虫草的一种培养条件的研究.doc

毕业设计（论文）题 目：虫草的一种培养条件的研究 TITLE； a culture conditions of Cordyceps学生姓名： 学 号： 专 业：生物技术 指导教师： 二零一二年六月 Design graduates (Papers)TITLE； a culture conditions of CordycepsName ： Number ： Major ： BiotechnologyInstructor： June 2012摘 要 为研究蛹虫草菌丝生长最适生长等人工栽培过程中所必须的适宜氮源、碳源、温度、PH、矿质元素，比较观察了常见的氮源、碳源、温度、PH、矿质元素对菌种质量、菌丝生长状况、发菌情况的影响。结果表明，各种氮源、碳源、不同PH、不同矿质元素、在不同的温和温度下蛹虫草菌丝体都能生长，在蛋白胨、葡萄糖、24、PH6.7、磷酸二氢钾加硫酸镁组合下生长最佳。关键词：蛹虫草；人工栽培；氮源；碳源；温度；PH；矿质元素ABSTRACTCordyceps militaris growth optimum growth must be in the artificial cultivation of the process of suitable nitrogen source, carbon source, temperature, PH, mineral element comparative observation ofcommon elements of nitrogen, carbon source, temperature, PH,mineralstrain the quality of mycelial growth conditions, made thesituation in bacteria. The results showed that the nitrogen source,carbon source, different the PH, the different mineral elements in themoderate temperature mycelial can grow, peptone, glucose, 24 ° C,PH6.7, potassium dihydrogen phosphate and grown undermagnesium sulfate combination.Keywords: Cordyceps militaris; artificial cultivation; nitrogen; carbon source; temperature; the PH; mineral elements目录1绪论21蛹虫草概述21.1 蛹虫草生境特征21.2 蛹虫草形态特征31.3 蛹虫草的研究现状3本论- 10 -2 材料和方法- 10 -2.1 材料- 10 -2.1.1 主要仪器设备- 10 -2.1.2 培养基及试剂- 10 -2.2 实验方法- 11 -2.2.1 蛹虫草的菌种活化- 11 -2.2.2仪器的杀毒灭菌- 11 -2.2.3 各种不同培养条件培养基的配置- 12 -2.2.4倒平皿- 12 -2.2.5接种- 12 -2.2.6恒温培养观察与记录- 12-3 实验结果17小结与结论19致谢20参考文献21附录22绪论1蛹虫草概述1.1 蛹虫草生境特征中国于 1958 年在吉林省首次发现，通过鉴定，认 为它与冬虫夏草是同一个属，定名为蛹草。主产于云南（昆明、安宁、江 川）、吉林（安图、永吉）、辽宁（沈阳）、内蒙古（哲里木盟），生于 针、阔叶林或混交林地表土层中鳞翅目昆虫的蛹体上。1.2 蛹虫草形态特征蛹虫草；中文学 名： 蛹虫草 纲： 子囊菌 拉丁学 名： Cordycepsmilitaris 目： 肉座菌 科： 别称： 北冬虫夏草 属： 界： 真菌界 麦角菌 虫草 门：蛹虫草百科名片 蛹虫草 蛹虫草为子囊菌亚门，麦角菌目，麦角菌科、虫草属的模式种。学名为 Cordycepsmilitaris，又名北冬虫夏草、北蛹虫草、虫草等。世界性分布天然资 源数量很少。由子座（即草部分）与菌核（即虫的尸体部分）两部分组成的复合 体。冬季幼虫蛰居土里，菌类寄生其中，吸取营养，幼虫体内充满菌丝而死。到 了夏季，自幼虫尸体之上生出幼苗，形似草，夏至前后采集而得。