第13章DNA生物合成课件.ppt
第十四章 核酸的生物合成,nucleic acid biosynthesis,本章主要内容,DNA的生物合成RNA的生物合成,第一节 DNA的生物合成,中心法则（central dogma）,遗传信息传递方向的规律,基因表达：,是指将遗传信息由DNA转录为RNA、再翻译成蛋白质的过程,半保留复制复制起始点（ori)双向复制半不连续复制,一、复制（replication）,（一）DNA复制的基本原则,半保留复制semiconservative replication,AGAACTTAG,TCTTGAATC,AGAACTTAG,TCTTGAATC,AGAACTTAG,TCTTGAATC,亲代,子代,半不连续复制（semidiscontinous replication),（二）参与DNA复制的主要酶类,解旋、解链酶类DNA拓扑异构酶解链酶单链结合蛋白引物酶DNA聚合酶DNA连接酶,1、解旋、解链酶类,解链酶,DNA拓朴异构酶,单链DNA结合蛋白 SSB,解开、理顺 DNA链、维持DNA单链状,2、引物酶(primase),DNA聚合酶合成新DNA时需要引物（一小段RNA）引物RNA3-OH末端作为DNA合成的起始点引物酶与多种起始蛋白结合形成引发体引物酶催化合成引物（primer),3、DNA聚合酶（DNA polymerase),DNA聚合酶的作用特点：模板：解开的DNA双链催化底物（dATP、dGTP、dCTP、dTTP）聚合形成3,5磷酸二酯键新链延长方向5/3/具核酸外切酶活性,原核DNA聚合酶,pol：,pol：,生理功能尚不清楚，无酶、时起作用,pol：,DNA复制高保真性的机制,DNA模板指导 正确选择碱基配对 校读功能,4、DNA连接酶(DNA ligase),通过3/，5/-磷酸二酯键连接互补链中DNA片段 不能连接单独存在的DNA或RNA单链。,（三）DNA的复制过程,模板DNA解旋与解链，形成复制叉；形成引发体，合成RNA引物；按A=T、G=C碱基配对规则，合成DNA；切除引物、填补空隙、形成冈崎片段；DNA连接酶连接封口，形成长链DNA；6.在Tus蛋白参与下，终止复制。,(terminus utilization substance),DNA复制示意图,拓扑异构酶,解链酶,5/3/,3/5/3/5/,DNA聚合酶,单链结合蛋白,DNA聚合酶,前导链 随后链,DNA连接酶,冈崎片段,引物酶,二、逆转录(reverse transcription),概念：以RNA为模板合成DNA的过程酶：逆转录酶,依赖RNA的DNA聚合酶功能 RNaseH功能（水解RNA-DNA杂交链）依赖DNA的DNA聚合酶功能,逆转录酶,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,RNaseH,+,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,cDNA整合入宿主细胞DNA分子中,病毒RNA,RNA-cDNA 杂交体,cDNA,双股cDNA,宿主细胞DNA分子,整合了cDNA的宿主细胞DNA分子,逆转录酶,意义：对中心法则的补充 有助于基因工程的实施,逆转录过程,HIV生活史,三、DNA复制与端粒、端粒酶,端粒:是由蛋白质和DNA紧密结合的结构,端粒酶:是一种自身携带模板RNA的逆转录酶,端粒酶特殊的生物学功能：1.端粒酶活性与遗传信息的稳定性；2.端粒酶活性与细胞衰老；3.端粒酶活性与肿瘤,(telomere、telomerase),Further polymerization,端粒酶合成端粒的爬行模式,四、DNA损伤（突变）与修复,突变,自发突变(spontaneous mutation)人工诱变(induced mutation),（一）引起突变的因素,物理因素：紫外线、各种辐射,化学因素：亚硝酸盐、烷化剂、芳香烃类生物因素：RNA病毒等,（二）突变的类型,点突变(point mutation)（错配）转换(transition)：A G 或 C T 颠换(transversion)：嘌呤碱 嘧啶碱框移突变(frameshift mutation)缺失、插入1个碱基重排(rearrangement),镰刀形红细胞性贫血,HbA与HbS比较,由基因重排引起的两种地中海贫血基因型,（三）DNA的损伤修复,光复活切除修复重组修复SOS修复,光修复(photoreactivation),紫外辐射DNA链上两个胸腺嘧啶残基间形成二聚体,光修复酶,切除修复,核酸内切酶,DNApol，DNA