白花紫露草染色体核型分析 毕业论文.doc

白花紫露草染色体核型分析摘要：本实验采用染色体常规压片法，结合显微摄影技术和potoshop图像处理技术对鸭跖草属(CommelinaL.)植物饭包草(Commelina bengalensisL.)的染色体数目和核型进行了研究，结果表明：饭包草染色体数为2n=54，核型公式为2n=2x=54=4M+14m+12sm+22st+2t. 染色体长度类型公式：2n=54=12L+2M2+20M1+20S.全组染色体总长为347.47m,长臂总长为305.13m。核型不对称系数为70.00%，核型属于Steabins核型分类中的“3C”类型。关键词：饭包草；染色体；核型分析 Karyotype Analysis of Commelina communsis Abstract: The chromosome number and karyotype of Commelina communsis L were studied through normal method of sheeting with the technique of microphotography and software photoshop.The results showed that the chromosome number was 2n=54 and its karyotype formula was K(2n)= 2x=54=4M+14m+12sm+22st+2t. The composition of relative length of chromosome is 2n=54=12L+2M2+20M1+20S.The total length of all chromosomes was 347.47m and the total length of long arms was 305.13m.Asymmetric coefficient of Karyotype was 70.00%.the Karyogram belonged to the type of 3C of Steabins. Key words: Commelina communsis L; chromosome; Analysisof karyotype.1.前言 饭包草为饭包草科植物，中文别名有竹叶菜、卵叶鸭跖草、火柴、鸭舌草、碧竹子、淡竹叶、大号日头舅、千日菜，马耳草、竹菜等等，拉丁学名Commelina bengalensis L.全国有湖北（巴东、房县）、江西（遂川、上犹、黎川）、安徽（舒城、全椒）、江苏（淮安、高邮、扬州、镇江、南京）、浙江（杭州、镇海）、福建（无具体地点）和台湾等多省均有分布。 形态特征：多年生匍匐草本。茎披散，多分枝，长可达70厘米，被疏柔毛。叶片卵形，总苞片佛焰苞状，柄极短，与叶对生。种子多皱。蕨果椭圆形。茎上部直立，基部匍匐，多少被毛，匍匐茎的节上生根。 叶具明显叶柄；叶片椭圆状卵形或卵形，长36.5厘米，宽1.53.5厘米，顶端钝或急尖，基部圆形或渐狭而成阔柄状，全缘，边缘具毛，两面被短柔毛或疏长毛或近无毛；叶鞘和叶柄被短柔毛或疏长毛。佛焰苞片漏斗状而压扁，被疏毛，长约1.2厘米，宽1.7厘米，与上部叶对生或13个聚生，无柄或柄极短；聚伞花序数朵，几不伸出苞片，花梗短；萼片膜质，披针形，长约2毫米，无毛；花瓣蓝色；雄蕊6枚，能育3枚，花丝丝状，无毛；子房长圆形，具棱，无毛，长约1.5毫米，花柱线形，长约2毫米。蒴果椭圆形，膜质，长约45毫米，具5颗种子；种子有窝孔及皱纹。 果期1112月。生长习性：生长于海拔350米至2,300米的地区，多生长在湿地，繁殖方式以播种种子的方式进行。习性阳生。 饭包草具有一定的药用价值。其幼苗和嫩茎叶可食。