毕业设计（论文）测定牛奶中邻苯二甲酸酯类增塑剂的气相色谱法研究.doc

毕业设计（论文）类 型：毕业设计说明书 毕业论文题 目：测定牛奶中邻苯二甲酸酯类增塑剂的气相色谱法研究指导教师：学生姓名：专 业：精细化学品生产技术班 级：精化111学 号：时 间：2014年3月南通职业大学2014届毕业设计（论文）任务书学生姓名所学专业精细化学品生产技术班 级精化111课题名称测定牛奶中邻苯二甲酸酯类增塑剂的气相色谱法研究工作内容（应完成的设计内容、论文内容）1.文献检索、资料研读；2.实验方案设计，包括实验流程、实验配方与工艺条件、分析检测方法、实验仪器设备等； 3.实验准备，实验原料的订购和仪器设备的安装调试4.探讨检测方法，分析检测的影响因素；5.撰写论文，对实验结果进行必要的理论分析。工作要求（设计应达到的性能、指标，论文质量要求）1. 正确分析各检验分析方法的优劣势，选择切实可行的检测方法，操作简单、易于一般检测机构检验。2. 所得实验数据要真实可信，正确处理实验数据，检测结果精确，对实验结果进行正确分析，以分析结果为依据得出结论。3. 论文格式规范、语言精练、结构合理，论文观点正确且有理论依据。主要参考资料1 毛娜. 增塑剂的发展及应用J. 广州化工,2013,(16):35-37.2 甘晓. 低毒大危害的塑化剂J. 今日民航,2012,(12):116.3 中华人民共和国机械行业标准. 气相色谱用火焰离子化检测器.试验方法S. JB/T 9361-1999.4 中华人民共和国国家标准. 食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准S.GB 9685-2008.工作进度要求13年10月22日11月20日 列出论文大纲，查阅相关资料13年11月21日14年2月25日 文献整理、资料整合、实验实施14年2月26日3月10日 撰写论文，递交论文初稿（电子版）14年3月11日3月24日 修改论文，定稿（打印稿）14年3月26日3月29日 准备论文答辩课题组其他成员许 鹏指导教师（签名）教研室主任（签名）部门批准（盖章）签发日期2013.10.22注：本任务书一式三份，由指导教师填写，教研室主任审核，系部批准后下发；学生、指导教师、系部各一份。测定牛奶中邻苯二甲酸酯类增塑剂的气相色谱法研究摘 要本文选定了6种邻苯二甲酸酯类增塑剂(简称PAEs)作为研究对象，使用气相色谱仪，经过大量的实验，研究了气相色谱对邻苯二甲酸酯类的检测条件，建立了同时测定这6种化合物的分析方法。检测市售牛奶产品中邻苯二甲酸酯类化合物的含量，并研究了牛奶中PAEs提取方式与提取温度对检测结果的影响，建立了测定牛奶中PAEs的分析方法。本方法具有灵敏度高、检出限低等特点，能够较好地检测牛奶中微量PAEs化合物的含量。关键词：邻苯二甲酸酯类、气相色谱法、牛奶Research gas chromatography Milk - Determination of phthalate plasticizersABSTRACTThis paper selected six kinds of phthalate plasticizers (referred PAEs) as the research object, using gas chromatography, after a lot of experiments to study the gas chromatography phthalates testing conditions, the establishment of a Simultaneous determination analysis of these six compounds. Detection commercial milk products phthalic acid esters of content, and