药物检测分析技术课件.ppt

维生素类药物的鉴别,一、教学目标,目的：掌握采用化学方法鉴别药物的基本操作 掌握典型维生素类药物的结构特点、性质、分析方法 良好的记录实验现象及数据的习惯内容：观察维生素类药物的鉴别反应现象，理解结构和发生化学反应的关系 维生素B1、C、A、E的结构特点、性质、分析方法,二、实训内容,操作：,（一）维生素B1(Thiamine Hydrochloride)1.结构特点：,三、维生素类药物,氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱),（一）维生素B1(Thiamine Hydrochloride)2.化学性质：硫色素反应：特征反应紫外吸收：不饱和结构、共轭结构溶解性：水溶性与生物碱沉淀试剂反应：含N原子氯化物特性：盐酸盐,三、维生素类药物,三、维生素类药物,（一）维生素B1(Thiamine Hydrochloride)3.分析方法：性状 吸收系数 246nm下测定吸光度，吸收系数为406436鉴别 硫色素反应 氯化物反应含量测定 非水溶液滴定法,（二）维生素C1.结构特点,三、维生素类药物,烯二醇结构,酸性,酸性,内酯结构,（二）维生素C2.化学性质溶解性：水溶性酸性：烯二醇结构旋光性：手性碳原子还原性：烯二醇,三、维生素类药物,（二）维生素C3.分析方法性状 比旋度+20.5+21.5鉴别 硝酸银反应银（黑色沉淀）2,6-二氯靛酚钠颜色消失含量测定 碘量法,三、维生素类药物,三、维生素类药物,含量测定 取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6问题：（1）何为约、精密称定？（2）为何用新沸过的冷水？（3）为何加稀醋酸？（4）为何要“立即”滴定？（5）如何进行计算？（6）如为注射液，加入丙酮，其作用？,10%,千分之一,除氧气,稳定,防止氧化,人血浆中Vit C浓度的HPLC法测定标准溶液制备：取V C对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加10%偏磷酸稀释至刻度，得维生素C储备液浓度为1mg/ml，置冰箱中2保存，3日内可用。血浆样品预处理：取受试者静脉血，立即置肝素化的离心试管中，3000rpm离心5min；取血浆0.5ml，加入0.5ml 10%偏磷酸溶液，涡旋混合0.5min，离心，分取上清液，置冰箱2贮存，直至测定。稳定性考察：V C在血浆中不稳定，在5%偏磷酸溶液中也难以保持长期稳定，应尽可能缩短药物分离和处理时间。样品测定：每天抽取的血样应当日测定，每天建立一条标准曲线，并随行测定高、中、低浓度的双样本质控样品。,三、维生素类药物,（三）维生素E1.结构特点：合成型或天然型,三、维生素类药物,苯并二氢吡喃醇,Vit E(dl-Tocopheryl Acetate),（三）维生素E2.化学性质：溶解性：脂溶性水解性：酯键氧化性：水解后生育酚紫外吸收：苯并二氢吡喃醇,三、维生素类药物,（三）维生素E3.分析方法：性状 比旋度：不低于+24 吸收系数：284nm下，吸收系数为41.045.0鉴别 硝酸反应生育红（橙红色）检查 生育酚VE水解产物含量测定 气相色谱法,三、维生素类药物,max=284nm,min=254nm,检查 生育酚,三、维生素类药物,取Vit E 0.1g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈滴定液(0.01mol/L)滴定，消耗硫酸铈滴定液(0.01mol/L)不得过1.0ml。现象：亮黄灰紫,含量测定色谱条件：载气N2；固定液硅酮（OV-17）；柱温265；检测器氢火焰离子化检测器(FID)；内标正三十二烷系统适应性实验：n 500；R2（USP：内标十六酸十六醇酯，R1.0）内标液：取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成1.0mg/ml溶液对照液：取VitE对照品约20mg置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取 13l注入GC仪，测定，计算校正因子供试液：取供试品约20mg置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取13l注入GC仪，测定，计算含量。,三、维生素类药物,（四）维生素A1.结构特点,三、维生素类药物,Retinol(Vit A alcohol),VA acetate,全反式，效价最高,（四）维生素A2.化学性质溶解性：脂溶性不稳定性：共轭多烯紫外吸收：共轭多烯与三氯化锑呈色,三、维生素类药物,（四）维生素A3.