性味苦、寒，具有清热解毒，止咳平喘的功效。内服可治疗痢疾，急性扁桃体炎、肠炎、咽喉肿痛、感冒、齿根脓肿、慢性支气管炎、百日咳，外用可治疗丹毒、疔疮、蛇咬伤1。1.1选课背景1.1.1课题来源毕业论文1.1.2课题意义地球山有50多万种植物。在人们研究植物的早期，对植物的分类往往是根据植物的形态学、解剖学等资料来进行的，但由于每个人对植物形态认识的差异，经常会将同一植物划分为不同的类别，特别是在研究形态相似的植物时， 常 常 会 出 现 有 的 学 者 将 某 一 植 物划 分 为 这 个 属 或 种 ， 而 别 的 学 者 将 其 划 分 为 其 他 属 或种2 ，造成植物分类上的混乱，给学术交流和对整个植物 界 的 研 究 带 来 一 些 不 便 。染 色 体 核 型 是 指 某 一 物 种 所 特 有 的 一 组 染 色体 或 一 套 染 色 体 的 形 态 特 征3, 核型 分 析 是 指 对 细 胞 染 色体的数目、形态、长度、带型和着丝粒位置等内容的分析研究4，5,是 物 种 分类 的 基 本 依 据 。一种生物的染色体核型是相当固定的，因 此 可 用 它 作 为 植 物 学 分 类 及 遗 传 研 究 的 一 个 重 要 手段 ， 使 学 者 们 在 研 究 分 类 有 争 议 的 植 物 时 有 更 多 的 参考资料，以达到意见上的统一。通过对课题的研究，我们可以得出饭包草的核型公式。1.1.2课题目的本课题研究的主要目的是得出饭包草细胞的染色体数目及核型公式，具体来说就是获取关于饭包草及核型的相关参数，如短臂长、随体长、长臂长、染色体全长、着丝粒比(臂比值)、最长染色体与最短染色体的比值以及核型不对称系数等.为细胞学方面的研究积累资料。1.1.3饭包草研究现状目前，然国内对饭包草部分方面的特性已经有了一定的研究，也有一些有关饭包草核型分析的报道。其研究主要有对饭包草生物化学特性和生物防治的研究以及药理性质的研究，例如，吴竞仑（2002）等对稻田恶性杂草饭包草的植物学和生物学特性及其对水稻产量的影响等进行了室内外系统研究，并得出结论：水稻生产中宜采取水旱轮作、减少追肥、科学治虫、保护天敌、促进水稻早生快发,并以群体优势控草、稻田养鸭,以及应用除草剂乙苄或苯噻酰苄等综合措施来治理鸭舌草6。从而为为科学、有效地防治鸭跖草提供生物学理论依据；周勇军、徐效华等从饭包草株中分离获得的豆甾醇葡萄糖苷具有较高的羟自由基清除率，表明从鸭舌草中提取抗氧化物质，研制出新的食品保鲜添加素并开辟在人类保健方面的应用，具有广阔的前景7；饭包草在药用方面还具有清热解毒，止咳平喘的功效1。另外也有对饭包草活性物质提取在抑菌和抗氧化方面的研究8。 王丰（1989）做了饭包草染色体核型的研究，得出染色体数目为22条，未见随体9。杨德奎（2003）也对饭包草的染色体数目和核型分析进行了相关研究，并得出染色体数目为2n=22条，核型为“2B”型10。但国内外对饭包草染色体核型的研究结果众多，例如Canguly(1964),Malik C P(1961),Lewis W H(1964a)，Morton J K(1967)等报道的染色体数目为2n=22, Darlington(1929a),2n=68,AndersonESan(1936),2n=48,Havey()(1956),2n=30,Morton J K(1956b),2n =48、56、66,Lewis WH(1964),2n =44等。1.1.4核型分析及研究现状任何生物都有特定的一组（或一套）染色体，这组（套）染色体的数目，以及每条染色体的形态特征，诸如两臂长度、着丝粒的位置、随体的数目和长度、带型等等，都是比较固定的，具有种的特异性。我们将一个物种的染色体数目及形态特征称为该物种的核型（karyotype）。对这些特征进行定量和定性的描述，就是核型分析（karyotype analysis）。