the effects of milk PAEs extraction methods and extraction temperature on the test results, the establishment of analytical methods for determination of PAEs in milk. This method has high sensitivity, and low detection limit, better able to detect trace levels of milk PAEs compounds.Key word: Phthalates,Gas chromatography,Milk目 录摘 要IABSTRACTII1 绪论11.1 增塑剂概述11.2 邻苯二甲酸酯类的性质11.3邻苯二甲酸酯类的毒性以及对人群健康的危害11.4 牛奶中的邻苯二甲酸酯类增塑剂的迁移21.5 课题的意义和创新点32 牛奶中邻苯二甲酸酯类化合物分析方法的实验设计42.1 实验试剂与实验仪器42.2 邻苯二甲酸酯类标准溶液的配制52.3 气相色谱工作条件的确定52.4 定性分析112.5 标准曲线113 牛奶预处理方法的确定及测定153.1 预处理方法的确定153.2 定量分析174 结论19参考文献20致 谢221 绪论1.1增塑剂概述增塑剂（Plasticizers），也叫塑化剂、可塑剂，是一种增加材料的柔软性或使材料液化的添加剂，其添加对象包含了塑胶、混凝土、水泥与石膏等等。同一种塑化剂常常使用在不同的物质中，但其产生的效果往往并不相同。塑化剂种类多达百余种，但使用得最普遍的就是一群称为邻苯二甲酸酯类的化合物1。1.2 邻苯二甲酸酯类的性质邻苯二甲酸酯（phthalic acid ester， PAEs）是邻苯二甲酸化合物的衍生物，也称肽酸酯，它一般为无色透明的液体，难容于水，易容于有机溶剂甲醇、乙醇、乙醚，难挥发，具有高脂溶性，属于中等极性物质6。表1-1显示了几种常见邻苯二甲酸酯类化合物的物理性质。表1-1常见邻苯二甲酸酯类化合物的物理性质化合物水中溶解度mg/L蒸汽压Vp(Pa)比重（20）沸点（）熔点（）邻苯二甲酸二甲酯（DMP）40000.221.1922845.5邻苯二甲酸二乙酯（DEP）10800.221.118298-40邻苯二甲酸二丁酯（DBP）11.29.73×10-31.042340-35邻苯二甲酸二戊酯（DAP）6-342-55邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）0.1359.47×10-50.986384-47邻苯二甲酸二正辛酯（DnOP）32.53×10-20.978340-251. 3邻苯二甲酸酯类的毒性以及对人群健康的危害由于塑料制品的大量使用，导致邻苯二甲酸酯类的污染加剧。邻苯二甲酸酯类的化合物都是具有毒性的，虽然毒性大小不同，但是已被禁用的含有邻苯二甲酸酯类的品种，在国外被确认为具有“三致”作用在中国还在使用7。在研究有机污染物的环境行为中发现，邻苯二甲酸酯类化合物的光解速率与水解速率十分缓慢，并且通过生物链的传递产生富集，让生物遭受了非常大的危害8。邻苯二甲酸酯类对人体的影响机理目前还是不太明确，对人类机体的作用方式可以分为两种： 直接进入细胞内使细胞核的酶系统或核酸发生主要作用，引发人体遗传基因变异9，但最新的研究表明：直接进入的方式发生的几率很低； 作用在人体细胞外，例如：细胞膜上的授体与相应的授体（即邻苯二甲酸酯类化合物）结合从而使细胞壁上的某一生化过程受到启动或抑制，引起人体的新陈代谢紊乱。邻苯二甲酸酯类还能通过植物、动物等食物进入人体，产生富集残留，母体中残留的浓度能比别人的残留的浓度增加数十倍，通过胎盘传递给胎儿。邻苯二甲酸酯类化合物还具有亲酯性，如果进入人体很快便能在人体的脂肪里积累，不容易被排出去，给我们人体造成很大的伤害10。