草菇栽培技术.doc

序 言随着农业产业结构调整和人民生活水平的提高，草菇作为富有较高营养价值的新型蔬菜正在我国居民消费中不断得到普及，草菇的生产也正在成为东港镇新兴的产业。我们无锡地区属于亚热带季节气候，四季分明，每年平均气温15.9度，降水量适中，环境气候特别适应果蔬、食用菌的种养殖，依据这一优越的自然条件，我们东港镇为进一步推进农业产业结构的调整，引导农民走致富发家的道路，在无锡市政府的关心支持下，在我镇东升村成立了专业生产各类草菇的无锡金菇源现代农业科技开发有限公司这一目前在江苏省范围内第一个设施最先进、规模最大的草菇生产的龙头企业。该公司第一期菇房面积1864平方米，在2006年已建成，做到当年投资就创益的目标，实现日产鲜菇2吨，产品销售出现了供不应求的现象，销往上海、南京、常州、苏州、合肥等大中城市，各地经销商纷纷前来求货，有的甚至直接开着车来抢货，公司周边的60多家酒楼也都向该公司长期订货。依据市场良好的发展前景，投资600多万元的第二期菇房也即将峻工，面积达到7348平方米，种植面积达到9230平方米。该公司2007年生产金针菇225万斤，其他菇类75万斤，销售利润达600万元。无锡金菇源现代农业科技开发公司现有职工45名，其中中专以上学历的人员有15名，有着雄厚的技术力量，同时该公司从江苏省微生物研究所、南京农业大学为技术依托，不断从事新产品的研究与开发，在未来几年内准备占地面积达1500亩的食用生物产业园，内设250亩的金针菇生产基地、300亩的草菇生产基地、300亩的稀有菌种生产基地、300亩的废弃菌包肥料加工基地及200亩的生产胶囊提炼中心，届时年产值可达1.3亿元。我镇在无锡金菇源现代农业科技开发公司这一菌类生产龙头企业的带动下，附近农户依托他们的技术指导和提供的菌种，纷纷开展家庭化种植，也已经取得了一定的成效，为进一步指导他们从事菌类产品的生产，我们无锡市东港成人教育中心校参考了多种资料编写了这一草菇的种植与管理教材，分发给有关草菇生产种植户，以帮助他们加强对所种植菌类的管理，不断提高经济效益。目 录第一章 草菇菌种的生产一、 菌种的类型和制种程序二、 菌种生产的主要设备三、 草菇菌种生产中常用的培养基四、 消杀和灭菌五、 菌种的分离与培养六、 菌种的质量检验七、 菌种的保存、衰退与复壮第二章 草菇栽培技术一、草菇栽种中常用的培养料二、草菇的室外栽培三、草菇的室内栽培四、草菇的其他栽培方法第三章 草菇栽培的病虫害防治一、草菇病虫害防治的一般原则二、草菇病害三、草菇虫害四、常用药剂及其使用方法第四章 草菇的保鲜加工一、草菇的保鲜二、草菇的加工三、草菇加工过程中的几个问题第一章 草菇菌种的生产食用菌菌种有特定的制作程序，只要掌握了制种技术，才能生产出优良的菌种，使食用菌栽培获得成功。食用菌生产所用的菌种，是提供繁殖而分级制作的菌丝体培养物，相当于高等植物的种子。在英语中，菌种译为“spawn”，此词来源于拉丁文，本来是扩大的意思，因此草菇接种的本意是“移植”。在自然界中，食用菌繁殖后代依靠孢子，孢子在适宜的环境下，萌发成菌丝体。菌丝体生长达到生理成熟后，可以形成子实体。在人工栽培食用菌时，孢子虽然是种子，但是并不用孢子直接播种，而是孢子或子实体组织萌发而成的纯菌丝体作为播种材料。因此通常所指的菌种，是经过人工培养并进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体，这相当于高等植物的秧苗。种子一般处于休眠状态，而秧苗常处于生长状态。草菇栽培用的菌种是菌丝体，就如水稻不用种子，而用秧苗一样。草菇菌种由三部分组成，即草菇菌株的纯菌丝体、菌丝体着生的基质和包装容器。草菇菌种因培养基质结构不同，有固体菌种与液体菌种之分。