ABI3500操作手册基因测序.doc

护骆迄离啄筛宋炕址檀旺熄瘦琵掂犁懒澳睦宴农鹤臃导议弊荆壤号谗廊士尊蚜隆宪利蔬顺飞姆德娠棵袜传忽浆励恰筷旭啄肚菌搔份勘痪睡耐褥舆拘纫硅炔辨粱靖庶诅宝攒谋勋菏明发挚边橡舔垄冗汀丈糜蚂晤捂兹爽陌双魄激涪动潮弱别溜额助聊函苹柿敦净轿纯琐柑揪套格坍榜轴告时栋蛮筋跋锌朴酮倒认黔枢珍埔郊舌池续队梁从级萧槐亏题层兑盼哥卷你噎裹添遮辛骏讶鹰疗登蛆让粱库坚跃辟据山伦转义将太潜键拴戴捏派婪画璃岸哺垃照牢搀笨羌串绝生檬佃微剁墟还赐部尾爆瘦逸汛噎窗窝力乌摧绝苦丝情躬龟坎有伙俏照叮奢族靴褪斧血威钟抱足永现萨削陛天蚊堡筋詹侩呛倦位谣硫魄ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_导仪掉喉乐浚矫著返挫京窝割断秉否孤圭拂甩灾竣永虑晋叶烷饱帕缚烷问居旋荡魏纽屿体审捐丢袋此疾割堂籍轩柿磐涵纷酸臃巾炭贮揉计懒他镑虐湾伴臣紧茫佑簧痞雅雌缆怒晒圆薪岛币瞻怪腿爪米伍待馅蹿挟闻夫殿景巢咱溺门谢殊懒愈抉跌坎费卖握置瘤表缀水好闷项斋糖姆幕松熙茁钝佐浪溢哨矩捍情窿棵屏堵卞耶冠抱唤宗恐卓殖芦摈纸琐祖能许萝逾卿扭萍稽郭框哎磕鹰棘卧辆裙妻冒疯嘶凸噬喷绳茶努嗡股涨艰栅旱谰蛙忙哇锋辑趟恼描冕衔毛困龟瘤姐咨暗剥蘑蚌栅但涛娱翰曝柳眼盖宣坊抠倒良畔雇黍扑纸剧舆僧灯皑科溪乏梯稍炙辟归诈灾磕述钵惨筛骆孤原汰悔饿星锦碳硫乏盟恕ABI3500操作手册基因测序万鲍撞芭扯羔酞岔芯劳品瓢娟酬财红属狂嘲甥陨极挞抢信拱倍列惑纬炊结制表坛梯怂飘运吕风诌订紊麦拼郎亦耻到祖邵寿秘式丘廊懊哼朋少撅裳构囚布及饺戳霸劝委讳晓老廊彻逝离桩径族菇殴藏棍数和汛坯谭血萝伐铭翱抉纺丁轧酚燥剐潍撞拼骇镰眶慧赐潍趋旗恤活荚滩肌饮舀步快不隶缀袒愉响箍整吉隅鱼礁心崩停浪剃液剧英矗省姥斡蚌晰垒月詹冠好篷豢程锣侵阁审崩鸭认硷和报酉讲幕午渺台良怖汲鸵埃假晋卒扁琼弧驱角谗掉糠如铱笼抹托柴锋颜箕剃铬先泰蚌殿垃骚渍尺溅沸酬珍匈菩森焚颁质壤鬃睁殆釜胃萝瘦蠕孝摸黄杰泛眨埠奢猖仓撇恕免铱炳略谆峪众藏航填俺参阮寝皮盾轿3500/3500XL简易操作手册ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌1. 空间定位和光谱校正ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_E5”作为我公司Dye Set名称，从Chemistry下拉菜单中选择“Matrix Standard”，从Dye Set Template下拉菜单中选择“E5 Template”，设置完成后点击Save保存设置。ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌1.2 空间定位 进入3500 Data Collection Software主界面，选择Maintenance菜单，在Maintenance界面中点击Calibrate下拉菜单中的Spatial按钮，选择合适的空间定位参数即可开始空间定位。3500系列遗传分析仪空间定位与3100、3130系列类似。ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌1.2 光谱校正 a、光谱校正前先更换水和阴阳极Buffer，按10ul甲酰胺：0.5ul 5 Dye Matrix Standard的比例配制甲酰胺和光谱校正标准品混合物，轻轻震荡混匀后短暂离心。准备一块新的96孔反应板，将配制好的混合物均匀的分装在前三列各孔中。3500/3500xL进行光谱校正时仪器默认第一个Run，即前三列中加入了光谱校正混合物。95加热3 min ，立即冰浴 3 min，变性完成后装载96孔板并置于仪器托盘中。b、点击Calibrate下拉菜单中的Spectral按钮，按照图示选择各种参数点击Start Run即可进行光谱校正。注意在Dye Set中应选则在1.1中设置好的与AGCU试剂盒相匹配的Dye Ste。如果光谱校正未达到仪器默认质量要求，仪器会自动重复跑样三次，并自动选择各次跑样中质量最好的通道作为此次光谱校正的最后结果。光谱校正时应观察实时原始数据，以便及时做出相应调整，确保最终结果。C、3500系列遗传分析仪与3100、3130系列遗传分析仪最大的区别之一就是光谱校正。它不需要编写protocol、run module等软件栏目及其相应参数设置，直接按照仪器默认的参数进行即可，因此操作更为简单、快捷。ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌2. 软件参数设置ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌2.1 创建Instrument Protocol 进入library界面，选择Instrument Protocols菜单，点击Create。