增塑剂也可使动物的肝肾功能下降，具有严重致癌性。通过动物的胎盘毒性的研究，科学家们还发现邻苯二甲酸酯物质，还能使动物胎盘的畸形、心脏变形等一系列非常严重的后果。邻苯二甲酸酯类对动物的生化效应具体表现为：主细胞的毒性增加，过氧化酶急剧增加，对多种动物的整体反应表现为：肝癌、睾丸萎缩、尿道破裂、细胞增加。邻苯二甲酸酯类对生物的正常行为具有“三致作用” 、干扰内分泌作用，直接影响动物和人类培养下一代11。美国国家毒理策划署在1982年经过实验表明，证实了老鼠能通过长期的吸收含有酞酸二异辛酯食物而引起肝癌12。随着塑料包装制品的大量使用，邻苯二甲酸酯类化合物在食品中的污染也更加严重。这些物质随着物质的迁移有塑料中转移到牛奶液体中，液体经过人体吸收后，增塑剂转移到人的体内，由于增塑剂有毒性、富集性而且很难排出体外，所以会伤害人的身体健康。1.4 牛奶中的邻苯二甲酸酯类增塑剂的迁移邻苯二甲酸酯类化合物作为商品使用物质约有10种，特别是在食品行业，塑料制品运用的越来越广泛。例如：牛奶中的包装以及生产中都用到了塑料，而邻苯二甲酸酯类物质具有积累性，容易通过塑料制品迁移到牛奶中，液体经过人体吸收后，增塑剂转移到人的体内，由于增塑剂有毒性、富集性而且很难排出体外，所以会伤害人的身体健康。1.5 课题的意义和创新点2011年5月，在台湾岛内第一次发现不良厂商因为节省成本在食品中添加物“起云剂”，违法添加有毒塑化剂邻苯二甲酸二(2乙基已基)酯 (DEHP)，供应给多家牛奶制品厂16。经追踪调查发现有九种牛奶遭污染，现在全台湾至少有59万瓶有毒饮品流入到市面。同时还爆出市面上有大约200 公斤的糖果受到了 有毒“塑化剂”的污染。“悦 氏”运动牛奶、粒粒柠檬果汁等9种产品确认遭波及。目前关于牛奶中的邻苯二甲酸酯类混合物检测方面的期刊报道不多，本文对南通职业大学周围流动量较大的各类牛奶进行检测，检测仪器采用单位使用频率较高的气相色谱仪，建立系统的分析检测方法，使其能适用于一般机构对牛奶进行检测和监控17。在食品安全检测中，检测率较高的是邻苯二甲酸二戊酯（DAP）、邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、邻苯二甲酸二乙酯（DEP）、邻苯二甲酸二甲酯（DMP）、邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）18、邻苯二甲酸二正辛酯（DnOP）等6种化合物。因此本文对这六种邻苯二甲酸酯类化合物进行系统性研究，建立分析6种化合物气相色谱法的分析方法。通过对各种牛奶的实际检测，了解国内牛奶的邻苯二甲酸酯的污染情况。2 牛奶中邻苯二甲酸酯类化合物分析方法的实验设计2.1 实验试剂与实验仪器2.1.1 实验试剂本实验所用主要试剂如表2-1所示。表2-1 主要试剂一览表项目规格生产厂家邻苯二甲酸二甲酯（DMP）分析纯国药集团化学试剂有限公司邻苯二甲酸二乙酯（DEP）分析纯国药集团化学试剂有限公司邻苯二甲酸二丁酯（DBP）分析纯国药集团化学试剂有限公司邻苯二甲酸二戊酯（DAP）分析纯国药集团化学试剂有限公司邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）分析纯国药集团化学试剂有限公司邻苯二甲酸二正辛酯（DnOP）分析纯国药集团化学试剂有限公司甲醇色谱级深圳市科天化玻仪器有限公司正己烷分析纯江苏强盛化工有限公司氯化钠分析纯江苏强盛化工有限公司铬酸钾化学纯江苏强盛化工有限公司浓硫酸化学纯江苏强盛化工有限公司无水硫酸钠分析纯江苏强盛化工有限公司丙酮分析纯江苏强盛化工有限公司硅藻土分析纯江苏强盛化工有限公司2.1.2实验仪器 本实验所用主要仪器及设备如表2-2所示。