ligase,(excision repair),重组修复,(recombinational DNA repair）,第二节 RNA的生物合成（转录）,(transcription),一、参与转录的主要物质,转录模板RNA聚合酶底物终止因子,（一）转录模板,转录的模板：DNA双链中的一条模板链：DNA双链中具有转录功能的一条链（template strand）编码链：贮存有遗传信息与模板链互补的一条链（coding strand）,5/,3/,3/,5/,不对称转录：1、RNA分子上只有一条可转录 2、模板链并不总是在同一单链上,RNA合成方向：5/3/,不对称转录（asymmetric transcription）,DNA 5G G A G T A C A T G T C 3（编码链，+,）3C C T C A U G U A C A G 5（模板链，-，）（转录）5 G G A G U A C A U G U C 3 mRNA（翻译）N Ala Val His Val C 多肽,（二）RNA聚合酶原核细胞(RNA polymerase),全酶：核心酶（2）+起始因子（）,类型 细胞内定位 催化转录产物 对鹅膏蕈碱的反应 核仁 rRNA前体 耐受 核质 mRNA前体 极敏感 核质 5SrRNA tRNA 中度敏感,（二）RNA聚合酶真核细胞,（三）底物,RNA聚合酶的底物（RNA合成的原料）：ATP、GTP、CTP、UTP,二、转录过程,转录起始,2、转录延长,3、转录终止,（原核生物）,转录起始(transcription initiation),转录起始动画,核心酶催化，在模板指导下沿5/-3/方向延伸RNA链,2、转录延长(transcription elongation),转录空泡,终止子,非依赖于因子的终止子依赖于因子的终止子,terminator,3、转录终止（transcription termination）,非依赖因子的终止1、GC丰富，重复序列2、形成发夹样结构,依赖与因子的终止,转录全过程,真核细胞mRNA前体的加工,转录过程中的5/端加帽与3/端加尾的修饰,mRNA的前体：核内不均一RNA（hnRNA）,2.切除内含子(intron)，拼接外显子(exon),非编码序列,编码序列,(hetero nuclear RNA),帽子结构,尾巴结构,DNA和RNA生物合成的比较(1),复制 转录1.原料 dNTP NTP2.模板 DNA两条链 DNA一条链3.引物 需要RNA引物 不需引物4.新连延伸方向 53 535.主要酶类 DNA聚合酶 RNA聚合酶 解旋、解链酶类（2）引物酶 终止因子()DNA连接酶,DNA和RNA生物合成的比较(2),复制过程 转录过程模板DNA解旋与解链，因子辨认起始点,形成复制叉；带动全酶解开DNA双链,形成引发体，促使转录起动；合成RNA引物；因子随之脱落下来；3.按A=T、G=C碱基配对 在核心酶催化下,规则，合成DNA；使RNA链不断延长；切除引物、填补空隙、因子终止链延长。形成冈崎片段；DNA连接酶连接封口，形成长链DNA；6.在Tus蛋白参与下，终止复制,核酸的生物合成课堂练习基因表达包括下列过程复制 B.转录 C.翻译逆转录 E.以上都是DNA的半保留复制包括下列要点亲代DNA局部解开为两条单链以其中一条单链为模板C.严格遵守G C、A=U碱基配对法则合成的子代DNA中，只有一条链是新合成的E.子代DNA中只有一条链的碱基排列顺序与亲代完全一样,DNA复制过程中发生下列酶促反应解链酶将DNA双链局部解开为两条单链B.引物酶催化合成RNA引物C.DNA Pol 催化合成DNAD.DNA Pol 切除引物、填补空隙E.DNA连接酶将冈崎片断连接成长链DNA4.文献刊登的基因序列，通常指的是模板链 B.编码链 C.DNA两条链mRNA E.领头链 5.辨认转录起始位点的是 亚基 B.因子 C.亚基 D.亚基 E.核心酶,DNA Pol 具有下列功能，错误的是A.当复制发生错误时，发挥校读（正）作用B.在复制过程中，发挥切除引物，填补空隙作用C.DNA损伤时，可以发挥切除并修补损伤DNA的作用D.在体外，具有“切口平移”作用E.DNA Pol具有53、35外切酶活性 和53、35聚合酶活性7.镰刀型红细胞贫血是由于珠蛋白基因发生下列突变点突变 B.碱基缺失C.碱基插入 D.框移突变E.胸腺嘧啶（T）被颠换为腺嘌呤（A),