子座单生或数个一起从寄生蛹体的头部或节部长 出，颜色为橘黄或橘红色，全长 28 厘米，蛹体颜色为紫色，长约 1.52 厘米。 1.菌丝体 菌丝体蛹虫草 蛹虫草的菌丝是一种子囊菌，其无性型为蛹草拟青霉。其菌体成熟后 可形成子囊孢子（繁殖单位），孢子散发后随风传播，孢子落在适宜的虫 体上，便开始萌发形成菌丝体。菌丝体一面不断地发育，一面开始向虫体 内蔓延，于是蛹虫就会被真菌感染，分解蛹体内的组织，以蛹体内的营养 作为其生长发育的物质和能量来源，最后将蛹体内部完全分解。 2.子实体 子实体一般当蛹虫草的菌丝把蛹体内的各种组织和器官分解完毕后，菌丝体 发育也进入了一个新的阶段。菌丝体由营养生长开始转为生殖生长，最后 扭结后从蛹体空壳的头部、胸部、近尾部等处伸出，形成橘黄色或橘红色 的顶部略膨大的呈棒状的子座（子实体）1.3 蛹虫草的研究现状冬虫夏草 是我国三大名贵中药材之一，具有提高免疫功能及抗肿瘤作用，同时对慢性支气管炎、高脂血症、心血管疾病、男性性功能障碍等有很好的疗效。天然的冬虫夏在主要产于四川、西藏、云南、青海等省（区）的海拔3000m以上的寒冷地带，由于其生长条件的限制及过度采挖，产量很低，所以价格昂贵。因此，为弥补天然虫草资源的不足，国内外学者纷纷开展人工培养虫草的研究，其中以蛹虫草的研究和应用最多。蛹虫草有多种药理作用：一；抗肿瘤作用，二；降血脂及降血压作用，三；镇静及激素样作用，四；耐缺氧和抗疲劳作用 蛹虫草 - 药理作用现代科学论证科茸蛹虫草不仅具有特殊的营养价 值，而且有明显的药用价值。其中尤以虫草酸、虫草素、虫草多 药理作用糖和 SOD 等多种生物活性物质的药用价值最为显著。虫草酸（甘露醇） 可以显著地降低颅压，促进机体新陈代谢，因而使脑溢血和脑血栓病症得 到缓解因为蛹虫草具有多种药用功能，可以作为食品直接食用，可以加工成保健品，更可以研制成药品虽然蛹虫草的人工培养在我国已获得成功并进入产业化阶段，但产业化生产中仍存在一定的难题，突出的一点是蛹虫草的退化问题，因为它对生长基质及生态环境与一般的食用菌不同，而且长期采用无性繁殖及多次转管的蛹虫草品种，其母种基因容易变异，变现为出草畸形甚至不出草，产量和质量都不稳定，生物转化率较低，所以，必须研究和摸索出一种有效的防治虫草菌退化的方法，从而确保虫草的产业化生产顺利进行，目前虽然市场上有一些蛹虫草的产品，但这些产品多数停留在粗加工水平，缺乏市场竞争力，因此，要确保蛹虫草产业能够持续稳定的发展，就必须要提高其加工产品的科技含量。据报道，美国已将虫草的主要成分虫草素提纯，研制成针剂用于治疗白血病和癌症，并已进入III期临床。所以，对于我们来说，相关方面的研究还有待于进一步加强。本论2 材料和方法2.1 菌种 蛹虫草（Cordyceps militaris）,由东华理工大学生物系微生物实验室提供。2.2 培养基 研究氮源培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1g，VB0.11g , 琼脂20g，蒸馏水定容至1000mL，平均分为四份，分别加入硝酸钾3.75g，牛肉膏3.75g，硫酸铵3.75g，蛋白胨3.75g，pH自然，121灭菌30min。研究碳源培养基：马铃薯200g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁2g，VB0.11g , 琼脂20g，蛋白胨15g，蒸馏水定容至1000mL，平均分为四份，分别加入葡萄糖5g，麦芽糖5g，乳糖5g，蔗糖5g，pH自然，121灭菌30min。研究温度培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1g，VB0.11g , 琼脂20g，蛋白胨15g，蒸馏水定容至1000mL，平均分为四份，pH自然，121灭菌30min。研究PH培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1g，VB0.11g , 琼脂20g，蛋白胨15g，蒸馏水定容至1000mL，平均分为四份，分别调节：pH 5.5,PH5.9,PH6.5,PH7.0，121灭菌30min。