表2-2 主要仪器及设备名称型号或规格生产厂家气相色谱仪SP-6890鲁南瑞红化工仪器有限公司SE-30毛细管色谱柱（30m×0.32mm×0.5m）月旭材料科技（上海）有限公司微量进样器1L上海佳安分析仪器厂高压钢气瓶高纯气江苏民生特种设备集团有限公司分析天平0.0001g北京西杰天平仪器有限公司续表2-2 名称型号或规格生产厂家容量瓶50 mL泰兴市新泰玻璃制品厂烧杯1000 mL泰兴市新泰玻璃制品厂量筒50 mL泰兴市新泰玻璃制品厂锥形瓶250 mL泰兴市新泰玻璃制品厂移液管25 mL泰兴市新泰玻璃制品厂为防止实验室内空气中邻苯二甲酸酯类的化合物的污染，实验所使用的玻璃仪器都必须洗干净。洗涤方法：为降低空白值，将各种玻璃器具先由铬酸洗液中浸泡几个小时，用蒸馏水洗净后，再由丙酮清洗后放在烘箱里，100烘2小时。带刻度的量具直接用电吹风吹干，不能直接烘烤。2.2 邻苯二甲酸酯类标准溶液的配制标准混合储备液配制步骤：称取邻苯二甲酸二甲酯(DMP) 0.0846 g（精确到0.0001g，下同）、邻苯二甲酸二乙酯(DEP) 0.0810 g、邻苯二甲酸二丁酯(DBP) 0.0967 g、邻苯二甲酸二正戊酯(DAP) 0.0857 g、邻苯二甲酸二(2一乙基己基）酯(DEHP) 0.0871 g，邻苯二甲酸二正辛酯(DnOP) 0.0854 g于100 mL容量瓶中，加色谱级甲醇稀释至刻度。摇匀，配制成含量分别为846、810、967、857、871、854 mg/L的邻苯二甲酸酯类混合液，放于冰箱中备用。将上述混合标准储备液逐级稀释，用色谱级甲醇定容到100 mL容量瓶中，配制成一系列浓度的混合标准溶液，其浓度大约约为0.5、1、2、5、10、20、50、100、200mg/L。2.3 气相色谱工作条件的确定2.3.1 气相色谱的检测器的选择气相色谱法常用的检测器有电子捕获检测器(ECD)与氢火焰离子化检测器(FID)分析化合物。氢火焰离子化检测器的优点是其为准能用型检测器，死体积小、灵敏度高、线性范围宽、响应快等优点，而且其对压力与温度的变化不敏感。电子捕获检测器对含N、 S卤素等强电负性的组分检测灵敏度高是其优点，但线性范围较窄19。因此，本实验气相色谱仪的检测器选用氢火焰离子化检测器(FID)。2.3.2 气相色谱的气化室温度的选择邻苯二甲酸酯类化合物的沸点比较高，因此气化室的温度过低则对样品的气化不利。实验考查了气化室温度分别为260、280、300、320、340、360、380时，浓度为1000mg/L邻苯二甲酸酯类混合物混合标样的峰面积变化情况(其分离色谱图如图2-1所示)。图2-1 不同气化室温度下混合标样的色谱分离图图2-2 不同气化室温度下标准样品峰面积数值的变化趋势图气化室温度不同，由图2-1和图2-2可知，邻苯二甲酸酯类混合物标样的峰面积也不一样的，随着气化室温度升高，标样的气化效率变大，因此，其峰面积也是随之增大，但当气化室温度约为340时，过高的气化室温度会导致样品的分流量过大，从而使得进入毛细管柱的 邻苯二甲酸酯类混合物标样的量减小。因此，实验选择气化室温度为340。2.3.3 气相色谱的检测器温度的选择氢火焰离子化检测器的温度较低时，它的灵敏度与检测器温度无关。实验考查了180、200、220、240、260、280时，浓度为500mg/Kg 邻苯二甲酸酯类混合物混合标样的峰面积出峰情况（图2-3为分离色谱图）。图2-3 不同检测温度下混合标样的色谱分离图图2-4 不同检测温度各邻苯二甲酸酯混合标准峰面积数值的变化趋势图由图2-4可知，检测器温度的升高，混合标样的峰面积的总体变化趋势是越来越小。检测器温度为200 时，混合标样的峰面积最大，所以实验选择检测器温度为200 。2.3.4 气相色谱法最终条件确定方法的最终检测条件为：色谱柱：SE-30毛细管色谱柱(30m×0.32mm×0.5m)气化室温度：340;柱温：280;检测器：氢火焰离子化检测器，温度：200 ；载气：氮气，纯度99.9%;流量，大约1 mL/min空气：纯度99.9%，流量约为300mL/min;氢气：纯度99.9%，流量约为30mL/min;氢气空气流量比约为10:1;进样量:1L。