分析方法鉴别 三氯化锑反应：含量测定 三点校正法,三、维生素类药物,Vit A 含量表示效价(I.U./g),三、维生素类药物,A,nm,Vit A sample,pure VA acetate,impurities,测定原理,杂质的吸收在310 340 nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；物质对光的吸收具有加和性,维生素类药物的鉴别,一、教学目标,目的：掌握采用化学方法鉴别药物的基本操作 掌握典型维生素类药物的结构特点、性质、分析方法 良好的记录实验现象及数据的习惯内容：观察维生素类药物的鉴别反应现象，理解结构和发生化学反应的关系 维生素B1、C、A、E的结构特点、性质、分析方法,二、实训内容,操作：,（一）维生素B1(Thiamine Hydrochloride)1.结构特点：,三、维生素类药物,氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱),（一）维生素B1(Thiamine Hydrochloride)2.化学性质：硫色素反应：特征反应紫外吸收：不饱和结构、共轭结构溶解性：水溶性与生物碱沉淀试剂反应：含N原子氯化物特性：盐酸盐,三、维生素类药物,三、维生素类药物,（一）维生素B1(Thiamine Hydrochloride)3.分析方法：性状 吸收系数 246nm下测定吸光度，吸收系数为406436鉴别 硫色素反应 氯化物反应 红外光谱图含量测定 非水溶液滴定法,（二）维生素C1.结构特点,三、维生素类药物,烯二醇结构,酸性,酸性,内酯结构,（二）维生素C2.化学性质溶解性：水溶性酸性：烯二醇结构旋光性：手性碳原子还原性：烯二醇,三、维生素类药物,（二）维生素C3.分析方法性状 熔点 比旋度+20.5+21.5鉴别 硝酸银反应银（黑色沉淀）2,6-二氯靛酚钠颜色消失含量测定 碘量法,三、维生素类药物,三、维生素类药物,含量测定 取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6问题：（1）何为约、精密称定？（2）为何用新沸过的冷水？（3）为何加稀醋酸？（4）为何要“立即”滴定？（5）如何进行计算？（6）如为注射液，加入丙酮，其作用？,10%,千分之一,除氧气,稳定,防止氧化,三、维生素类药物,人血浆中Vit C浓度的HPLC法测定标准溶液制备：取V C对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加10%偏磷酸稀释至刻度，得维生素C储备液浓度为1mg/ml，置冰箱中2保存，3日内可用。血浆样品预处理：取受试者静脉血，立即置肝素化的离心试管中，3000rpm离心5min；取血浆0.5ml，加入0.5ml 10%偏磷酸溶液，涡旋混合0.5min，离心，分取上清液，置冰箱2贮存，直至测定。稳定性考察：V C在血浆中不稳定，在5%偏磷酸溶液中也难以保持长期稳定，应尽可能缩短药物分离和处理时间。样品测定：每天抽取的血样应当日测定，每天建立一条标准曲线，并随行测定高、中、低浓度的双样本质控样品。,三、维生素类药物,（三）维生素E1.结构特点：合成型或天然型,三、维生素类药物,苯并二氢吡喃醇,Vit E(dl-Tocopheryl Acetate),（三）维生素E2.化学性质：溶解性：脂溶性水解性：酯键氧化性：水解后生育酚紫外吸收：苯并二氢吡喃醇,三、维生素类药物,（三）维生素E3.分析方法：性状 比旋度：不低于+24 折光率 吸收系数：284nm下，吸收系数为41.045.0鉴别 硝酸反应生育红（橙红色）红外光谱 HPLC检查 生育酚VE水解产物 有关物质含量测定 气相色谱法,三、维生素类药物,max=284nm,min=254nm,检查 生育酚,三、维生素类药物,取Vit E 0.1g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈滴定液(0.01mol/L)滴定，消耗硫酸铈滴定液(0.01mol/L)不得过1.0ml。现象：亮黄灰紫,含量测定色谱条件：载气N2；固定液硅酮（OV-17）；柱温265；检测器氢火焰离子化检测器(FID)；内标正三十二烷系统适应性实验：n 500；R2（USP：内标十六酸十六醇酯，R1.0）内标液：取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成1.0mg/ml溶液对照液：取VitE对照品约20mg置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取 13l注入GC仪，测定，计算校正因子供试液：取供试品约20mg置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取13l注入GC仪，测定，计算含量。,三、维生素类药物,（四）维生素A1.结构特点,三、维生素类药物,Retinol(Vit A alcohol),VA acetate,全反式，效价最高,（四）维生素A2.