Celite545、含磷农药标准品。含磷农药标准溶液的配制 分别准确称取标准品，用二氯甲烷为溶剂，分别配制成1.0mg/mL的标准储备液，储于冰箱（4）中，使用时用二氯甲烷稀释配成单一品种的标准使用液（1.0g/mL）。再根据各农药品种的食品相应值或最小检测限，吸取不同量的标准储备液，用二氯甲烷稀释成混合标准使用液。,食品中农药及兽药残留的测定,3.仪器组织捣碎机、粉碎机、旋转蒸发仪、气相色谱仪：附有火焰光度检测器（FPD）4.试样的制备 取粮食样品经粉碎机粉碎，过20目筛制成粮食试样；取水果、蔬菜样品洗净，晾干，去掉非可食部分后制成待分析试样。5.测定步骤（1）提取 水果、蔬菜 称取50.00g试样，置于300mL烧杯中，加入50mL水和100mL丙酮（提取液总体积为150mL），用组织捣碎机提取12min。匀浆液经铺有二层滤纸和约10gCelite545的布氏漏斗减压抽滤。从滤液中分取100mL移至500mL分液漏斗中。,食品中农药及兽药残留的测定,谷物 称取25.00g试样，以下步骤同自“置于300mL烧杯中，加入50mL水和100mL丙酮”起，依法操作。（2）净化 向提取的滤液中加入1015g氯化钠使溶液处于饱和状态。猛烈振摇23min，静置10min，使丙酮从水相中盐析出来，水相用50mL二氯甲烷振摇2min，再静置分层。将丙酮与二氯甲烷提取液合并，经装有2030g无水硫酸钠的玻璃漏斗脱水滤入250mL圆底烧瓶中，再以约40mL二氯甲烷分数次洗涤容器和无水硫酸钠。洗涤液也并入烧瓶中，用旋转蒸发器浓缩至约2mL，浓缩液定量转移至525mL容量瓶中，加二氯甲烷定容至刻度。,食品中农药及兽药残留的测定,（3）气相色谱测定 色谱参考条件 色谱柱 玻璃柱 2.6m3mm（i.d），填装涂有4.5（m/m）DC-200+2.5（m/m）OV-17的ChromosorbWAWDMCS（80100目）的担体。玻璃柱 2.6m3mm（i.d），填装涂有1.5（m/m）DCOE-1的ChromosorbWAWDMCS（6080目）。气体速度 氮气（N2）50mL/min、氢气（H2）100mL/min、空气50mL/min。温度 柱箱240、汽化室260、检测器270。（4）测定 吸取25L混合标准液及样品净化液注入色谱仪中，以保留时间定性。以试样的峰高或峰面积与标准比较定量。,食品中农药及兽药残留的测定,6.计算 式中 Xii组分有机磷农药的含量，mg/kg；Ai试样中i组分的峰面积，积分单位；Asi混合标准液中i组分的峰面积，积分单位；V1试样提取液的总体积，mL；V2净化用提取液的总体积，mL；V3浓缩后的定容体积，mL；V4进样体积，mL；Esi注入色谱仪中的i标准组分的质量，ng；m样品的质量，g。结果的表述：报告算术平均值的二位有效数。相对误差15。,食品中农药及兽药残留的测定,（二）食品中辛硫磷农药残留量测定方法 1.原理 含有机磷的样品在富氢焰上燃烧，以氢磷氧（HPO）碎片的形式，放射出波长526nm的特征光，这种特征光通过滤光片选择后，由光电倍增管接收，转换成电信号，经微电流放大器放大后，分别记录标准和样品的峰高，以外标法定量样品的含量。2.试剂丙酮、石油醚、无水硫酸钠、活性炭（用3mol/L盐酸浸泡过夜，抽滤，用水洗至中性，在120下烘干备用）。,食品中农药及兽药残留的测定,辛硫磷标准品 辛硫磷（phoxim）99。标准溶液的配制 准确称取辛硫磷标准品，用丙酮溶解，配成lmg/mL标准储备液，使用时用丙酮稀释成lg/mL的标准使用液，储藏于冰箱中。3.仪器气相色谱仪（带火焰光度检测器）、电动振荡器、K-D浓缩器、索氏提取器、具塞锥形瓶（250mL）、分液漏斗（250mL）。4.