2.3.5 检测器性能指标2.3.5.1 检测器性的灵敏度气相色谱检测器的灵敏度（S）是指通过检测器物质的量变化时，该物质响应值的变化率20。计算公式为： （2.1）式中： A为检测物的峰面积，单位为mV*s；M为检测物的进样量，单位为mg； S为灵敏度，单位为V*s/g。以浓度约为10mg/L的6种邻苯二甲酸酯类混合物混合标样进样1L分析，得到各物质的峰面积，并计算出物质的对应的灵敏度，如表2-3所示。表2-3 检测器的灵敏度计算表项目邻苯二甲酸二甲酯（DMP）邻苯二甲酸二乙酯（DEP）邻苯二甲酸二丁酯（DBP）邻苯二甲酸二戊酯（DAP）邻苯二甲酸（2 -乙基己基）酯（DEHP）邻苯二甲酸二正辛酯（DnOP）峰面积（mV*s）3.033.335.435.5712.55.35标样浓度（mg/L）8.468.109.678.578.718.54进样量（mg）8.46×10-68.10×10-69.67×10-68.57×10-68.71×10-68.54×10-6灵敏度（V*s/g）3.55×1054.08×1055.61×1056.51×1051.45×1066.21×105由表2-3可以看出，方法对邻苯二甲酸二（2 - 乙基己基）酯（DEHP）的灵敏度最高；而邻苯二甲酸二乙酯（DEP）、邻苯二甲酸二丁酯（DMP）、邻苯二甲酸二正辛烷（DnOP），在6.0×105V*s/g左右；而邻苯二甲酸二乙酯（DEP）与邻苯二甲酸（DMP）的灵敏度相对较小，在4.0×105V*s/g左右。2.3.5.2 检出限检出限D，亦称敏感度，通常是指将产生两倍噪声信号时，单位体积的载气或单位时间内进入检测器的组分量20。计算公式为： （2.2）式中：D为检出限，单位为g/s； N为仪器噪声，单位为V；S为检测器性的灵敏度，单位为V.s/g。将浓度约10 mg/L的六种邻苯二甲酸酯类混合物混合标样按2.3.4的气相色谱条件进样1L分析,得到各自的峰面积，计算物质的对应的检出限，如表2-4所示。表2-4 检测器的检出限计算表项目邻苯二甲酸二甲酯（DMP）邻苯二甲酸二乙酯（DEP）邻苯二甲酸二丁酯（DBP）邻苯二甲酸二戊酯（DAP）邻苯二甲酸（2-乙基己基）酯（DEHP）邻苯二甲酸二正辛酯（DnOP）噪声（mV）0.050.050.050.050.050.5灵敏度（V*s/g）3.55×1054.08×1055.61×1056.51×1051.45×1066.21×105检出限（ng/s)0.2820.2450.1780.1530.0690.161表2-4可以看出方法对邻苯二甲酸二（2 - 乙基己基）酯（DEHP）的检出限最低；其次是邻苯二甲酸二戊酯（DAP）、邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、邻苯二甲酸二正辛酯（DnOP），在0.15ng/s左右；而邻苯二甲酸二乙酯（DEP）与邻苯二甲酸二甲酯（DMP）的检出限相对较高，在0.25ng/s左右。2.3.5.3 精密度实验先使用浓度约为100mg/L的6种邻苯二甲酸酯类混合物的混合标样测试仪器的精密度。方法是：将浓度约为100mg/L的6种邻苯二甲酸酯类混合物的混合标样按2.3.4的气相色谱条件连续重复测定6次，记录6种邻苯二甲酸酯类混合物标样的峰面积，计算其相对标准偏差，结果见表2-5 。