化学性质溶解性：脂溶性不稳定性：共轭多烯紫外吸收：共轭多烯与三氯化锑呈色,三、维生素类药物,（四）维生素A3.分析方法鉴别 三氯化锑反应：含量测定 三点校正法,三、维生素类药物,Vit A 含量表示效价(I.U./g),三、维生素类药物,A,nm,Vit A sample,pure VA acetate,impurities,测定原理,杂质的吸收在310 340 nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；物质对光的吸收具有加和性,巴比妥类药物的鉴别,一、教学目标,目的：掌握采用化学方法鉴别药物的基本操作 掌握典型巴比妥类药物的结构特点、性质、分析方法 良好的记录实验现象及数据的习惯内容：观察苯巴比妥的鉴别反应现象，理解结构和发生化学反应的关系 巴比妥类药物的结构特点、性质、分析方法,二、实训内容,操作：,（一）结构特点,三、巴比妥类药物,环状丙二酰脲类化合物,三、巴比妥类药物,（二）代表药物,(Phenylbarbital),(barbital),三、巴比妥类药物,(Secobarbital),戊巴比妥,(Pentobarbital),三、巴比妥类药物,（三）化学性质1.与金属离子反应a.与银盐反应,三、巴比妥类药物,白色难溶性二银盐,可溶性一银盐,三、巴比妥类药物,（三）化学性质1.与金属离子反应b.与铜盐反应,巴比妥类铜吡啶,显色,巴比妥类紫色或紫色沉淀,硫巴比妥类绿色,三、巴比妥类药物,水,吡啶,部分离子化,有色配位化合物,三、巴比妥类药物,（三）化学性质1.与金属离子反应c.与钴盐反应 巴比妥类药物+钴盐 紫堇色,碱性,Co(NO3)2、CoO、Co(Ac)2,异丙胺,无水甲醇或乙醇,三、巴比妥类药物,（三）化学性质1.与金属离子反应d.与汞盐反应巴比妥类药物+汞盐白色（可溶于氨试液）,（三）化学性质2.弱酸性：pKa:7.38.4,三、巴比妥类药物,一级电离,二级电离,烯醇互变,三、巴比妥类药物,三、巴比妥类药物,（三）化学性质3.水解性,巴比妥钠注射液不能预先配制进行加热灭菌，须制成粉针剂，临用时溶解,三、巴比妥类药物,（三）化学性质4.紫外吸收光谱特征,240nm,255nm,A.H2SO4液(0.05mol/L,未电离)B.pH9.9缓冲液(一级电离)C.pH13NaOH液(1mol/L,二级电离),1,5,5-三取代巴比妥类药物不存在二级电离，最大吸收波长不变。,（三）化学性质4.紫外吸收光谱特征,三、巴比妥类药物,硫代巴比妥的紫外吸收光谱A.HCl液(0.1mol/L)B.NaOH液(0.1mol/L),三、巴比妥类药物,（三）化学性质5.显微结晶,（四）分析方法1.鉴别（1）一般鉴别方法丙二酰脲类a.银盐反应b.铜盐反应（2）特殊鉴别反应a.测定熔点b.特殊取代基,三、巴比妥类药物,（四）分析方法用不饱和取代基的鉴别试验(司可巴比妥钠),三、巴比妥类药物,I2,褪色,Br2,KMnO4,（四）分析方法利用芳环取代基的鉴别试验(苯巴比妥钠)a.硝化反应b.硫酸-亚硝酸钠反应：区分苯巴比妥与不含芳环取代的巴比妥类药物c.甲醛-硫酸反应,三、巴比妥类药物,（四）分析方法硫元素反应(硫代巴比妥类),三、巴比妥类药物,（四）分析方法2.杂质检查（1）酸度苯巴比妥检查 取本品0.20g，加水10ml，煮沸搅拌1min，放冷，滤过后，取滤液5ml，加甲基橙指示液1滴，不得显红色（2）乙醇溶液澄清度（3）中性或碱性物质（4）有关物质（5）干燥失重（6）炽灼残渣,三、巴比妥类药物,（四）分析方法3.含量测定（1）银量法(Argentometry)苯巴比妥,三、巴比妥类药物,（四）分析方法3.含量测定（2）溴量法司可巴比妥钠含量测定 取本品约0.1g，精密称定，置250ml碘瓶中，加水10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.1mol/L）25ml，再加盐酸5ml，立即密塞并振摇1min，在暗处静置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml溴滴定液（0.05mol/L）相当于13.01mg的C12H17N2NaO3。,三、巴比妥类药物,何谓？,量具？,为何？,为何？,（四）分析方法3.含量测定（3）紫外分光光度法,三、巴比妥类药物,葡萄糖中氯化物、铁盐的检查,一、教学目标,目的：掌握采用纳氏比色管检查药品中一般杂质操作方法 掌握对照法检查杂质遵循的平行原则 良好的记录实验现象及数据的习惯 踏实认真的工作态度内容：葡萄糖中氯化物、铁盐检查及限量计算 一般杂质检查方法,二、实训内容,操作：氯化物检查,供试品,稀HNO310ml,H2O,AgNO31ml,标准溶液,稀HNO310ml,H2O,AgNO31ml,暗处放置5min(避免AgCl分解),0.6g,6.0ml,观察到？