由此可见，核型分析可以说是对一个物种染色体组的形态特征等信息进行系统整理总结，其结果对一些研究工作具有重要意义，例如，植物分类中用核型做为一个判据，我们可用核型判断一个物种是否多倍体还是单倍体，在临床上还可以用于诊断遗传病。因为不同的物种具有不同的核型，因此核型是区别物种的基本遗传学依据，也对分子生物学的研究具有指导意义3。胡进耀等(2002)将核型分析方法的发展过程划分为两个阶段:染色体形态标志分析时期和分带分析时期,并分别阐述了这两个时期在核型分析方法上的创新,以及这些方法的优点和不足之处.同时对其今后的发展方向作一展望.分析了限制植物核型分析方法发展的几个因素,认为核型分析方法要取得突破性进展,第一必须扩大其应用范围,提出新的研究课题,第二必须结合动物和人体核型分析的最新研究方法以及其它学科的实验技术和理论方法11.相信在以后的植物研究中，核型分析技术可以发挥更加显著的作用。文献综述 122试验材料与方法2.1试验材料的预处理2.1.1预处理的目的细胞处在分裂中期时染色体最容易观察 ,但分裂中期持续的时间很短 ,这就需要对材料进行预处理 ,以便观察材料中期的染色体2。2.1.2预处理的方法2.1.2.1化学方法(1)用低浓度的秋水仙素溶液对材料进行预处理。常用浓度为00102。秋水仙素有很强的毒性，如果秋水仙素用量过大或处理时间过长，会引起染色体收缩过度或产生多倍体，而且秋水仙素的价格较贵。但由于用秋水仙素进行预处理的效果较好。因此，在染色体核型分析是仍较为常用。(2)用饱和的对而氯苯水溶液对材料进行预处理。对二氯苯也有毒性，其效果和秋水仙素相似，但价格较为便宜，使用也较为广泛。(3)用低浓度的8一羟基喹啉溶液对材料进行预处理。浓度范围0.002-0.004mol L，该溶液适合处理有较大染色体的植物。经过该溶液处理后，染色体的缢痕区比较清晰。( 4 ) 用 a -溴萘的饱和水溶液对材料进行预处理。该溶液适合对禾本科禾水生植物的材料进行预处理，而且是非离体处理的效果较好口。2.1.2.2物理方法物理方法是用低温对植物材料进行预处理。处理温度一般在08，最常用的就是用冰水混合物4对材料进行预处理。该方法比较经济、简单和安全，因而也比较常用。2.2材料的固定固定的目的是用渗透力强的固定液将材料迅速杀死，使蛋白质沉淀，并尽量使其保持原有状态。通常用卡诺液I(无水酒精 ：冰醋酸 =3：1)对材料固定24h左右。在对材料固定后，应马上进行解离，以保证实验效果。2.3材料的解离解离的目的是除去细胞壁与胞问层之间的果胶软化细胞壁3。材料固定后应尽快解离。研究表明固定后立即解离的材料压片效果要优于固定后保存的材料13。固定好的材料若不能及时解离应保存在70酒精中。对材料的解离方法有酶解法和酸解法。酶解法是用低浓度的果胶酶(12)和纤维素酶(15)的混合液对材料进行解离，解离时间一般在室温下25 h；酸解法一般是将材料放入预热60的1molL HCl中解离，解离时间一般为几分钟到十几分钟，具体时间依不同材料而定。两种方法比较而言，酸解法比较经济，一般实验多采用此法。但是，无论是酶解还是酸船，都要把握好解离的时间，时间过长或过短都会产生不良的影响。解离时间过长，则材料易碎而不可取，细胞膜也容易破裂，染色体逸散或混合在一起，给观察和分析造成很多麻烦。2.4材料的染色对材料的染色是指用颜料对材料进行处理，仅使染色体染色，而染色质不染色或染色很淡，以便观察和分析。可分为常规染色法和分带染色法。2.4.1常规染色法(1)醋酸洋红溶液染色：此法简单易行，较为常用。先将材料置于载玻片上，用不锈钢刀片切去根冠和伸长区，留下分生区，然后加一滴醋酸洋红，待根尖被染至暗红色时，进行常规压片。如果想使染色的效果更好，可以在压片后置于酒精灯上加热数秒，但不能使染液沸腾。