研究矿质元素培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g， VB0.11g , 琼脂20g，蛋白胨15g，蒸馏水定容至1000mL，平均分为四份，分别放入：矿1磷酸二氢钾0.75g和硫酸镁0.25g ，矿2磷酸二氢钾0.75g和硫酸钙0.283g，矿3磷酸二氢钠0.66g和硫酸镁0.25g，pH自然，121灭菌30min。2.3 试剂和原料蒸馏水，盐酸，氢氧化钠 2.4 仪器设备和装置1000ml烧杯，小刀，纱布，玻璃棒，胶头滴管，牛皮纸，PH试纸，橡皮经加热器，报纸若干，1000ml锥形瓶，250ml锥形瓶，培养皿57个电子天平Bs22oZs;恒温干燥箱0一1型上海英松工矿设备仪器有限公司；蒸汽灭菌锅D一1型北京发恩科贸有限公司;洁净工作台A工RTEHCus一130L0一u型苏州安泰空气技术有限公司;电热恒温培养箱YPX一DHS一50又65上海市跃正医疗器械厂2.5实验方法251培养基的配置氮源培养基的配置：将预先准备好的土豆洗干净并去皮，在天平上称取200g，切成薄片放入1000ml烧杯中，并加水至600ml，放于加热器上加热，在煮的过程中（要时刻注意搅拌，人不可离开，以免受热不均爆沸炸裂烧杯和加热器发生意外），待土豆到熟而不烂的程度时，停止加热，四层纱布过滤，加入适量水继续加热，在加热的过程中放入葡萄糖20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1g，VB0.11g，琼脂20g，待各试剂彻底溶解，加水定容至1000ml，并分装入四个250ml的锥形瓶中，分别加入硝酸钾3.75g，牛肉膏3.75g，硫酸铵3.75g，蛋白胨3.75g，用牛皮纸橡皮经包好，准备杀菌碳源培养基的配置：将预先准备好的土豆洗干净并去皮，在天平上称取200g，切成薄片放入1000ml烧杯中，并加水至600ml，放于加热器上加热，在煮的过程中（要时刻注意搅拌，人不可离开，以免受热不均爆沸炸裂烧杯和加热器发生意外），待土豆到熟而不烂的程度时，停止加热，四层纱布过滤，加入适量水继续加热，在加热的过程中放入，磷酸二氢钾2g，硫酸镁2g，VB0.11g，琼脂20g，蛋白胨15g，待各试剂彻底溶解，加水定容至1000ml，并分装入四个250ml的锥形瓶中，分别加入葡萄糖5g，麦芽糖5g，乳糖5g，蔗糖5g，用牛皮纸橡皮经包好，准备杀菌温度培养基的配置：将预先准备好的土豆洗干净并去皮，在天平上称取200g，切成薄片放入1000ml烧杯中，并加水至600ml，放于加热器上加热，在煮的过程中（要时刻注意搅拌，人不可离开，以免受热不均爆沸炸裂烧杯和加热器发生意外），待土豆到熟而不烂的程度时，停止加热，四层纱布过滤，加入适量水继续加热，在加热的过程中放入，葡萄糖20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1g，VB0.11g，琼脂20g，蛋白胨15g，待各试剂彻底溶解，加水定容至1000ml，引流至1000ml锥形瓶中，用牛皮纸橡皮经包好，准备杀菌PH培养基的配置：将预先准备好的土豆洗干净并去皮，在天平上称取200g，切成薄片放入1000ml烧杯中，并加水至600ml，放于加热器上加热，在煮的过程中（要时刻注意搅拌，人不可离开，以免受热不均爆沸炸裂烧杯和加热器发生意外），待土豆到熟而不烂的程度时，停止加热，四层纱布过滤，加入适量水继续加热，在加热的过程中放入，葡萄糖20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1g，VB0.11g，琼脂20g，蛋白胨15g，待各试剂彻底溶解，加水定容至1000ml，平分为四分倒入250ml锥形瓶中，用盐酸，氢氧化钠调节PH；5.5、5.9、6.5、7.0，用牛皮纸橡皮经包好，准备杀菌 矿质元素培养基的配置：将预先准备好的土豆洗干净并去皮，在天平上称取200g，切成薄片放入1000ml烧杯中，并加水至600ml，放于加热器上加热，在煮的过程中（要时刻注意搅拌，人不可离开，以免受热不均爆沸炸裂烧杯和加热器发生意外），待土豆到熟而不烂的程度时，停止加热，四层纱布过滤，加入适量水继续加热，在加热的过程中放入，葡萄糖20g，VB0.11g，琼脂20g，蛋白胨15g，待各试剂彻底溶解，加水定容至1000ml，平分为四分倒入250ml锥形瓶中，其中三个锥形瓶中分别放入矿2磷酸二氢钾0.75g和硫酸钙0.283g，矿3磷酸二氢钠0.66g和硫酸镁0.25g，用牛皮纸橡皮经包好，准备杀菌