,注：供试品溶液如带颜色，除另有规定外，可取供试品溶液两份，分别置50ml纳氏比色管中，一份中加硝酸银试液1.0ml，摇匀，放置10分钟，如显浑浊，可反复滤过，至滤液完全澄清，再加规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，作为对照溶液，另一份中加硝酸银试液1.0ml与水适量使成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，按上述方法与对照溶液比较，即得。,操作：铁盐检查,二、实训内容,供试品2.0g,显色，立即与同法制成的对照溶液比较,观察到？,注：如供试管与对照管色调不一致时，可分别移至分液漏斗中，各加正丁醇20ml提取，分层后，将正丁醇层移置50ml纳氏比色管中，再用正丁醇稀释至25ml，比较，即得。,思考：平行原则：如何通过操作实现？观察现象：混浊？颜色？如何比较：浊度大小、颜色深浅限量计算：,二、实训内容,生物碱中特殊杂质检查,一、教学目标,目的：掌握采用TLC进行特殊杂质检查操作方法 掌握生物碱类药物的结构特点、性质、分析方法 良好的记录实验现象及数据的习惯 掌握一定娴熟的操作技能内容：氨茶碱中有关物质的检查 生物碱类药物分类、结构特点、性质、分析方法,二、实训内容,操作：,供试品：0.2g+2ml水，溶解，用甲醇稀释至10ml。10l,对照品：1ml供试品用甲醇稀释至200ml。10l,色谱条件：固定相：GF254展开剂：正丁醇-丙酮-三氯甲烷-浓氨溶液（4:3:3:1）显色：254nm,操作,二、实训内容,供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。,供试品,对照品,原理：特殊杂质检查：供试品溶液自身稀释法杂质未知且不可得比较方法：供试品杂质点与对照品主斑点限量计算：,二、实训内容,是什么成分？,三、生物碱类药物,特点含氮碱性化合物没有共同母核多数具有含氮杂环结构，少数氮在侧链上（如麻黄碱）绝大部分存在于植物体内；少数存在于动物体内（如蟾蜍碱）,三、生物碱类药物,三、生物碱类药物,（一）结构与性质1.苯烃胺类,*,弱碱性：烃胺基侧链，仲胺氮弱碱性。游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂；其盐可溶于水,酚羟基特性：邻苯二酚（或苯酚）结构，与金属离子络合呈色；在空气中或遇光、热易氧化，色泽变深；在碱性溶液中更易变色。,光学活性：手性碳原子，具有旋光性,（伪）麻黄碱,秋水仙碱,三、生物碱类药物,*,*,三、生物碱类药物,（一）结构与性质2.托烷类,莨菪烷(Tropane),莨菪醇(Tropine),硫酸阿托品(atropine),氢溴酸东莨菪碱(scopolamine hydrobromic acid),*,*,三、生物碱类药物,（一）结构与性质3.喹啉类,硫酸奎宁(Quinine sulfate),硫酸奎尼丁(quinidine sulfate),盐酸环丙沙星(ciprofloxacin hydrochloride),喹啉环,喹核碱,三、生物碱类药物,（一）结构与性质4.异喹啉类,吗啡 morphin,三、生物碱类药物,（一）结构与性质5.吲哚类,士的宁,吲哚氮脂环氮芳环,三、生物碱类药物,（一）结构与性质6.黄嘌呤类,咖啡因,弱碱性近中性,三、生物碱类药物,（二）鉴别方法1.一般鉴别方法a.生物碱沉淀试剂酸性水溶液中，与重金属盐类和大分子酸类等沉淀试剂发生沉淀反应。常用试剂：I2KI 鞣酸 碘化铋钾 硅钨酸 碘化汞钾,生物碱与碘化铋钾反应显色,三、生物碱类药物,（二）鉴别方法1.一般鉴别方法b.熔点测定：生物碱、衍生物c.显色反应：生物碱固体+显色试剂颜色 常用显色剂：浓H2SO4、浓HNO3、钼硫酸d.紫外分光光度法：max、Ee.TLC法：Rf,（二）鉴别方法2.特征鉴别方法a.双缩脲反应-苯烃胺类b.Vitaili反应-托烷类c.绿奎宁反应-喹啉类d.紫脲酸胺反应-黄嘌呤类e.甲醛-硫酸反应-吗啡（异喹啉）,三、生物碱类药物,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法在水中碱性较弱，不能顺利地进行中和滴定（滴定突跃不明显，难以判断滴定终点）,游离碱类盐,被置换出的弱酸,当HA酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低HA的酸性，使反应顺利地完成。,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法,供试品,+,冰醋酸,10ml30ml,若供试品为氢卤酸盐再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml5ml,结果,HClO4滴定,空白试验校正,指示剂,碱性溶液pKb10，冰醋酸中滴定突跃不明显，需加入醋酐，使碱性增强，突跃更明显,（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法a.