如染色过深，可在盖玻片的一侧滴加适量45的醋酸，另一侧用滤纸吸取染液，以达到褪色的目的。(2)改良石炭酸品红溶液染色改良石炭酸品红克服了石炭酸中含有较多甲醛而使原生质硬化的缺点，并且该染液比较稳定，能存放很长时间，因此应用也很广泛。该染液染色的方法与醋酸洋红染色的方法相同，但不需加热。(3)铁矾一苏木精溶液染色：先用4的铁矾溶液进行媒染，用蒸馏水将铁矾洗净，再用05的苏木精染色，蒸馏水漂洗，然后用45的醋酸分色、软化，常规压片。此方法能使染色体的轮廓保持清晰，即使用它处理染色体数目多而不易分散的材料，也能得到较好的效果。(4)Schiff试剂染色：先将解离好的材料用蒸馏水漂洗几次，把材料放于染液中15h或黑暗处过夜，然后将材料在漂洗液或直接将材料在蒸馏水中冲洗几次，每次数分钟，最后用45的醋酸压片。该方法不仅能显示出染色体的形态结构，而且可用显微分光光度计对细胞核及染色体中的脱氧核糖核酸进行定量测定，因此该方法在细胞遗传学研究中较为常用。除了以上主要方法，还有一些别的染色方法，如用品红溶液染色、用(改良)卡宝红溶液染色和用卡宝红一品红溶液染色等。2.4.2分带染色法分带染色是指染色体经过染色后，不同部位呈现出不同的条带。可根据条带的不同，对植物进行分类和遗传研究。常用分带染色法如下：(1)C-带染色：先将压好的片子冷冻脱片，室温下防尘干燥。用酸或碱(通常用5的Ba(0H)：处理，使染色体变性，再用盐溶液(2×SSC溶液)高温(6065)下处理，使之复性，最后Giemsa染色，使染色体的不同部位呈现宽窄不同的条带。通常一种植物的C-带是固定的，而且重复性很高，因此，在实际操作中C-带染色法最常用。(2)G-带染色；先将压好的片子冷冻脱片，室温下防尘干燥。用2×SSC溶液处理，Giemsa染色，使染色体上出现宽窄、深浅不同的条带。但G带较为均一，缺乏特异性，因此没有C一带常用。(3)N一带染色：先将压好的片子冷冻脱片，室温下防尘干燥。用1molLNaH2PO4。高温(8797)处理，水洗，Giemsa染色，使染色体核仁组成区染色。但用该方法处理一些禾本科植物的染色体时，不仅核仁组成区着色，而且染色体的其它部位也染色成带。因此该法可用于植物染色体核仁组成区的数目和位置等方面的研究，同时也可用于一些禾本科植物染色体的带型研究。(4)Ag一染色：该法是用AgNO3。等药品处理植物染色体，使染色体核仁组成区染色。如果用HCl(或NaHO)作前处理，再用AgNO3。染色，在一些禾本科植物染色体的着丝粒、端粒等部位也能染色。因此，该方法也能用于植物染色体核仁组成区的数目和位置等方面研究和一些禾本科植物染色体的带型研究。2.5制片制片的质量直接影响实验的结果，可根据具体情况采用各自的制片方法。常用的制片方法分为压片和涂片两种。常规压片法：将解离和染色好的材料放在载玻片上，滴加12滴染液，然后盖上盖玻片，以铅笔的橡皮头端或解剖针在盖玻片上对准材料轻轻敲击，使细胞分散，再用拇指垂直挤压盖玻片，使材料分散压平，便于观察。压片的方法不固定，只要在制片的过程中不让盖玻片移动，使细胞和染色体分散开来即可。涂片法是先用镊子、解剖针等将材料(包括花药)弄碎，使细胞均匀分散于载玻片上，以便观察。由于常规压片易于操作，因此该方法是实际操作中最普遍采用的方法。而涂片法能使细胞得到充分分散，便于观察，虽然复杂一点，在一些特殊要求的实验中还是采用此种方法。2.6镜检及拍照境检时先在低倍镜下观察，找到分散良好、处于细胞分裂相的细胞后，再将要观察的细胞放到视野的中间 ，调到高倍镜下观察 。注意观察有丝分裂全过程的染色体形态变化，找出染色体分散好的中期细胞进行染色体计数和拍照，对好的分裂图像作上标记，以便再观察。2.7染色体核型分析核型分析包括染色体数目的确定禾染色体形态的分析。