24食品添加剂番茄红素(合成)产品标准.doc
食品添加剂 番茄红素（合成）1 生产工艺由用于食品的其他类胡萝卜素生产中常用的合成中间体，经过维蒂希聚合反应制备而成的合成番茄红素。商业上用于食品的配方型番茄红素制剂，是将其配制成悬浮于食用油中的乳液或水溶型的粉末。2 性状番茄红素晶体为红色，几乎不溶于水，溶于氯仿等有机溶剂，对热、光、空气和湿度均敏感，容易氧化。项 目指 标检验方法番茄红素含量，%总番茄红素96附录A中A.1全反式 番茄红素70干燥失重，% 0.5GB 5009.3减压干燥法铅（Pb），mg/kg1GB 5009.12阿朴-12-番茄红素醛，%0.15附录A中A.2三苯基氧膦(TPPO)，%0.01附录A中A.3 3 技术要求附录A检验方法 A.1 总番茄红素含量和全反式番茄红素的含量的测定A.1.1 方法原理用高效液相色谱法在下列条件下测定总番茄红素含量和全反式番茄红素的含量A.1.2 试剂和材料(注意：所有溶剂均应为色谱级)A.1.2.1 正己烷。A.1.2.2 用0.025%特丁基对苯二酚（BHT）稳定的四氢呋喃。A.1.2.3 n-乙基二异丙胺。A.1.2.4 番茄红素标准品纯度95。A.1.3 仪器和设备A.1.3.1紫外/可见分光光度计，配备1cm吸收池。A.1.3.2 高效液相色谱系统，配备合适的泵、进样器、色谱柱恒温箱和积分仪。A.1.3.3 色谱柱：2根相连的不锈钢柱（250x4.0 mm）。A.1.3.4 固定相：Nucleosil 300-5，5mmA.1.3.5 HPLC条件流速： 0.8 mL/min进样量： 20 µL柱温： 20检测波长： 470 nm流动相： 0.15% n-乙基二异丙胺的正己烷溶液（V/V）A.1.3.6 HPLC测定用标准溶液：精密称取番茄红素标准品5.5-6.5mg，置100mL量瓶中，加入特丁基对苯二酚（BHT）稳定的四氢呋喃5ml使溶解，用正己烷稀释至刻度。作为HPLC测定用标准品溶液。A.1.3.7 分光光度测定用标准溶液：精密量取上述HPLC测定用标准溶液5.0mL，置100mL量瓶中，用正己烷稀释至刻度。作为分光光度测定用标准溶液。A.1.3.8 样品溶液精密称取本品4.5-5.5mg，置100mL量瓶中，加入特丁基对苯二酚（BHT）稳定的四氢呋喃5mL使溶解，用正己烷稀释至刻度。A.1.4 分析步骤与结果计算A.1.4.1 分光光度法测定番茄红素：A.1.4.1.1 分析步骤用1cm吸收池，以正己烷为空白，在最大吸收波长处（大约470nm）测定上述分光光度测定用标准溶液的吸收值。A.1.4.1.2 结果计算： (A.1)式中：Cst分光光度测定用标准溶液中番茄红素的浓度（mg/L）；A最大吸收波长处的吸收度；3450全反式番茄红素在正己烷中的吸收系数A；10000稀释系数。A.1.4.2 HPLC分析测定：A.1.4.2.1 分析步骤重复进样20mLHPLC测定用标准溶液，记录测定出的番茄红素异构体的总峰面积（除去溶剂峰），从重复进样中计算峰面积平均值，并按下式计算番茄红素响应因子(RF):(A.2)式中： RF番茄红素的响应因子（AU x L/mg）； Ast番茄红素总峰面积的平均值（AU）； Cst分光光度测定用标准溶液中番茄红素的浓度（mg/L）； 20由分光光度测定用标准溶液制备HPLC测定用标准溶液的稀释系数；取样品溶液进样，并记录所有番茄红素异构体的峰面积。A.1.4.2.2 结果计算保留时间：番茄红素异构体相对保留时间*绝对保留时间（约）13-顺式-番茄红素9-顺式-番茄红素全-反式-番茄红素5-顺式-番茄红素0.60.81.01.114min19min22min24min*相对于全-反式-番茄红素按下式计算总番茄红素的含量：总番茄红素(%)= (Atrans+A5cis+A9cis+A13cis+Axcis) ×0.1 × 100 (A.3)RF × Ws式中： Atrans全-反式-番茄红素峰面积(AU)； A5cis,A9cis,和A13cis5顺式，9顺式和13顺式番茄红素的峰面积(AU)； Axcis如检测到其它顺式异构体的峰面积(AU)； 0.1样品溶解的体积(L)； RF番茄红素的响应因子(AUxl/mg)； Ws样品取样量(mg)。