适用范围 主要用于Kb10-8的有机碱盐的含量测定Kb为10-810-10时，宜选冰醋酸作为溶剂；Kb为10-1010-12时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液；Kb10-12时，应用醋酐作为溶剂。,三、生物碱类药物,咖啡因(pKb=14.2),三、生物碱类药物,（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法b.酸根影响冰醋酸中酸性：高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸消除HX干扰的方法：加Hg(Ac)2，如量不足终点不明显，结果偏低c.滴定剂稳定性,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法d.终点指示方法：常用电位法和指示剂法结晶紫 Crystal Violet（CV）紫 蓝 蓝绿 黄绿 黄（碱性区）（酸性区）终点的颜色应用电位法校准。,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法2.提取酸碱滴定法a.原理,（三）含量测定方法2.提取酸碱滴定法b.讨论碱化试剂常用的碱化试剂 NaOH、NH3、Na2CO3、NaHCO3、Ca(OH)2、MgO等。对碱化试剂的要求 碱化试剂碱性大于生物碱的碱性，即碱化试剂的pKb生物碱的pKb,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法2.提取酸碱滴定法b.讨论提取溶剂：氯仿、乙醚，有时也使用混合溶剂。氯仿：比重大，易于分离对大部分生物碱都有较大的溶解度不燃烧，使用安全氯仿在碱性下受热很容易分解，尤其是碱性较强时更容易分解,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法2.提取酸碱滴定法b.讨论指示剂的选择：选择在酸性范围内变色的指示剂。甲基红、溴酚蓝。,三、生物碱类药物,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法3.酸性染料比色法,UV,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法3.酸性染料比色法影响因素：水性最佳pH值：使得BH+和In-最多酸性染料及其浓度：定量结合，产物溶解性好；可稍过量有机溶剂的选择：提取效率高，氯仿最理想水分的影响：影响结果，脱水剂或滤纸除去水分酸性染料里面的有色杂质,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法3.酸性染料比色法示例 氢溴酸东莨菪碱片的含量测定 精密量取对照品溶液和供试品溶液各2ml，分别置预先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液4ml，振摇提取后，静置使分层；分取三氯甲烷液，照紫外-可见分光光度法，在420nm波长处分别测定吸光度，计算，即得。,（三）含量测定方法4.紫外-可见分光光度法直接紫外测定萃取后紫外测定萃取-双波长分光光度法5.HPLC6.LC-MS/MS,三、生物碱类药物,生物碱中特殊杂质检查,一、教学目标,目的：掌握采用TLC进行特殊杂质检查操作方法 掌握生物碱类药物的结构特点、性质、分析方法 良好的记录实验现象及数据的习惯 掌握一定娴熟的操作技能内容：氨茶碱中有关物质的检查 生物碱类药物分类、结构特点、性质、分析方法,二、实训内容,操作：,供试品：0.2g+2ml水，溶解，用甲醇稀释至10ml。10l,对照品：1ml供试品用甲醇稀释至200ml。10l,色谱条件：固定相：GF254展开剂：正丁醇-丙酮-三氯甲烷-浓氨溶液（4:3:3:1）显色：254nm,1.点样：点样量相同，位置在同一水平线上，不得破坏硅胶表面 如需重复点样：前一次点样溶剂挥干后，在同一位置点样 展开前需挥干溶剂2.展开剂配制：小体积展开剂用刻度吸管量取3.展开：用展开剂平衡展开缸 不要移动 展至距硅胶板边缘0.5-1cm停止4.结果显示：展开剂挥干后再观察 先日光灯、再紫外灯、最后显色剂5.结果判断：点圆而集中，无拖尾,二、实训内容,操作,二、实训内容,供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。,供试品,对照品,原理：特殊杂质检查：供试品溶液自身稀释法杂质未知且不可得比较方法：供试品杂质点与对照品主斑点限量计算：,二、实训内容,是什么成分？