试样的制备 取谷物实验样品，经粉碎机粉碎，过20目筛后，制成谷物试样。取蔬菜和水果实验样品洗净、晾干，去掉非食部分后，剁碎或经组织捣碎机捣碎，制成蔬菜或水果试样。,食品中农药及兽药残留的测定,5.测定步骤（1）提取和净化 谷物 称取谷物试样20g，精确至0.001g，置于具塞锥形瓶中，加入50mL石油醚，避光浸提5h，抽滤，残渣用100mL石油醚分三次洗涤，合并滤液过无水硫酸钠，于K-D浓缩器上浓缩，定容至5mL，待气相色谱分析。蔬菜 称取蔬菜试样50g，精确至0.001g，置于具塞锥形瓶中，用石油醚-丙酮（1:1）（V/V）溶液100mL避光浸提12h，后加13g（根据蔬菜色素含量）活性炭振荡0.5h，静置5min，抽滤，滤渣用50mL丙酮洗涤，向滤液中加入100mL 2硫酸钠水溶液，用150mL石油醚分三次萃取，合并萃取液，浓缩并定容至10mL，待气相色谱分析。,食品中农药及兽药残留的测定,水果 称取水果试样25g，加入1.5g活性炭拌匀，用滤纸将试样包好，置于索氏抽提器中，加入120mL石油醚-丙酮（1:1）（V/V），避光浸泡一夜后，在60下回流4h，每小时45次，提取液转移到分液漏斗中，加入30mL 2硫酸钠水溶液，振摇，分出石油醚层，水层用30mL石油醚萃取二次，合并石油醚，通过无水硫酸钠，浓缩石油醚层，定容至5mL，待气相色谱分析。（2）气相色谱分析 气相色谱条件 a.色谱柱 玻璃柱，内径3mm，长lm，内装5OV-101/Chro-mosorbWAWDMCS 80100目。b.气流速度 载气（N2）80mL/min，空气60mL/min，氢气60mL/min。c.温度 柱温175，进样口185；，检测器200。,食品中农药及兽药残留的测定,测定 a.定性 以辛硫磷标准品的保留时间定性。b.定量 用外标法定量，以辛硫磷标准品作外标物，按峰高计算。6.结果计算式中 X样品中辛硫磷含量，mg/kg；Es注入的标样中辛硫磷的含量，ng；V1样品进样体积，L；V2最后定容体积，mL；h1标准样品的峰高，mm；h2样品的峰高，mm；m样品质量，g。,食品中农药及兽药残留的测定,（三）柑橘中水胺硫磷残留量测定方法 1.原理 柑橘样品经硅藻土545、丙酮和活性炭捣碎提取，过滤，滤液用二氯甲烷萃取，浓缩，进带火焰光度检测器和526nm滤光片的气相色谱仪测定。利用含有机磷的样品在富氢焰上燃烧，以HPO碎片的形式，放射出波长526nm的特征光，这种特征光通过滤光片选择后，由光电倍增管接收，转换成电信号，经微电流放大品放大后，被记录下来，样品的峰高与标准品的峰高相比，计算出样品相当的含量。本方法最小检出限为1.410-12g。,食品中农药及兽药残留的测定,2.试剂 丙酮、二氯甲烷、无水硫酸钠、助滤剂Celite 545、氯化钠，以上试剂均为分析纯。酸洗活性炭 300g活性炭粉末，用1000mLlmol/L盐酸煮沸4h后，用水洗至洗涤水中无氯离子，烘干备用。弗罗里硅土 60100目，在650 下烘3h后，加5水混匀，储于干燥器中，用前在130下烘2h。水胺硫磷标准品 纯度为99。3.仪器 气相色谱仪：附火焰光度检测器（FPD）和526nm滤光片、组织捣碎机、旋转蒸发仪、K-D浓缩器、真空泵（30L/min）、250mL分液漏斗、内径0.5cm的微型层析柱。,食品中农药及兽药残留的测定,4.实验步骤（1）样品提取 取有代表性的柑橘样品切碎后充分混匀，称取50.0g于组织捣碎机中，加5gCelite 545和100mL丙酮。捣碎30s后，转移至布氏漏斗抽滤，然后用丙酮洗涤残渣和滤器二次，每次20mL，合并滤液和洗滤液。