在进行核型分析时，通常按李懋学等的标准来确定染色体的数目，分析染色体的形态14，按Levan等的命名系统来确定染色体的相对长度、臂比及类型15，按Stebbins的方法确定染色体核型的类别16，核型不对称系数(As·K, % )计算公式为:长臂总长/全组染色体总长×100。2.7.1染色体数目一般以体细胞染色体数目为准。统计的细胞数目一般应在30个以上。其中85以上的细胞具恒定一致的染色体数，即可认为是该植物的染色体数目14。2.7.2染色体形态分析作为核型分析的染色体，一般以体细胞分裂中期的染色体作为基本形态。在 进 行 染 色 体 形 态 分 析 时 ， 一 般 取 5个 以 上 染 色体分散良好的中期细胞进行显微摄影。利用photoshop对染色体长度和数量进行测量。电脑系统运用Adobe photoshop软件，不仅能够很容易的完成染色体的配对排列，非常精确的测量染色体各臂的长度及全长，建立核型模式图，而且可以去除原照片的斑点和划痕，调整亮度对比度，对交叉重叠的染色体进行修整等，使分析结果比较完美。2形态分析测量及计算的内容有：（1） 绝对长度（以微米表示）=放大的染色体长度(毫米) /放大倍数×1000（2） 相对长度=染色体长度÷染色体组总长度×100，（3）相对长度系数：染色体长度/全组染色体平均长度，（4）染色体长度比：最长染色体长度/最短染色体长度，（5）核型不对称系数=长臂总长/全组染色体总长，（6）臂比=长臂长度/短臂长度，（7）差值=长臂长度-短臂长度，（8）着丝点指数=短臂长/染色体全长1、着丝粒位置：根据臂比数值来确定着丝粒位置，臂比=长臂长度/短臂长度。为了便于区分，取用小数点后两位数值。臂比值为1.00的为正中着丝粒（Median centromere,用“M”来表示）；臂比值在1.01-1.70之间的为中部着丝粒（Metacentric,用”m”来表示）；臂比值在1.71-3.00之间的为近中部着丝粒（Submetacentric,用“sm”来表示）；臂比值在3.01-7.00之间的为近端部着丝粒（Subtelocentric，用“st”来表示）；臂比值在7.01之间的为端部着丝粒（Telocentric,用“t”来表示），如表1表1，染色体按着丝粒分类表臂比染色体类型符号1.00 正中部着丝粒染色体 M1.01-1.70 中部着丝粒染色体 m1.71-3.00 近中部着丝粒染色体 sm3.01-7.00 近端部着丝粒染色体 st7.01以上 端部着丝粒染色体 t2、染色体长度类型的确定：，按Levan等的命名系统来确定染色体的相对长度、臂比及类型。如表2表2：染色体长度类型的确定相对长度系数 长度类型 符号1.26长染色体 L1.25-1.01 中长染色体 M2 1.00-0.76 中短染色体 M1 0.75 短染色体 S 4、同源染色体的配对：根据染色体的长度，臂比，着丝粒的位置，随体的有无和位置以及染色体的带型等进行染色体的配对。5、同源染色体的排列：根据染色体的长度给染色体编号，长度最长的染色体编为1号染色体，依次排列，最短的染色体编为末号，等长的染色体吧短臂长的染色体排前面。接着将配对好的同源染色体按编号有小到大排列，排列时把染色体的着丝粒放在一条直线上（如果染色体数目较多，可把染色体排成两行或两行以上）染色体纵向与直线垂直，断臂放在上边，长臂排在下面，具有随体的染色体排在最后。2.7.3核型的表述格式：（1）表格：将染色体的相对长度、臂比和染色体类型列表。随体的长度是否计算，不作统一规定，不过都应在表下加以文字注明。具随体(或次缆痕)的染色体，在表中应以星号“*”标记。（2）核型图：选一张有代表性的体细胞有丝分裂中期染色体的完整照片（模式照片），将与模式照片同一细胞的染色体剪下，参照染色体长度和臂比值，进行同源染色体“配对”，然后按表格中的染色体顺序排列。（3）核型公式：即综合核型分析的结果，将核型的主要特征以公式表示。