,三、生物碱类药物,特点含氮碱性化合物没有共同母核多数具有含氮杂环结构，少数氮在侧链上（如麻黄碱）绝大部分存在于植物体内；少数存在于动物体内（如蟾蜍碱）,三、生物碱类药物,三、生物碱类药物,生物碱碱性强弱一般规律是：季铵碱类脂肪胺类NH3芳胺、N-芳杂环酰胺类,盐酸小檗碱,芳胺,咖啡因,三、生物碱类药物,（一）结构与性质1.苯烃胺类,*,弱碱性：烃胺基侧链，仲胺氮弱碱性。游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂；其盐可溶于水,酚羟基特性：邻苯二酚（或苯酚）结构，与金属离子络合呈色；在空气中或遇光、热易氧化，色泽变深；在碱性溶液中更易变色。,光学活性：手性碳原子，具有旋光性,（伪）麻黄碱,秋水仙碱,三、生物碱类药物,*,*,三、生物碱类药物,（一）结构与性质2.托烷类,莨菪烷(Tropane),莨菪醇(Tropine),硫酸阿托品(atropine),氢溴酸东莨菪碱(scopolamine hydrobromic acid),*,*,三、生物碱类药物,（一）结构与性质3.喹啉类,硫酸奎宁(Quinine sulfate),硫酸奎尼丁(quinidine sulfate),盐酸环丙沙星(ciprofloxacin hydrochloride),喹啉环,喹核碱,三、生物碱类药物,（一）结构与性质4.异喹啉类,吗啡 morphin,三、生物碱类药物,（一）结构与性质5.吲哚类,士的宁,吲哚氮脂环氮芳环,三、生物碱类药物,（一）结构与性质6.黄嘌呤类,咖啡因,弱碱性近中性,三、生物碱类药物,（二）鉴别方法1.一般鉴别方法a.生物碱沉淀试剂酸性水溶液中，与重金属盐类和大分子酸类等沉淀试剂发生沉淀反应。常用试剂：I2KI 鞣酸 碘化铋钾 硅钨酸 碘化汞钾,生物碱与碘化铋钾反应显色,三、生物碱类药物,（二）鉴别方法1.一般鉴别方法b.熔点测定：生物碱、衍生物c.显色反应：生物碱固体+显色试剂颜色 常用显色剂：浓H2SO4、浓HNO3、钼硫酸d.紫外分光光度法：max、Ee.TLC法：Rf,（二）鉴别方法2.特征鉴别方法a.双缩脲反应-苯烃胺类b.Vitaili反应-托烷类c.绿奎宁反应-喹啉类d.紫脲酸胺反应-黄嘌呤类e.甲醛-硫酸反应-吗啡（异喹啉）,三、生物碱类药物,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法在水中碱性较弱，不能顺利地进行中和滴定（滴定突跃不明显，难以判断滴定终点）,游离碱类盐,被置换出的弱酸,当HA酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低HA的酸性，使反应顺利地完成。,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法,供试品,+,冰醋酸,10ml30ml,若供试品为氢卤酸盐再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml5ml,结果,HClO4滴定,空白试验校正,指示剂,碱性溶液pKb10，冰醋酸中滴定突跃不明显，需加入醋酐，使碱性增强，突跃更明显,（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法a.适用范围 主要用于Kb10-8的有机碱盐的含量测定Kb为10-810-10时，宜选冰醋酸作为溶剂；Kb为10-1010-12时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液；Kb10-12时，应用醋酐作为溶剂。,三、生物碱类药物,咖啡因(pKb=14.2),三、生物碱类药物,（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法b.酸根影响冰醋酸中酸性：高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸消除HX干扰的方法：加Hg(Ac)2，如量不足终点不明显，结果偏低c.滴定剂稳定性,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法d.终点指示方法：常用电位法和指示剂法结晶紫 Crystal Violet（CV）紫 蓝 蓝绿 黄绿 黄（碱性区）（酸性区）终点的颜色应用电位法校准。,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法2.提取酸碱滴定法a.原理,（三）含量测定方法2.提取酸碱滴定法b.讨论碱化试剂常用的碱化试剂 NaOH、NH3、Na2CO3、NaHCO3、Ca(OH)2、MgO等。对碱化试剂的要求 碱化试剂碱性大于生物碱的碱性，即碱化试剂的pKb生物碱的pKb,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法2.提取酸碱滴定法b.讨论提取溶剂：氯仿、乙醚，有时也使用混合溶剂。