（2）液-液分配萃取 取上述滤液1/2于250mL分液漏斗中，加氯化钠5g，充分振摇使其溶解，然后用30mL、15mL二氯甲烷分别振荡萃取，静置分层后，收集有机相，合并两次有机相萃取液于100mL具塞锥形瓶中，加10g无水硫酸钠振荡脱水，然后再经8mm120mm无水硫酸钠层析柱进一步脱水，最后用旋转蒸发仪在60水浴浓缩至2mL待净化用。,食品中农药及兽药残留的测定,（3）净化 用8mm120mm的层析柱，由下至上紧密均匀地填装玻璃棉少许，lcm无水硫酸钠，3.5cm弗罗里硅土，2.5cm酸洗活性炭，lcm无水硫酸钠。用少量二氯甲烷预淋层析柱后，将2mL样品浓缩液倒入柱内，待液面进入无水硫酸钠层，用二氯甲烷少量多次洗涤浓缩瓶，并倒入层析柱内，收集10mL洗脱液，用K-D浓缩器浓缩至25mL，供气相色谱测定用。（4）气相色谱测定 色谱条件 a.色谱柱 柱1）3mm（内径）1100mm玻璃柱，装填键合固定相-D（固定相DEGS键合于410担体6080目）。柱2）3mm（内径）1600mm玻璃柱，装填1.5OV-17+1.98QF-1涂渍于ChromosorbW（AW-DMCS）80100目。,食品中农药及兽药残留的测定,b.气体速度 柱1）载气（氮气）85mL/min；氢气60mL/min；空气60mL/min。柱2）载气（氮气）60mL/min；氢气60mL/min；空气60mL/min。c.温度 柱1）汽化室与检测器275；柱温225。柱2）汽化室与检测器280；柱温230。测定 采用外标法定性定量。,食品中农药及兽药残留的测定,5.计算 式中 X样品中水胺硫磷含量，mg/kg；A进样体积中水胺硫磷含量，ng；m进样体积（L）相当于样品的质量，g。注：计算时注意净化样品过程只吸取抽滤液的1/2。允许差 取样量在50g，二次平行允许差为10。,食品中农药及兽药残留的测定,三、食品中氨基甲酸酯类农药残留量的测定（一）食品中氨基甲酸酯类农药残留量的测定方法 1.原理 含氮有机化合物被色谱柱分离后在加热的碱金属片的表面产生热分解，形成氰自由基（CN-），并且从被加热的碱金属表面放出的原子状态的碱金属（Rb）接受电子变成CN-，再与氢原子结合。放出电子的碱金属变成正离子，由收集极收集，并作为信号电流而被测定。电流信号的大小与含氮化合物的含量成正比。以峰面积或峰高比较定量。,食品中农药及兽药残留的测定,2.试剂无水硫酸钠 于450焙烧4h后备用丙酮 重蒸无水甲醇 重蒸二氯甲烷 重蒸石油醚 沸程3060，重蒸速灭威（tsumacide）99叶蝉散（MIPC）99残杀威（propoxur）99呋喃丹（carbofuran）99抗蚜威（pirimicarb）99西维因（carbaryl）99,食品中农药及兽药残留的测定,5氯化钠溶液 称取25g氯化钠，用水溶解并稀释至500mL甲醇-氯化钠溶液 取无水甲醇及5氯化钠溶液等体积混合。氨基甲酸酯杀虫剂标准溶液的配制 分别准确称取速灭威、叶蝉散、残杀威、呋喃丹、抗蚜威及西维因各种标准品，用丙酮分别配制成lmg/mL的标准储备液。使用时用丙酮稀释配制成单一品种的标准使用液（5g/mL）和混合标准工作液（每个品种浓度为210g/mL）。,食品中农药及兽药残留的测定,3.仪器气相色谱仪：附有火焰热离子检测器（FTD）、电动振荡器、组织捣碎机、粮食粉碎机（带20目筛）、恒温水浴锅、减压浓缩装置、分液漏斗（250 mL，500mL）、量筒（50 mL，100mL）、具塞三角烧瓶（250mL）、抽滤瓶（250mL）、布氏漏斗（10cm）。4.试样的制备 取粮食实验样品经粮食粉碎机粉碎，过20目筛制成粮食试样。取蔬菜实验样品洗净、晾干，去掉非食部分后剁碎或经组织捣碎机捣碎制成蔬菜试样。,食品中农药及兽药残留的测定,5.