例如：核型为2n=2x=12=6m+2sm+2st+2SAT，即表示：有6个中部着丝粒染色体，2个近中部着丝粒染色体，2个近端部着丝粒染色体，2个随体染色体。（4）核型类型的确定：Stebbins(1971)参照生物界现有的核型资料，根据核型中染色体的长度比和臂比两项主要特征，用以区分核型的对称和不对称程度，并将其分为12种类型，如表3.表3 核型按对称程度分类表最长最短 臂比值大于 臂比值大于2:1的染色体的百分比0.00.01-0.05 0.51-0.99 1.02:12:1-4:14:11A 2A 3A 4A1B 2B 3B 4B1C 2C 3C 4C（5）核型模式图：以核型分析结果表中所列各染色体的相对长度绘制一坐标轴。横轴上表明个染色体序号，每一染色体与其序号想对应，纵轴表示相对长度值（%），零点绘在纵轴的中部，并与各染色体的着丝点想对应。也可以通过翻拍摄影。此即为该细胞的核型模式图。3.本试验使用材料与方法3.1试验材料的来源与采集 试验材料来源于宜昌三峡大学野生饭包草。3.2主要试验仪器及试剂3.2.1主要仪器 主要仪器有：恒温水浴锅，冰箱，显微镜，培养皿，小烧杯，载玻片，盖玻片，镊子，剪刀，刀片、解剖针，吸水纸、温度计、标签、铅笔、量筒等常用工具。 表4 主要仪器生产厂家仪器名称仪器来源冰箱电子天平显微镜水浴锅购自中国Haier公司购自METTLER TOLEDO公司产自德国Leica公司购自中国宁波天恒仪器厂3.2.2主要试剂卡诺式固定液、FAA固定液、0.050.2秋水仙碱水溶液或饱和对氯二苯溶液、8-羟基喹啉、饱和a -溴萘、0.075M KCL、改良的石碳酸品红染液、45%的冰醋酸、冰乙酸、95%乙醇、70%乙醇、1mol/L盐酸、0.002M8-羟基喹啉溶液、蒸馏水。表5 主要试剂及来源试剂生产厂家无水乙醇天津市东丽区天大化学世纪厂浓盐酸武汉华松精细化工有限公司甲醛武汉中南化工试剂有限公司冰醋酸天津市光复精细化工研究所苯酚天津市科密欧化学试剂开发中心磷酸氢二钠天津市科密欧化学试剂有限公司磷酸二氢钠天津市博迪化工有限公司二甲苯武汉市硚口教学实验工厂香柏油天津市科密欧化学试剂有限公司甲醇上海振兴化工一厂对二氯苯SCRC国药集团化学试剂有限公司a-溴萘上海试剂一厂洋红天津市光复精细化工研究所碱性品红上海浦江化工有限公司8-羟基喹啉上海浦江化工有限公司甘油天津市瑞金特化工有限公司氯化钾天津市恒心化工有限公司3.3试剂的配制Carnoy固定液：无水乙醇3份，冰醋酸1份，现配现用，此液作组织细胞的固定，有极快的渗透力，固定茎尖和花药只需40-60分钟。固定后用95酒精冲洗，在组织不能立即处理时，需转入70酒精中保存。FAA固定液：50%乙醇85ml，甲醛10ml、冰醋酸5ml，混合后即可。改良苯酚（石炭酸）品红染液：先配苯酚（石炭酸）品红染液，称取0.3g碱性品红溶于10ml 70%的乙醇中，然后加入90ml 5%的石碳酸水溶液，再加如11ml冰醋酸和11ml 37%的甲醛即配成苯酚（石炭酸）品红染液。改良苯酚（石炭酸）品红染液，取苯酚（石炭酸）品红染液10ml，加入90ml 45%的冰醋酸和1.8g的山梨醇即可配成改良苯酚（石炭酸）品红染液。该染液一般需放置两周以后使用染色效果较好。对二氯苯饱和水溶液：称取5克结晶放入棕色试剂瓶中，加入100毫升已加温至4045的蒸馏水，振荡5分钟，静置冷却(约1小时)后即可使用。该溶液在1020条件下存放和处理为宜。溶液用完后，可重新加入温热蒸馏水，如上法配制。0.002M 8-羟基喹啉：称取0.29032克8-羟基喹啉置1000ml蒸馏水中。因本药难溶于水，需将溶液置60左右的温箱中数小时，待其完全溶化后，取出冷却至室温贮存备用。1 mol.L-1盐酸：取浓盐酸83.3加蒸馏水定容至1000毫升。 