氯仿：比重大，易于分离对大部分生物碱都有较大的溶解度不燃烧，使用安全氯仿在碱性下受热很容易分解，尤其是碱性较强时更容易分解,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法2.提取酸碱滴定法b.讨论指示剂的选择：选择在酸性范围内变色的指示剂。甲基红、溴酚蓝。,三、生物碱类药物,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法3.酸性染料比色法,UV,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法3.酸性染料比色法影响因素：水性最佳pH值：使得BH+和In-最多酸性染料及其浓度：定量结合，产物溶解性好；可稍过量有机溶剂的选择：提取效率高，氯仿最理想水分的影响：影响结果，脱水剂或滤纸除去水分酸性染料里面的有色杂质,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法3.酸性染料比色法示例 氢溴酸东莨菪碱片的含量测定 精密量取对照品溶液和供试品溶液各2ml，分别置预先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液4ml，振摇提取后，静置使分层；分取三氯甲烷液，照紫外-可见分光光度法，在420nm波长处分别测定吸光度，计算，即得。,（三）含量测定方法4.紫外-可见分光光度法直接紫外测定萃取后紫外测定萃取-双波长分光光度法5.HPLC6.LC-MS/MS,三、生物碱类药物,细菌内毒素检查,一、教学目标,目的：掌握采用鲎试剂法凝胶法进行细菌内毒素检查的方法 掌握抗生素类药物结构、性质、分析方法 具有踏实认真的工作态度内容：细菌内毒素的检查方法 抗生素类药物结构、性质、分析方法,二、实训内容,操作：,三、抗生素类药物,抗生素（antibiotics）在低微浓度下即可对某些生物（病原微生物）的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称分类内酰胺类(青霉素类、头孢菌素类)氨基糖苷类(链霉素、庆大霉素、依替米星)四环素类(四环素、金霉素、土霉素)大环内酯类(红霉素、螺旋霉素、麦迪霉素)多烯大环类(制霉菌素、两性霉素B)多肽类(多黏菌素、放线菌素),来源生物合成（发酵）化学合成或半合成特点化学纯度较低 活性组分易发生变异 稳定性差,三、抗生素类药物,三、抗生素类药物,抗生素质量分析生物学法、物理化学法鉴别：理化方法、微生物法检查：水分、pH值、异常毒性、热原、细菌内毒素、降压物质等含量/效价测定：微生物法：与临床疗效吻合,灵敏度高，结果直观，适用范围广；但操作复杂费时，误差大理化方法：准确度与专属性较高,且操作简便；但与临床疗效有偏差,三、抗生素类药物,（一）内酰胺类1.结构与性质,氢化噻唑环,青霉素类：母核6氨基青霉烷酸,（一）内酰胺类1.结构与性质酸性：羧基，pKa 2.5-2.8，与碱成盐手性C（旋光性）紫外吸收：苯环取代基不稳定性：内酰胺环，干燥条件较稳定，溶液不稳定,三、抗生素类药物,三、抗生素类药物,（一）内酰胺类1.结构与性质,氨苄西林,阿莫西林,青霉素（苄青霉素）（penicillins）,三、抗生素类药物,（一）内酰胺类1.结构与性质,氢化噻嗪环,母核：7氨基头孢菌烷酸,三、抗生素类药物,（一）内酰胺类1.结构与性质,头孢氨苄,头孢拉定,头孢羟氨苄,头孢噻吩钠,三、抗生素类药物,（一）内酰胺类1.结构与性质酸性：羧基，pKa 2.5-2.8，与碱成盐手性C：旋光性紫外吸收不稳定性：内酰胺环，干燥条件较稳定，溶液不稳定,三、抗生素类药物,（一）内酰胺类2.鉴别a.色谱法：HPLC（tR）、TLC（Rf）b.光谱法：UV、IR,三、抗生素类药物,三、抗生素类药物,（一）内酰胺类3.杂质检查聚合物、有关物质、异构体等a.聚合物：头孢他啶中聚合物测定HPLCb.有关物质与异构体：头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查HPLC4.含量测定HPLC,三、抗生素类药物,（二）氨基糖苷类1.结构与性质a.碱性（氨基）：临床应用其硫酸盐b.溶解度（氨基、羟基）：水溶性c.旋光性（糖）：多个手性碳d.稳定性（苷）：强酸、碱条件均可水解,链霉素(Streptomycin),三、抗生素类药物,（二）氨基糖苷类2.鉴别,三、抗生素类药物,（二）氨基糖苷类2.鉴别a.坂口反应链霉胍特有反应b.麦芽酚反应链霉糖特有反应,（二）氨基糖苷类2.鉴别c.N-甲基葡萄糖胺反应3.杂质检查：TLC、HPLC,三、抗生素类药物,（二）氨基糖苷类4.含量测定微生物检定法HPLC法,三、抗生素类药物,（三）四环素类类1.结构与性质,三、抗生素类药物,三、抗生素类药物,（三）四环素类1.结构与性质两性：-OH酸性、N(CH3)2碱性旋光性：UV和荧光：与金属离子络合：酚羟基、烯醇基不稳定性：,三、抗生素类药物,（三）四环素类2.