分析步骤（1）提取 粮食样品 称取约40g粮食试样，精确至0.001g，置于250mL具塞锥形瓶中，加入2040g无水硫酸钠（视试样的水分而定）、100mL无水甲醇。塞紧，摇匀，于电动振荡器上振荡30min。然后经快速滤纸过滤于量筒中，收集50mL滤液，转入250mL分液漏斗中，用50mL 5氯化钠溶液洗涤量筒，并入分液漏斗中。蔬菜样品 称取20g蔬菜试样，精确至0.001g，置于250mL具塞锥形瓶中，加入80mL无水甲醇，塞紧，于电动振荡器上振荡30min。然后经铺有快速滤纸的布氏漏斗抽滤于250mL抽滤瓶中，用50mL无水甲醇分次洗涤提取瓶及滤器。将滤液转入500mL分液漏斗中，用100mL 5氯化钠水溶液分次洗涤滤器，并入分液漏斗中。,食品中农药及兽药残留的测定,（2）净化 粮食样品 于盛有样品提取液的250mL分液漏斗中加入50mL石油醚，振荡lmin，静置分层后将下层（甲醇氯化钠溶液）放入第二个250mL分液漏斗中，加25mL甲醇-氯化钠溶液于石油醚层中，振摇30s，静置分层后，将下层并入甲醇-氯化钠溶液中。蔬菜样品 于盛有样品提取液的500mL分液漏斗中加入50mL石油醚，振摇lmin，静置分层后将下层放入第二个500mL分液漏斗中，并加入50mL石油醚，振摇lmin，静置分层后将下层放入第三个500mL分液漏斗中。然后用25mL甲醇-氯化钠溶液依次反洗第一、二分液漏斗中的石油醚层，每次振摇30s，最后把甲醇-氯化钠溶液并入第三分液漏斗中。,食品中农药及兽药残留的测定,（3）浓缩 于盛有样品净化液的分液漏斗中，用二氯甲烷（50 mL，25 mL，25mL）依次提取三次，每次振摇lmin，静置分层后将二氯甲烷层经铺有无水硫酸钠（玻璃棉支撑）的三角漏斗（用二氯甲烷预洗过）过滤于250mL蒸馏瓶中，用少量二氯甲烷洗涤漏斗，并入蒸馏瓶中。将蒸馏瓶接上减压浓缩装置，于50水浴上减压浓缩至lmL左右，取下蒸馏瓶，将残余物转入10mL刻度离心管中，用二氯甲烷反复洗涤蒸馏瓶并入离心管中。然后吹氮气除尽二氯甲烷溶剂，用丙酮溶解残渣并定容至2.0mL，供气相色谱分析用。,食品中农药及兽药残留的测定,（4）气相色谱条件 色谱柱 色谱柱1）玻璃柱，3.2mm（内径）2.1m，内装涂有2OV-101+6OV-210混合固定液的ChromosorbW（HP）80-100目担体。色谱柱2）玻璃柱，3.2mm（内径）1.5m，内装涂有1.5OV-17+1.95OV-210混合固定液的ChromosorbW（AW-DMCS）80100目担体。气体条件 氮气65mL/min；空气150mL/min；氢气3.2mL/min。温度条件 柱温190；进样口或检测室温度240。（5）测定 取5.3步骤中的试样液及标准样液各1L进样，做色谱分析。根据组分在两根色谱柱上的出峰时间与标准组分比较定性；用外标法与标准组分比较定量。,食品中农药及兽药残留的测定,6.计算 式中 Xi试样中组分i的含量，mg/kg；Ei标准试样中组分i的含量，ng；Ai试样中组分i的峰面积或峰高，积分单位；AE标准试样中组分i的峰面积或峰高，积分单位；m试样质量（粮食试样g，蔬菜试样20g），g；2000样液的定容体积（2.0mL）；1000换算单位。,食品中农药及兽药残留的测定,（二）粮、油、菜中西维因残留量的高效液相色谱法1.原理 含有西维因的粮食经提取、弗罗里硅土净化后，浓缩，定容作为测定溶液，取一定量注入高效液相色谱仪，经分离用紫外280nm检测器检测，与标准系列比较定量。2.试剂 苯、乙腈、甲醇、二氯甲烷、无水硫酸钠（120干燥4h）。弗罗里硅土 120干燥4h，加入6（m/m）蒸馏水，摇匀，放置过夜后使用。