3.4试验方法（1）取材：在上午8：009:00采取野生饭包草，截取根尖用蒸馏水洗净。（2）预处理：用饱和的对二氯苯水溶液对材料进行预处理3-5个小时。（3）固定：将预处理后的材料水洗23次，然后用卡诺氏固定液（乙醇3份，冰醋酸1份）固定2024h，用95%酒精冲洗2次后转入70%酒精中置4冰箱中保存待用。（4）将从固定液或70%酒精中取出的根尖用蒸馏水漂洗后置入已经60恒温水浴锅中预热的装有1MHCl的小瓶中，再在60恒温水浴锅中解离1014分钟, 然后用蒸馏水洗23次，每次5min。（5）染色：取处理好的根尖置于载玻片中央，切掉根冠，只留分生区，用吸水纸吸去多余的溶液，然后用镊子尖或小刀将根尖捣碎，再滴加几滴改良石碳酸品红染液、染色1012分钟。（6）压片：盖上盖玻片，并在盖玻片上盖上一张吸水纸，左手固定载玻片，用铅笔的橡皮头轻敲盖玻片，敲击过程中保持盖玻片不挪动，使材料尽量分散便于观察。（7）镜检观察：镜检时应先在低倍镜下观察，找到分散良好、处于细 胞 分 裂相 的 细 胞 后 ， 再 将 要 观 察 的 细 胞 放 到 视野 的 中 间 ， 调 到 高 倍 镜 下 观 察 。然后选择染色体铺展良好、收缩适度、无失散现象、没有或很少重叠的有丝分裂中期细胞,先用低倍镜观察,再在油镜下进行观察,最后用Lecai成像拍照,并存储为JPEG格式,以供下一步利用Photoshop进行染色体核型分析。3.4测量及计算利用Adobe photoshop 图片处理技术，对染色体分散较好，形态清晰的图片进行处理，测量染色体长臂和短臂长度，并且进行同源染色体配对。利用Excel对数据进行分析处理，计算核型的各个参数，即绝对长度、相对长度、相对长度系数、差值、着丝点指数、臂比、染色体长度比、核型不对称系数，然后绘制核型图和核型模式图。4结果与分析4.1饭包草染色体数目与形态选择30个染色体分散较好的，其中26个细胞染色体数目为54条，占计数总数的86.7%。因此确定其染色体数为54。染色体核型公式为 2n=2x=54=4M+14m+12sm+22st+2t；染色体长度类型公式：2n=54=12L+2M2+20M1+20S ；最长染色体/最短染色体是5.02 ； 臂比大于2：1所占百分比是66.67%；核型类型为3C；核型不对称系数为0.70。试验结果统计如表4和表5.表4 饭包草染色体核型分析参数表染色体序号染色体长（m）臂比 相对长度 相对长 差值度系数类型长臂短臂全长按着丝 按长度粒分类 分类1号14.50 6.25 20.75 2.32 4.742.568.25smL2号12.97 3.50 16.47 3.70 3.762.039.47stL3号10.47 待添加的隐藏文字内容33.60 14.07 2.91 3.221.746.87smL4号9.37 2.97 12.33 3.16 2.821.526.40stL5号7.17 4.40 11.57 1.63 2.641.432.77mL6号7.00 3.17 10.17 2.21 2.321.263.83smL7号5.08 3.33 8.42 1.53 1.921.041.75mM28号4.83 3.27 8.10 1.48 1.851.001.57mM19号4.00 4.00 8.00 1.00 1.830.990.00MM110号5.67 1.88 7.55 3.01 1.730.933.78stM111号5.10 2.33 7.43 2.19 1.700.922.77smM112号5.50 1.80 7.30 3.06 1.670.903.70stM113号4.03 3.03 7.07 1.33 1.620.871.00mM114号3.70 3.13 6.83 1.18 1.560.840.57mM115号3.83 2.87 6.70 