表2-5检测器的精密度计算表项目邻苯二甲酸二甲酯（DMP）邻苯二甲酸二乙酯（DEP）邻苯二甲酸二丁酯（DBP）邻苯二甲酸二戊酯（DAP）邻苯二甲酸（2-乙基己基）酯（DEHP）邻苯二甲酸二正辛酯（DnOP）131561341424012335784612374215223043931022406973545960901418713294563030640523374996082140221429321317264215935731569994269252897829968397583926955947400566296943056441542366956103239998平均值29556.0 31288.0 40800.3 36739.5 59489.5 41165.0 相对标准偏差（）3.464.882.203.953.972.93 由表2-5可以看出，6个物质精密度在2.20%4.88%之间，基本能满足定量分析的要求。2.4 定性分析在上述气相色谱操作条件下，以浓度为约1000mg/Kg的邻苯二甲酸二甲酯（DMP）、邻苯二甲酸二乙酯（DEP）、邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、邻苯二甲酸二戊酯（DAP）、邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）、邻苯二甲酸二正辛酯（DnOP）进样分析，并将各单个标样的色谱分离图与混合标样的色谱分离图作比时，可确定邻苯二甲酸酯类混合物表样的出峰位置，其浓度约为1000mg/L的单个邻苯二甲酸酯类混合物表样（共6种）的色谱分离图定性结果如图2-5所示。图2-5浓度约为1000mg/L邻苯二甲酸酯类混合物表样的色谱分离图2.5 标准曲线将邻苯二甲酸酯类混合标准储备液逐级稀释，用色谱级甲醇定容至50mL，配制成一系列浓度的混合标准操作溶液，其浓度约为1、2、5、10、20、50、100、200mg/L（各标样的准确浓度值如表2-6），并按2.3.4的气相色谱条件分别进样分析（色谱图2-6所示），记录6种邻苯二甲酸酯类化合物标样的峰面积，绘制标准曲线（如图2-7（a）（f）所示）表2-6 各邻苯二甲酸酯类化合物标样的浓度邻苯二甲酸二甲酯（DMP）邻苯二甲酸二乙酯（DEP）邻苯二甲酸二丁酯（DBP）邻苯二甲酸二戊酯（DAP）邻苯二甲酸（2-乙基己基）酯（DEHP）邻苯二甲酸二正辛酯（DnOP）10.422-20.8460.8100.963-0.872-31.681.601.921.711.74-44.224.044.844.314.364.2958.468.139.648.588.748.57616.9816.419.517.317.417.2742.38 40.748.243.143.842.9884.7881.096.4585.887.485.79169160193171176172图2-6 不同浓度的混合标样的色谱分离图 （a） （b） （c） （d） （e） （f） 图2-7 （a）（f）6种邻苯二甲酸酯化合物的标准曲线从图2-7（a）（f）可以看出，6种邻苯二甲酸酯类化合物在具有良好的线性关系，其中邻苯二甲酸二甲酯( DMP )的相关系数达到了4个9；其次是邻苯二甲酸二戊酯( DAP )、邻苯二甲酸二丁酯( DBP )，其相关系数均大于2个9；最差的是邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸二(2一乙基己基)酯(DEHP)和邻苯二甲酸二正辛酯(Dn0P)，其相关系数也达到了2个9。实验混合标准样品与样品的进样体积的进样体积完全一致，以确保对所测样品采用标准曲线法进行定量，然后根据相对应的回归方程计算样品中PAEs各个组分的含量。3 牛奶预处理方法的确定及测定样品来源于南通职大周围各大超市和路边早餐摊点，随机购买不同牛奶产品，放在冰箱中保存，以防止邻苯二甲酸酯类的组分流失，所有样品在七天之内处理，十天之内完成气相色谱分析。3.1 预处理方法的确定3.1.1提取方式的确定 实验分别采用了浸泡、震荡提取方式对牛奶中的PAEs进行了提取。通过提取实验发现：南通职业大学路边早餐摊点的某些杂牌牛奶中PAEs的检测含量较高，是理想的提取实验对象。