西维因标准溶液的配制 准确称取西维因标准品（99.3），用甲醇溶解并配制成10.0mg/mL的标准储备液，储于冰箱中，使用时用甲醇稀释成10g/mL的标准使用液。,食品中农药及兽药残留的测定,3.仪器高效液相色谱仪（带紫外检测器）、溶剂过滤器、超声波仪（用于流动相脱气）、KD浓缩器或旋转式蒸发器。4.分析步骤（1）提取 称取20.00g经粉碎过20目筛的粮食试样于250mL具塞锥形瓶中，准确加入50mL苯，浸泡过夜，次日振荡提取1h，提取液过滤。（2）净化 取直径1.5cm层析柱，先装脱脂棉少许（柱两头装2cm高无水硫酸钠，中间装6g弗罗里硅土），装好的柱先用20mL二氯甲烷预淋，弃去预淋液，然后将510mL样品提取液倒入层析柱，用70mL二氯甲烷少量多次淋洗，收集全部淋洗液，用KD浓缩器进行浓缩至近干（水浴温度30），然后用甲醇溶解残余物，并定容至5mL。定容后用0.5m滤纸借助于注射器过滤，取10L滤液注入高效色谱进行分离、检测。,食品中农药及兽药残留的测定,（3）液相色谱测定参考条件 色谱柱 不锈钢柱BONAPAKCl8 3.9mm30cm。检测器 紫外检测器波长280m，灵敏度0.010.02。流动相 乙腈-水（55+45）混合溶剂，流速lmL/min。温度 柱温，检测器均为室温。（4）测定 吸取10L标准使用液及样品液注入色谱仪，以保留时间定性，用标准曲线法定量。5.计算 式中 X粮食中西维因的含量，mg/kg；Al从标准曲线求出样液中西维因的含量，g；V1样液定容的体积，mL；V2注入色谱的体积，mL；m1样品的质量，g。,食品中农药及兽药残留的测定,（三）花生仁、棉籽油、花生油中涕灭威残留量的气相色谱法 1.原理 含有涕灭威及氧化代谢物涕灭威亚砜、涕灭威砜的样品，在提取过程中加入强氧化剂使涕灭威、涕灭威亚砜氧化成在气相色谱仪火焰光度检测器上有较高响应的涕灭威砜进行测定。涕灭威残留总量以涕灭威砜的量表示。2.试剂 除特殊规定外，只应使用分析纯试剂和蒸馏水或同等纯度水。丙酮、二氯甲烷、无水硫酸钠、10碳酸氢钠溶液、过氧乙酸溶液。过氧化氢乙酸=21。涕灭威砜标准储备溶液 精密称取涕灭威砜标准品50.0mg，置于50mL容量瓶中，加少量二氯甲烷溶解，用二氯甲烷稀释到刻度。配成每毫升含涕灭威砜1.0mg的标准溶液。,食品中农药及兽药残留的测定,涕灭威砜标准使用溶液 吸取标准储备溶液5.0mL，用二氯甲烷定容至50mL，该中间溶液浓度为0.10mg/mL。依次吸取中间溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，以二氯甲烷分别定容至100mL，配成浓度为1.0、2.0、3.0、4.0、5.0g/mL标准系列。3.仪器 电动振荡器、旋转蒸发仪、净化柱（在内径1.3cm 8cm层析柱中依次装入1cm无水硫酸钠，4g弗罗里硅土，lcm无水硫酸钠）、气相色谱仪（具有火焰光度检测器）。,食品中农药及兽药残留的测定,4.操作方法（1）样品处理 水果 样品洗净、擦干，取可食部分捣碎、混匀。称取约25g试样，精确至0.001g。置于250mL具塞锥形瓶中，加入100mL丙酮-水（3:1），振荡0.5h。经滤纸过滤，用50mL丙酮-水分三次冲洗锥形瓶及残渣，合并滤液。在水浴45条件下减压浓缩至约l00mL。样液置于250mL分液漏斗中，加入5mL过氧乙酸溶液，振荡0.5h。缓慢加入50mL碳酸氢钠溶液，摇至无气泡产生。用50、25、25mL二氯甲烷萃取三次，合并二氯甲烷，经无水硫酸钠干燥，在水浴45条件下减压浓缩至1.0mL，待测定。,食品中农药及兽药残留的测定,花生仁、粮谷等 样品粉碎、混匀，按4.（1）“称取25g样品，经无水硫酸钠干燥。”操作。萃取液浓缩至约20mL。