1.34 1.530.830.97mM116号4.92 1.42 6.33 3.47 1.450.783.50stM117号5.07 1.17 6.23 4.34 1.420.773.90stM118号4.83 1.20 6.03 4.03 1.380.743.63stS19号3.00 3.00 6.00 1.00 1.370.740.00MS20号4.30 1.62 5.92 2.66 1.350.732.68smS21号4.67 1.07 5.73 4.38 1.310.713.60stS22号4.33 1.33 5.67 3.25 1.300.703.00stS23号4.33 1.07 5.40 4.06 1.230.673.27stS24号3.83 1.33 5.17 2.88 1.180.642.50smS25号4.00 0.90 4.90 4.44 1.120.603.10stS26号2.33 2.13 4.47 1.09 1.020.550.20mS27号3.73 0.40 4.13 9.33 0.940.513.33tS染色体核型公式：2n=2x=54=4M+14m+12sm+22st+2t染色体长度类型公式：2n=54=12L+2M2+20M1+20S 最长染色体/最短染色体：5.02 臂比大于2：1所占百分比：66.67%核型类型:3C核型不对称系数：0.70表5 根据着丝点位置不同的染色体分类表着丝点位置类型数目染色体序号臂比值(长臂长度/短臂长度)差值(长臂长度-短臂度)着丝点指数(短臂长/染色体全长)M29191.001.000.000.000.500.50m7 578131415261.631.531.481.331.181.341.092.771.751.571.000.570.970.200.380.400.400.430.460.430.48sm 6 1361120242.322.912.212.192.662.888.256.873.832.772.682.500.300.260.310.310.270.26st11241012161718212223253.703.163.013.063.474.344.034.383.254.064.449.476.403.783.703.503.903.633.603.003.273.100.210.240.252.050.220.190.200.190.240.200.18t1279.333.330.10 4.2染色体核型图利用photoshop处理照片，测出染色体的绝对长度、相对长度、臂比等核型参数进行同源染色体配对，按染色体由长到短将同源染色体编号，从左到右贴在纸上。着丝点排列在同一水平上，短臂在上，长臂在下。完成上述染色体的配对排列后，再附上一张同一照片的中期分裂相，即成为染色体核型图。如图一、图二和图三。图一 饭包草根尖细胞染色体图 图二 photoshop处理后的染色体照片 图三 饭包草染色体核型图4.3染色体核型模式图利用photoshop图像处理软件和Excel数据处理软件绘制出染色体核型模式图。以核型分析结果表中所列各染色体的相对长度绘制一坐标轴。横轴上表明个染色体序号，每一染色体与其序号想对应，纵轴表示相对长度值（%），零点绘在纵轴的中部，并与各染色体的着丝点想对应。此即为该细胞的核型模式图。如图四。 图四 饭包草染色体核型模式图5讨论 饭包草的核型公式为2n=2x=54=4M+14m+12sm+22st+2t,在27对染色体中有2对正中部着丝粒染色体，7对中部着丝粒染色体，6对近中部着丝粒染色体，11对近端部着丝粒染色体，1对端部着丝粒染色体，无俱随体染色体。这说明饭包草染色体形态结构差异是较大的。核型部对称系数是70.0%，大于50%，说明饭包草在进化过程中属于较进化的地位。饭包草核型