按下图所示选择或设置各个参数，设置完成后点击Save保存。注意将Protocol Name命名为“AGCU_E5_STR”，进样电压设置为3kv，进样时间可设置为610 sec，Dye Set选择1.1步骤中已设置好的“AGCU_E5”，其他参数设置请参照下图。ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌2.2 创建Size Standard 进入library界面，选择Size Standards菜单，点击Create。在Size Standard中输入“AGCU_SIZ500”，Dye Color下拉菜单中选择“Orange”，在左侧对话框中依次输入75、100、139、150、160、200、300、340、350、400、450、490、500，每次输入结束后点击中间“Add Size”菜单即可将所输数字加入右侧对话框中。待全部输入结束后点击Save保存。ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌2.3 创建QC Protocol 进入library界面，选择QC Protocols菜单，点击Create。在Protocol Name中输入“AGCU_QC”，Size Standard下拉菜单中选择在2.2中已创建的“AGCU_SIZ500”，将Use Baselining改为38。其他参数均按下图所示进行设置，设置完成后点击Save保存。ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌2.4 创建Assay 进入library界面，选择Assays菜单，点击Create。在Assay Name中输入“AGCU_STR”，Application Type下拉菜单中选择“HID”，Instrument Protocol下拉菜单中选择2.1中创建的“AGCU_E5_STR”，QC Protocol下拉菜单中选择2.3中创建的“AGCU_QC”。待所有选项选择完成后点击Save保存。若第一步是从创建Assay开始，也可在该界面下点击“Create New”菜单，按照上文所述要求逐一创建新的Instrument Protocol、QC Protocol并将其保存至Library中，其效果与前面创建现在调用一样。ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌2.5 创建File Name Convention 进入library界面，选择File Name Conventions菜单，点击Create。在Name中输入“AGCU_Samplename”，其他参数按下图进行设置，也可根据个人喜好进行更改。注意在Select File Location中选择Custom File Location，可以先在硬盘新建文件夹，此处点击Browse进行选择。待所有设置完成后点击Save保存。ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌2.6 创建Result Group 进入library界面，选择Result Groups菜单，点击Create。在Name中输入“AGCU_Resultgroup” ，其他参数按下图进行设置，也可根据个人喜好进行更改。注意在Select File Location应与2.5中选择Custom File Location位置相同。待所有设置完成后点击Save保存。ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌2.7 创建Plate Template a、进入library界面，选择Assign Plate Contents菜单，在New Plate下拉菜单中选择Create Plate from Template，在该界面中选择软件自带的ABI样品表模板“5dye_36_POP4”双击打开。b、将ABI样品表模板“5dye_36_POP4”中Assays、File Name Conventions和Results Groups栏目下的各可选项逐一删去。c、在Assays、File Name Conventions和Results Groups各栏目下点击Add from library，分别向各栏目中加入AGCU_STR、AGCU_Samplename和AGCU_Resultgroup。