本实验以购自南通职业大学路边早餐点的杂牌牛奶作为提取实验的代表物，并将提取结果分述如下：3.1.1.1 浸泡法提取准确称取50 g购自路边早餐摊点的杂牌牛奶样品( 3份，称准至0.0001 g )于100 mL具塞三角瓶中，加入20 mL正己烷，浸泡至少12小时。然后用3 mL胶头滴管吸出上层物质，置于250 mL样品瓶中，接着在该具塞三角瓶中再次加入20 mL正己烷，浸泡至少12小时。然后用3 mL胶头滴管吸出上层物质，置于250 mL样品瓶中。如此重复一共操作3次，合并所有的上层油状物于250 mL样品瓶中。在250 mL样品瓶中加入20 mL饱和NaCI溶液反复洗涤，再加入1 g无水硫酸钠，用先铺一层硅藻土载体砂芯漏斗过滤，并用40 mL正己烷分3次充分洗涤砂芯漏斗。按2.3.4的色谱条件下取1L样品溶液进样分析，得到色谱分离图，根据各PAEs峰面积计算对应的含量(如表2.5所示)。3.1.1.2 振荡提取与3.1.1.1实验同样品牌同样批次的牛奶(均购南通职业大学自路边早餐摊点)的振荡提取进行实验。准确称取50 g牛奶样品( 3份，称准至0.0001 g )于100 mL具塞三角瓶中，加入20 mL正己烷，置于水浴用手摇动振荡1小时 ( 设定温度为20 ，接近我们的日常环境温度 )。然后用3mL胶头滴管吸出上层油状物，置于250 mL样品瓶中。接着在该具塞三角瓶中再次加入20 mL正己烷，置于水浴用手摇动振荡1小时。然后用3 mL胶头滴管吸出上层油状物，置于250 mL样品瓶中，共重复3次操作，合并所有的上层油状物于250 mL样品瓶中。在该样品瓶中加入20 mL饱和NaCI溶液洗涤，去除水层，再加入l g无水硫酸钠，用先铺一层硅藻土载体砂芯漏斗过滤，并用40 mL正己烷分3次洗涤砂芯漏斗。按2.3.4的色谱条件下取1L样品溶液进样分析，其色谱分离图PAEs峰面积计算对应的含量(如表3-1所示)。表3-1 不同提取方式下牛奶样品提取效率的PAEs的含量(mg/Kg)提取方式号邻苯二甲酸二甲酯（DMP）邻苯二甲酸二乙酯（DEP）邻苯二甲酸二丁酯（DBP）邻苯二甲酸二戊酯（DAP）邻苯二甲酸（2 - 乙基己基）酯（DEHP）邻苯二甲酸二正辛酯（DnOP）浸泡提取1-0.119-0.113-2-0.106-0.137-3-0.128-0.159-平均-0.118-0.136-相对平均偏差-5.6%-6.6%-振荡提取1-0.124-0.216-2-0.136-0.239-3-0.117-0.224-平均-0.126-0.226-相对平均偏差-3.1%-2.6%-注：- 为未检测出。由表3-1可以看出，振荡提取方式的提取效率最高，浸泡提取效果较差。振荡提取能使样品中的物质与提取试剂更加充分地接触，从而使得牛奶中的PAEs能更有效地进入提取溶剂中。3.1.2 提取温度的选择实验采用了振荡提取方式对牛奶中的PAEs分别进行了提取，选定提取温度分别为15、20、25、30和35。水浴在设定温度分别为15、20、25、30和35下各振荡1h，其余步骤如3.1.1.2。按2.3.4的色谱分离条件下分别取1L样品溶液进样分析，由各个PAEs峰面积计算对应的含量(如图3-1所示)。图3-1采用振荡提取方式不同提取温度下样品中PAEs的含量对比采用振荡提取方式，由图3-1可以看出，提取温度不同，提取效率也不相同。随着提取温度的增加，牛奶样品中的PAEs能更有效地进入提取溶剂相中，PAEs在提取相中提取效率逐渐增大；但温度增大，PAEs在提取相中提取效率却有变小的趋势。因此，本实验选用提取温度为25 。综上所述和查资料表明，本实验牛奶的预处理PAEs的最佳提取方式为振荡提取1 h，提取温度为25 恒温水浴。3.2 定量分析准确称取50g牛奶样品于1个50 mL具塞三角瓶中，加入20mL正己烷试剂，置于25 水浴手摇动振荡1h。然后用3 mL胶头滴管吸出上层清夜，置于250 mL样品瓶中。再在该具塞三角瓶中再加入20 mL正己烷溶剂，置于25 水浴手摇动振荡1h。