鉴别HPLCTLCIRUV显色法,地西泮片溶出度测定,一、教学目标,目的：掌握溶出度的测定方法 掌握制剂质量检查项目、意义、方法 具有团结协作的精神内容：溶出度测定方法 制剂质量检查项目、方法,二、实训内容,操作：溶出度测定方法：第一法篮法溶出介质：盐酸溶液（91000）800ml转速：100转/分钟溶出时间：20分钟紫外条件：续滤液测定，检测波长：242nm，吸收系数：1018限度要求：75%溶出度测定结果：？,三、制剂质量检查,示例地西泮片 检查 其他 应符合片剂项下有关的各项规定（附录 A）重量差异崩解时限发泡量分散均匀性微生物限度,符合制剂质量要求,三、制剂质量检查,其他剂型注射剂：装量、装量差异、可见异物、无菌、细菌内毒素胶囊剂：装量差异、崩解时限颗粒剂：粒度、干燥失重、装量差异、溶化性丸剂：重量差异、溶散时限,（一）重量差异1.操作：中国药品检验标准操作规范2.判断标准合格：均未超出限度，超出限度不得多于2片，且均未超出限度1倍,三、制剂质量检查,三、制剂质量检查,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 N,2L,2L,符合规定,符合规定,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 N,不符合规定,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 N,2L,2L,不符合规定,（二）崩解时限1.操作：中国药品检验标准操作规范2.仪器：,三、制剂质量检查,可升降金属支架：上下移动距离为552mm，往返频率为每分钟3032次。,吊篮,水浴缸,盛有溶剂的烧杯,（二）崩解时限2.仪器,三、制剂质量检查,（二）崩解时限2.仪器,三、制剂质量检查,三、制剂质量检查,（二）崩解时限3.判断标准介质：371，规定溶出介质（不同剂型）判断：合格：初试：6片，全部崩解 复试：初试有1片不能完全崩解，另取6片复试，全部崩解,（三）溶出度检查1.操作：中国药品检验标准操作规范2.仪器,三、制剂质量检查,三、制剂质量检查,（三）溶出度检查2.仪器,三、制剂质量检查,（三）溶出度检查3.判断标准合格：6片，每片溶出量按标示量计算，均不低于规定限度（Q）6片，有12片低于规定限度Q，但不低于Q-10%，平均溶出量不低于Q6片，有12片低于规定限度Q，Q-20%1片Q-10%，平均溶出量不低于Q时；另取6片复试，初、复试的12片，有13片低于规定限度Q，Q-20%1片Q-10%，平均溶出量不低于Q,三、制剂质量检查,（四）可见异物检查1.操作：中国药品检验标准操作规范2.仪器,三、制剂质量检查,（四）可见异物检查3.判断标准合格：溶液型20支均未检出可见异物。20支仅有1支检出，复试20支均未检出混悬型20支未检出色块、纤毛溶液型非静脉用注射液、注射用无菌粉末、注射用无菌原料按国务院药品监督管理部门有关规定执行,地西泮片溶出度测定,一、教学目标,目的：掌握溶出度的测定方法 掌握制剂质量检查项目、意义、方法 具有团结协作的精神内容：溶出度测定方法 制剂质量检查项目、方法,二、实训内容,操作：溶出度测定方法：第一法篮法溶出介质：盐酸溶液（91000）800ml转速：100转/分钟溶出时间：20分钟紫外条件：续滤液测定，检测波长：242nm，吸收系数：1018限度要求：75%溶出度测定结果：？,二、实训内容,取样位置：在转篮顶端至液面的中点，距溶出杯内壁不小于10mm处,二、实训内容,取样位置的固定：针头和针垫的选择,三、制剂质量检查,示例地西泮片 检查 其他 应符合片剂项下有关的各项规定（附录 A）重量差异崩解时限发泡量分散均匀性微生物限度,符合制剂质量要求,三、制剂质量检查,其他剂型注射剂：装量、装量差异、可见异物、无菌、细菌内毒素胶囊剂：装量差异、崩解时限颗粒剂：粒度、干燥失重、装量差异、溶化性丸剂：重量差异、溶散时限,（一）重量差异1.操作：中国药品检验标准操作规范2.判断标准合格：均未超出限度，超出限度不得多于2片，且均未超出限度1倍,三、制剂质量检查,三、制剂质量检查,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 N,2L,2L,符合规定,符合规定,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 N,不符合规定,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 N,2L,2L,不符合规定,（二）崩解时限1.操作：中国药品检验标准操作规范2.仪器：,三、制剂质量检查,可升降金属支架：上下移动距离为552mm，往返频率为每分钟3032次。,吊篮,水浴缸,盛有溶剂的烧杯,（二）崩解时限2.仪器,三、制剂质量检查,（二）崩解时限2.仪器,三、制剂质量