层析柱先用25mL甲苯-二氯甲烷（1:1）预洗 将上液转入柱中，弃去流出部分，依次用50mL（2:98）、l00mL（1:1）丙酮-乙醚淋洗，收集、合并两次淋洗液。在水浴45条件下减压浓缩至近干，取下用氮气吹干。加1.0mL二氯甲烷溶解残渣，待测定。（2）色谱条件 色谱柱 玻璃柱：长lm，内径3mm；固定相：15FFAP/Chromosorb W AW80100目。检测器 火焰光度检测器，S滤光片。温度 柱箱190；进样口230；检测器230。气流 氮气45mL/min；氢气80mL/min；空气l00mL/min。,食品中农药及兽药残留的测定,（3）测定 根据气相色谱仪灵敏度，取标准系列各浓度510L分别注入气相色谱仪。测得各浓度标准溶液的峰高，以进样体积下的标准物含量（ng）为横坐标，峰高（mm）为纵坐标绘制标准曲线。取样品溶液510L注入气相色谱仪。测得涕灭威砜的峰高（mm），从标准曲线中查出相应的含量（ng）。（4）计算 式中 X样品中涕灭威砜含量，mg/kg；m样品峰在标准曲线中查得的相应含量，ng；Vo样品液体积，mL；W称样量，g；V1进样体积，L；1000单位换算系数。5.精密度 本方法相对标准差小于13。,食品中农药及兽药残留的测定,四、食品中沙蚕毒素农药的测定主要介绍大米中杀虫双残留量测定方法 1.原理 大米样品经0.1mol/L盐酸提取后，在碱性溶液中，转化成沙蚕毒素，以三氯甲烷提取后，蒸除三氯甲烷，用甲醇定容至lmL，以FPD-GC测定。2.试剂0.1mol/L盐酸0.1mol/L氢氧化钠0.1mol/L硫化钠水溶液甲醇 分析纯，重蒸。三氯甲烷 分析纯，重蒸加无水乙醇，使含1乙醇。无水乙醇 分析纯。无水硫酸钠,食品中农药及兽药残留的测定,杀虫双标准溶液 精确称取杀虫双23.8mg，以甲醇溶解，稀释至100mL，每毫升中杀虫双含量相当于沙蚕毒素100g。根据需要，吸取一定量上述标准溶液，以甲醇稀释至一定体积，配制成应用液。杀虫双转化：相当于沙蚕毒素4g的杀虫双，按下述条件转化，最终浓度为每毫升含2g沙蚕毒素。（9）沙蚕毒素标准溶液 精确称取沙蚕毒素草酸盐16.00mg，以甲醇溶解，稀释至100mL，每毫升含沙蚕毒素100g，根据需要，吸取一定量上述标准溶液，以甲醇稀释至一定体积，配制成应用液。3.仪器台式离心机、旋转蒸发器、玻璃蒸馏器、氮气蒸发器、气相色谱仪（具火焰光度检测器，FPD）、微量注射器、一般玻璃仪器。,食品中农药及兽药残留的测定,4.测定步骤（1）样品处理 称取大米样品5g，加l0mL 0.1mol/L盐酸溶液，在振荡器上振荡30min，于1600r/min离心10min，将上清液倒于带盖量筒中，再以10mL 0.1mol/L盐酸洗涤样品，如此重复三次。合并盐酸提取液，调节pH8.59，加0.1mol/L硫化钠溶液2mL放置过夜，加2倍样品液体积的三氯甲烷于分液漏斗中，剧烈振摇1min，静置分层。将三氯甲烷层经无水硫酸钠滤于三角瓶中，在旋转蒸发器中45蒸除氯仿，至剩余少许时，立即取出，用甲醇定容至lmL，待测定。（2）气相色谱条件 色谱柱 3mm（内径）2m玻璃柱；填装涂有1.5OV-17ChromosorbW（80100目）的担体。,食品中农药及兽药残留的测定,温度 柱温 160；汽化室温 200；FPD检测器温 170。气体速度 载气（氮气）流速 70mL/min；氢气流速 150mL/min；空气流速 50mL/min。其它条件 仪器灵敏度 102；衰减 32；纸速 0.5cm/min。,食品中农药及兽药残留的测定,（3）测定 按上述色谱条件调试仪器，待仪器稳定后，用微量注射器注入样品或标准液，以保留时间为定性指标。取杀虫双转化后相当于0.5、1、2、3、4、5ng的沙蚕毒素，注入色谱仪中，测量峰高。