按下式计算全-反式-番茄红素的含量：全-反式-番茄红素（） Atrans × 0.1 ×100 RF×WsA.2 阿朴-12-番茄红素醛的测定A.2.1 方法原理高效液相色谱法A.2.2 试剂(注意：所有溶剂均应为色谱级)A.2.2.1 正己烷。A.2.2.2 三乙胺（TEA）。A.2.2.3 四氢呋喃（THF）。A.2.2.4 用特丁基对苯二酚（BHT）稳定的甲苯（0.5g特丁基对苯二酚（BHT）溶于1000mL甲苯中）。A.2.2.5 阿朴-12-番茄红素醛（也叫番茄红素C25-醛）标准品。A.2.3 仪器和设备A.2.3.1 高效液相色谱系统，配备合适的泵、进样器和积分仪A.2.3.2 色谱柱：不锈钢柱（200x4.0mm）A.2.3.3 固定相：硅胶 Nucleosil Si 100 3mmA.2.3.4 检测器：紫外/可见分光光度计，或可见分光光度计A.2.3.5 HPLC条件：流速： 2.0 mL/min进样量： 5.0 mL检测波长：435nm流动相： A正己烷 B正己烷：三乙胺（99.9:0.1）(V/V) C正己烷：四氢呋喃（80:20）(V/V)梯度：时间，分钟A%B%C%080200166020202240204024.580200A.2.3.6 标准品溶液精密称取阿朴-12-番茄红素醛对照品14.5-15.5mg，置50mL量瓶中，用特丁基对苯二酚（BHT）稳定的甲苯溶解并稀释至刻度。精密量取2mL，置100mL量瓶中，用特丁基对苯二酚（BHT）稳定的甲苯稀释至刻度。A.2.3.7 样品溶液 精密称取本品29.0-31.0mg，置10mL量瓶中，用特丁基对苯二酚（BHT）稳定的甲苯溶解并稀释至刻度，将该溶液超声处理10min。A.2.4 结果阿朴-12-番茄红素醛的保留时间约为14min，其相对于全反式番茄红素的相对保留时间为1.6。A.2.5 计算：阿朴-12-番茄红素醛（） As×Wst×10 ×100(A.4) Ast×Ws×2500式中：As样品峰面积；Ast标准品峰面积；Wst标准品取样量(mg)；Ws样品取样量(mg)；10样品溶解的体积(ml)；2500对照品溶解体积(50mL)乘以稀释倍数(50)。A.3 三苯基氧膦（TPPO）的测定A.3.1 方法原理在下列条件下用HPLC方法检测。A.3.2 试剂A.3.2.1正己烷。A.3.2.2异丙醇。A.3.2.3 四氢呋喃（THF）。A.3.2.4三苯基氧膦 （TPPO）(纯度99%)注意：所有试剂均应是色谱级。A.3.3 仪器和设备A.3.3.1 高效液相色谱系统，配备合适的泵、进样器和积分仪。A.3.3.2色谱柱：不锈钢柱（150×4.6mm）。A.3.3.3固定相：硅胶基柱 Supelcosil Lc-Si, 5m 或类似的柱。A.3.3.4检测器：紫外检测器。A.3.3.5 HPLC条件：柱温： 20。流动相：异丙醇:正己烷（1:24 V/V）。流速：1.5mL/min。进样量：50L。检测波长：210nm。TPPO的保留时间大约为8.1min。A.3.4 分析步骤标准溶液：精密称取10mg的TPPO标准品，用THF（四氢呋喃）溶解，定量移入1000mL容量瓶中，用四氢呋喃稀释至刻度。样品溶液：精密称取1000mg的样品，用四氢呋喃溶解，定量移入100mL容量瓶中，用四氢呋喃稀释至刻度。A.3.5 结果计算.(A.5)式中：As样品峰面积 ；Ast标准峰面积；PstTPPO标准品的纯度的比例(例如：如果标准物质的纯度为99%，该数值应为0.99）；Wst标准品的重量（mg）；Ws样品重量（mg）。_