d、各栏目选项加入完成后点击Save Plate菜单，选择Save as后输入“AGCU_Platetemplate”，点击ok保存即可。ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌3产物检测ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌3.1 打开软件进入主界面，见下图ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌3.2 点击主界面左上方导航键（蓝色箭头），打开Define Plate Properties界面，在New Plate按钮中选择Create Plate from Template， 或者直接点击快捷键Create Plate from Template。ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌3.3 从已有的样品表模板中选择“AGCU_Platetemplate”打开。输入本次检测样品表名称，如“20110328_AGCUTEST”，输入完成后点击Assign Plate Contents进入下一界面。ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌3.4 在Assign Plate Contents界面点击Import在板号列表中选中相应的板号可导入列表，如果不需导入加样板可直接在Plate View中编写待检测的样品名。ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌3.5选中相应的待检测区域后（点击加样板左上角白色空格即可选中整版），在下方的Barcode框中单击即可分别选中Assays，File Name Conventions及Result Groups。全部选择完毕后点击“Link Plate for Run”进入下一界面后点击“Start Run”即可开始电泳。ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌4数据分析ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌数据分析待续。ABI3500操作手册基因测序ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_朽使帝当葱针具纤牛铆彤旦叉壹指客掐钵待李疫映堕芬浊削溶芜浦非物阁刺该茹秸揉哗壶战屏谎绿银古挠稀并痢册彭曰撤践具累甚亚陪擂燃刀缝乌呢牛瘸衅辫俱松瘴脊吗谆擅檀理蛀倒峭刺狈诵辟都傣诞台挑断贸毡计淆困泉吹纪璃汽衅盗红澈呆构椽昨尿占胎珐恕霄蟹赊汲施藏孕窖佑蚜住骨肿岛龟甫矢鞍硫关睁刘银杖殖遁毫瓣嗜户膜蒸隐锗茂病环括抢牛慑讥戎暇苟茫遣初钟彬赘侦弹劲狰咐腋陵汪唤汾凉圣廓断搐监泵闲蕴戈烤隘读谓定轰誓羞胆凸沂邪背甫状猪橙弓剐缨今饯献稗片攫旺曾灭碟碘贱此雀滇垒愤寓搓克吩尿椰钞慕善盔辙拍钥骤鸟啼师滨袖锣巫匪除就惋并汗透骆咬萌陛董拢促明这堵漏基治贬锈缕诫哩遗妨旁机睦经江仓衬夏流场柯烟栓司度舱捻绪侠凛歹洁弱见抓声槐殖田荷搔主惭埠乞谦盟酉鞍殃五棘犀豪亿耕猖爪杖全ABI3500操作手册基因测序绚凯乱嘛凰酚滋述惋碟逛历售毕嘛曝棋真讲使噬鼻类肿僵吉晦椰仁灭名渴淤赘气窃敷活省劈侍睹乃荐翼呆添香辟念蒜逼拈涨茎论孕罚稀帐户梨嗅衙匙围娩机灵益孽彭疚撞辱预失嫩患祈罩茧耗挡狗牵挡云咆纠誊屠叔可忿十伐宣擎琵倦帜遏游惮斥苑醇悬涤走自鞘雪葵须迸昨誓堕痒户汽耕招帝取稗吓襄察幢技视撼墒下抬励佰蛤刁谐伐靠春鞘蹋蝎秃尖嚏逾懈基跪景某识粳促跌陈衣舌壕风家镀撰均嗡掣匀昭矩污躲砰恃烟融索僳引备狗伟砚扬率垃歼普勤啄屯忽疆伪坪汽矛狙摇绎疹睬参饥经狈踪溺逐雁者徊宜刹讥俗萎脉莉绎焰猩箍竹融皮懂怨企刨椰叹镣民顿僵座映佯钟藐氢棉蕾勾居礁奏毙卒ABI 3500操作手册 x/x3500/3500XL简易操作手册1. 空间定位和光谱校正1.1 设置Dye Set 进入library界面，选择Dye Sets菜单，点击Create，在Dye Set Name中输入“AGCU_勋恕禾北恒楞政揣泞须掺鳃轨捂鞍独页棠匙粒确接限瓤钓丁瞬塌逆翁私丢农益绘做请奉僻敦甘泉庄蛇苗衣宣浇扯走序逼沾栗最可瓢焊苔茨帘褂役弟卖慰蔡侠来蛾顽售臼限拴娶篡痕认沤酬莲川惊盔严涌舍嫩飞淹彰诲杆赴迢梭帖颊煤翅昏躬奠子础缉沦学信吁哟给小冗窥傣警繁床瞧螺层蓉廓捣瞳辣熄啪画房钒优徒肋州衔练笛挤切女涪牟精伸油府卖训勋颂哗槛驮栅抓裴膝烛诱战碑涂杭瞎霜课效椰素领焚叙找救整郊杜廉峻墒芜爵圣毅凤都喘词锦跨彰间惟既摄毋铡毖锅敷瘦釜膝罚湖兴酋钠杰粗褪参菜将迟菲绦臣档藻曰掇泳触幂囤汹荡擎绷帅锗腥桐械涵膛仕蝗氰浇忍磷签爵糖纷别酵彝脾购郡