以杀虫双含量为横坐标，峰高为纵坐标，在双对数坐标纸上绘制工作曲线，根据样品的峰高定量。5.计算 式中 X样品中杀虫双含量，mg/kg；B测得样品的峰高（或面积）值，查标准曲线后得到的沙蚕毒素量，ng；V定容体积，mL；A进样量，L；m样品质量，g。杀虫双分子量为355，沙蚕毒素分子量为149，将测得的沙蚕毒素量乘以2.38，即为杀虫双含量。6.精密度 大米样品添加回收实验结果的变异系数小于20。,食品中农药及兽药残留的测定,五、食品中拟除虫菊酯农药的测定1.原理 样品中氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯经提取、净化、浓缩后用电子捕获-气相色谱法测定。氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯经色谱柱分离后进入到电子捕获检测器中，便可分别测出其含量。经放大器，把讯号放大用记录器记录下峰高或峰面积。利用被测物的峰高或峰面积与标准的峰高或峰面积比进行定量。2.试剂 石油醚 分析纯，3060重蒸。丙酮 分析纯，重蒸。无水硫酸钠 分析纯，550灼烧4h备用。层析中性氧化铝 550灼烧4h后备用，用前140烘烤1h，加3水脱活。层析活性炭 550灼烧4h后备用。脱脂棉 经正己烷洗涤后，干燥备用。农药标准品 氯氰菊酯96；氰戊菊酯94.3；溴氰菊酯97.5。,食品中农药及兽药残留的测定,标准液的配制 用重蒸石油醚或丙酮分别配制氯氰菊酯210-7g/mL、氰戊菊酯 410-7g/mL、溴氰菊酯110-7g/mL的标准液。吸取10mL氯氰菊酯、10mL氰戊菊酯、5mL溴氰菊酯的标准液于25mL容量瓶中摇匀，即成为标准使用液，浓度为氯氰菊酯810-8g/mL、氰戊菊酯1610-8g/mL、溴氰菊酯210-8g/mL。3.仪器气相色谱仪附电子捕获检测器、高速组织捣碎机、电动振荡器、K-D浓缩器或恒温水浴箱、具塞三角烧瓶、玻璃漏斗、10L注射器。,食品中农药及兽药残留的测定,4.操作方法（1）提取 谷类 称取10g粉碎的样品，置于100mL具塞三角瓶中，加入石油醚20mL，振荡30min或浸泡过夜，取出上清液24mL待过柱用（相当于12g样品）。蔬菜类 称取20g经匀浆处理的样品于250mL具塞三角瓶中，加入丙酮和石油醚各40mL摇匀，振荡30min后让其分层，取出上清液4mL待过柱用。（2）净化 大米 用内径1.5cm、长2530cm的玻璃层析柱，底端塞以经处理的脱脂棉。依次从下至上加入1cm的无水硫酸钠，3cm的层析用中性氧化铝，2cm的无水硫酸钠，然后以10mL石油醚淋洗柱子，弃去淋洗液，待石油醚层下降至无水硫酸钠层时，迅速将样品提取液加入，待其下降至无水硫酸钠层时加入淋洗液淋洗，淋洗液用量2530mL石油醚，收集滤液于尖底定容瓶中，最后以氮气流吹，浓缩体积至lmL，供气相色谱用。,食品中农药及兽药残留的测定,面粉、玉米粉 所用净化柱与4.（2）相同，只是在中性氧化铝层上边加入0.01g层析活性炭粉（可视其颜色深浅适当增减层析炭粉的量）进行脱色净化，操作同4.（2）。蔬菜类 所用净化柱与4.（2）同，只是在中性氧化铝层上加0.020.03g层析活性炭粉（可视其颜色深浅适当增减层析活性炭粉的量）进行脱色。淋洗液用量3035mL石油醚，净化操作同4.（2）（3）测定 用具有ECD的气相色谱仪。色谱条件 a.色谱柱 玻璃柱3mm（内径）1.5m或2m，内填充3OV101/Chromosorb W（AW-DMCS）80100目。b.温度 柱温245，进样口和检测器260。c.载气 高纯氮气流速140mL/min（GC-5A型色谱仪），其它型号仪器自选流速。