然后用3mL胶头滴管吸出上层清夜，置于250 mL样品瓶中。共重复3次操作。在上述250 mL样品瓶中加入20 mL饱和NaCl溶液洗涤，去除水层， 再加入1g无水硫酸钠，用砂芯漏斗过滤，并用40 mL提取溶剂分3次洗涤砂芯漏斗。以样品的峰面积与工作曲线进行比较，计算出对应的邻苯二甲酸酯类的化合物的含量。样品中各邻苯二甲酸酯类的化合物组分的含量计算公式如下。 (3-1)式中：X 牛奶样品中某一PAEs的浓度，单位为mg/L；V 样品被定容体积，单位为mL；K 样品稀释总倍数；x 牛奶样品中某一PAEs峰面积对应的浓度，单位为mg/L；0 空白试样中某一PAEs峰面积对应的浓度，单位为mg/L；M 牛奶样品质量，单位 g 。实验测得周围早餐牛奶检测结果数据如表3-2表3-2 学校周围早餐牛奶检测结果(mg/Kg)邻苯二甲酸二甲酯（DMP）邻苯二甲酸二乙酯（DEP）邻苯二甲酸二丁酯（DBP）邻苯二甲酸二戊酯（DAP）邻苯二甲酸（2-乙基己基）酯（DEHP）邻苯二甲酸二正辛酯（DnOP）1-0.110-0.227-2-0.118-0.201-3-0.129-0.238-平均-0.119-0.222-相对平均偏差-1.9%-2.7%-由表3-2对照食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准（GB9685-2008）规定的品种、范围和特定迁移量或残留量，不得接触油脂类食品和婴幼儿食品，食品、食品添加剂中的邻苯二甲酸（2-乙基己基）酯（DEHP）最大残留量为1.5mg/kg21，而欧盟发布新的指令2005/84/EC要求所有玩具及育儿物品中，DEHP、DBP的含量不得超过0.1%，超过的物品不得在欧盟市场出售。儿童可以放入嘴中的玩具以及育儿物品，DNOP 的含量不得超过0.1%。所以牛奶中的增塑剂含量是超标的。4 结论邻苯二甲酸酯类化合物的污染日益加剧，受到全世界各国人民的关注。本文用气相色谱研究了广泛关注的6种PAEs的分析预处理方法进行了研究，对牛奶中6种PAEs的气相色谱法进行分析，并初步对牛奶产品贮存条件研究了对其PAEs含量的影响因素。下面是本文的主要结论:(1) 系统地建立了6种微量PAEs化合物的气相色谱分析方法。气相色谱分法检测条件:色谱柱：SE-30毛细管色谱柱(30m×0.32mm×0.5m )气化室温度：340;柱温：280;检测器：氢火焰离子化检测器(FID)，温度200；载气：氮气，纯度99.9%;流量，约1 mL/min;空气：纯度99.9%，流量约为300mL/min;氢气：纯度99.9%，流量约为30mL/min;氢气空气流量比约为10:1;进样量:1L(2) 牛奶产品中6种PAEs的前处理方法:选用振荡提取法，提取温度为25 ，连续操作提取3次，取上层有机相。并牛奶进行了检测。检测结果发现牛奶产品中PAEs的DEP和DEHP的检出率较大，且检出总量多数超标，表明牛奶产品中PAEs的污染不容乐观。牛奶采用塑料材料进行包装时，各类牛奶中的PAEs可能由纸盒、玻璃瓶等包装材料中的PAEs迁移的。参考文献1 毛娜. 增塑剂的发展及应用J. 广州化工,2013,(16):35-37.2 甘晓. 低毒大危害的塑化剂J. 今日民航,2012,(12):116.3 邴涓林,李承志. 2008年中国PVC产业动态及分析J. 聚氯乙烯,2009,(5):1-14.4 罗河胜编; 塑料工艺与实用配方M.广东科技出版社,2005.01.5 石万聪,盛承祥主编; 增塑剂M.化学工业出版社,1989.12.6 王何萍. 浅谈塑料助剂-增塑剂特点与性质J. 科技情报开发与经济,2009,(04):216-2177 李芝兰,张敬旭主编;常元勋主审. 生殖与发育毒理学M.北京大学出版社,2012.07.8 莫测辉,蔡全英,吴起堂. 我国城市污泥中邻苯二甲酸酯的研究J.中国环境科学,2001,(4):362-366