《DNA重组技术的基本工具》ppt课件七（人教版选修3）.ppt

烟草,据WTO调查：2004年全世界因狂犬病致死人数约5.5万人中国卫生部通报：2004年月，狂犬病列法定报告传染病死亡数之首。发病死亡率近100%,能产生狂犬病抗体蛋白的转基因,每100kg 猪或牛的胰腺中仅可提取45g。,1979年，美国将人的胰岛素基因重组到大肠杆菌内，实现了细菌生产胰岛素，大大降低了生产成本。,治疗糖尿病特效药,据WTO调查：2005年全世界约有糖尿病患者1.8亿人，我国约6000万。,胰岛素,思考：转基因技术实现了一种生物的某些性状在另一种生物中表达。这些性状的表达与我们学过的基因的什么过程有关？,密码子在生物界是的！,通用,问题探讨：,苏云金杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。想一想需要做哪些关键工作？,普通棉花抗虫棉,一、“分子手术刀”二、“分子缝合针”三、“分子运输车”,转基因,思考：,自然界是否存在一种生物的DNA进入另一生物的情况？动物容易让外来DNA侵入自身而得以遗传吗？为什么？植物呢？单细胞生物，容易遭到入侵吗？单细胞生物并没有在进化中灭绝，而是产生了一些特殊的酶来防范。这些酶应该有什么特点？,可能酶能识别外来侵入的DNA并将其分解，而对自身的DNA不能起作用。,“分子手术刀”限制性核酸内切酶,一、限制性核酸内切酶“分子手术刀”,主要来源：种类与命名：作用特点：作用结果：,原核生物,阅读“分子的手术刀”2min,一、限制性核酸内切酶“分子手术刀”,主要来源：种类与命名：作用特点：作用结果：,识别特定核苷酸序列,原核生物,产生黏性末端或平末端,Go on,切断磷酸二酯键,GAATTCCTTAAG,CCCGGGGGGCCC,AAGCTTTTCGAA,GGATCCCCTAGG,种类与命名：,现在已经从约300种微生物中分离出了约4000种限制性内切酶(限制酶)。,EcoR,Sma,粘质沙雷氏杆菌（Serratia marcesens）,大肠杆菌（Escherichia coli R）,练习：流感嗜血杆菌的d菌株(Haemophilus influenzae d)中先后分离到3种限制酶，则分别命名为:,Hind、Hind和Hind,Sma,平末端平末端,EcoR,黏性末端,黏性末端,EcoR,黏性末端,黏性末端,Go back,重复演示,GAATTCCTTAAG,GAATTCCTTAAG,EcoR,将不同种来源的DNA片段连接起来,生物A基因片段,生物B基因片段,GAATTCCTTAAG,GAATTCCTTAAG,酶切,二、“分子缝合针”DNA连接酶,分类：Ecoli DNA连接酶 T4 DNA连接酶作用：P5,可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，,Ecoli DNA连接酶或T4DNA连接酶,即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键,T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低,DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？,不是一回事。相同点：形成磷酸二酯键但是：1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键2）DNA聚合酶需要以一条DNA链为模板；而DNA连接酶不需要模板。,三、“分子运输车”基因进入受体细胞的载体,载体需要的条件：有1多个限制酶切点对受体细胞无害导入基因能在受体细胞中复制、表达有某些标记基因，便于筛选常用运载体：细菌的质粒 噬菌体或某些动植物病毒,假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预想的效果吗？,作为分子运输车载体，如果没有切割位点将会怎样？,霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？,目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？,最常用的质粒大肠杆菌的质粒,试分析其作为载体的优点？,2,7,4,8,3,6,1,5,