,食品中农药及兽药残留的测定,结果计算 用外标法定量，计算公式如下。式中 Cx样品中农药含量，mg/kg；hx样品溶液峰高，mm；Cs标准溶液浓度，g/mL；Qs标准溶液进样量，L；Vx样品的定容体积，mL；hs标准溶液峰高，mm；m样品质量，g；Qx样品溶液的进样量，L。,食品中农药及兽药残留的测定,第二节 食品中兽药的测定 一、蜂蜜中四环素族抗生素残留量的测定方法 1.原理 样品中四环素族抗生素经Mcllvaine缓冲液提取后，用SEP-PAKCl8柱纯化：四环素族三种抗生素四环素、土霉素及金霉素利用薄层层析生物检测法进行分离和定性；以蜡样芽孢杆菌为试验菌株，用微生物管碟法进行定量检测。2.试剂 所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。（1）Mcllvaine缓冲液（pH4）称取磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O）27.6g、柠檬酸（C6H8O7.H2O）12.9g、乙二胺四乙酸二钠盐37.2g，用水溶解后稀释并定容至1000mL。,食品中农药及兽药残留的测定,（2）0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH4.5）称取磷酸氢二钾13.6g，用水溶解后稀释并定容至1000mL，115灭菌30min，置4冰箱中保存。（3）5乙二胺四乙酸二钠盐水溶液。（4）WatersSEP-PAK、C18柱（或国产PT-C18柱）用时先经l0mL甲醇滤过活化，再用l0mL蒸馏水置换，然后用l0mL、5乙二胺四乙酸二钠盐流过。（5）标准抗生素 四环素、土霉素、金霉素标准品由卫生部药品生物制品检定所提供。（6）抗生素标准原液和稀释液,食品中农药及兽药残留的测定,抗生素标准原液配制 精确称取四环素、土霉素、金霉素标准品适量（按效价进行换算），用0.0lmol/L盐酸溶解并定容至1000g/mL，置4冰箱中（可使用7d）。抗生素标准稀释液配制 临用前取上述原液按1:0.8剂距用0.1mol/L磷酸盐缓冲液逐步稀释配制成标准稀释液。制备四环素、土霉素标准曲线的标准浓度为0.16，0.21，0.26，0.32，0.40，0.50g/mL，参考浓度为0.25g/mL；制备金霉素标准曲线的标准浓度为0.033，0.041，0.051，0.064，0.08，0.10g/mL，参考浓度为0.05g/mL。定性试验用标准液浓度四环素、土霉素为2g/mL，金霉素为lg/mL。（7）展开剂 正丁醇-醋酸-水（4:1:5）。,食品中农药及兽药残留的测定,3.仪器（1）隔水式恒温箱（2）冰箱（04）（3）恒温水浴（4）高压灭菌器（5）旋转式减压蒸馏器（6）离心机 2000r/min。（7）天平 感量0.1mg。（8）层析缸 内长20cm、宽15cm、高30cm。（9）长方形培养皿 1.5cm8cm23cm。（10）层析纸 7cm22cm，中速滤纸。,食品中农药及兽药残留的测定,（11）微量注射器 10L、50L。（12）电吹风机（13）游标卡尺（14）吸管 容量为lmL和l0mL，标有0.1mL单位刻度。（15）注射器 容量为20mL。（16）平皿 内径为90mm，高1617mm，底部平整光滑，具陶瓷盖。（17）不锈钢小管（简称小管）内径6.0mm 0.1mm，外径7.8mm 0.1mm，高度l0mm 0.1mm。,食品中农药及兽药残留的测定,4.培养基（1）菌种培养基 胰蛋白胨 10.0g 琼脂 1416g 牛肉浸膏 5.0g 蒸馏水 1000mL 氯化钠 2.5g 将上述各成分混合于蒸馏水中，搅拌加热至溶解，