在固体菌种中，按基质成分的不同，又分为粪草菌种、谷粒菌种等。按菌种生产繁殖过程的先后，又有母种、原种、栽培种之分，或称其为一级种、二级种、三级种。草菇菌种的生产与作物种子的扩繁有本质的差别，其原因是菌种生产为无性繁殖过程，不发生遗传重组，母种、原种和栽培种之间的基因型是不变的，所以草菇菌种的分级尤其是原种与栽培种的划分是人为的。在生产实践中，原种与栽培种可能有一定的差别，这种差别不是由于菌种本身种性的差别，而是在菌种生产过程中由于隐性污染造成的，栽培种的纯度可能比原种低。一、 菌种的类型和制种程序（一） 菌种类型 菌种是指以保藏、试验、栽培等用途为目的，具有繁衍能力，遗传特性相对稳定的菌类的孢子、组织或菌丝及其营养性或非营养性的载体。根据使用目的的不同，可以把菌种分为保藏菌种、试验菌种和生产菌种。按物理形状可分为固化菌种、固体菌种和液体菌种。在固体菌种中，根据使用容器的不同又可以分为袋装菌种和瓶装菌种；按外观形态可以分为颗粒状菌种、片状菌种和砖状菌种等；按培养基成分不同，可以分为粪草菌种、谷粒菌种、木块菌种和木屑菌种等根据“全国食用菌菌种暂行管理办法”，菌种分为一级、二级、三级，菌种场分为一级菌种场、二级菌种场、三级菌种场。但在生产实践中，一般将菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和生产种（三级种）。1、 母种 母种又称为一级种、试管种，是将经孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物，移接到试管斜面培养基上培养而得到的纯种。除单孢子分离的外，一般获得的母种纯菌丝具有结实性。采用分离法获得的母种数量很少，需要将菌丝再次转接到新的斜面培养基上，进行转管繁殖以得到更多的母种，这种母种称为再生母种。通常一支合格的母种可以转接成10支以上的新试管。2、 原种 原种又称为二级种，是由母钟转接到装有麦粒等固体培养基质的专有菌种瓶中培养而成的。一般一只母种可以扩大转接至68瓶原种，原种常用的容器为750毫升菌种瓶、500毫升罐头瓶或者是聚丙烯塑料袋。由于原种直接用于生产成本过高，因此还需要进一步扩大繁殖成栽培种。由于原种的培养基质接近于栽培所用的培养基质，所以原种也可以用于小规模的栽培。3、 栽培种 栽培种又称为三级种，是在原种的基础上进一步扩大繁殖而成的。栽培种的培养基质与原种的培养基质类似，但更接近于栽培基质。栽培种数量较多、成本较低，可以直接用于生产，接种到菌床或栽培袋上进行栽培。栽培中通常采用固体培养基，以塑料袋或玻璃瓶作为容器。一瓶原种可以扩大繁殖3050袋栽培种。（二）、菌种的制作流程 菌种生产是通过无菌操作，大量培养繁殖菌种的过程。食用菌菌种是通过母种、原种、栽培种的顺序来完成生产用菌种的制作。二、菌种生产的主要设备食用菌的菌种是用人工纯培养的方法而得到的，根据生产的不同需要而制备不同的菌种。菌种制备过程的各个步骤，如分离、转接、培养和保藏等必须在无菌条件下进行才能保证菌种的质量。有条件的要求设立实验室、配料室、灭菌室、无菌室、培养室并配备相应的仪器设备。目前我国已有许多厂家相继研究、制造了各种类型的食用菌生产机械，如原材料加工机械（切片机、粉碎机）；搅拌机（配料），装瓶（袋）机；栽培管理机械（加液机）；食用菌产品的加工机械（烘干机、切片机、分级机）等。在菌种生产中常用的机器设备有：1、 配料设备（1）切片机 代表型号有XQ-600型和MQ-700型。前者适用于木头切片，每小时可切直径为150毫米木片15002000千克。后者适用于木材切片，每小时可直径200毫米以下木材切片1500-2000千克。（2）粉碎机 可对原材料进行第二道工序加工。代表型号有锯齿式粉碎机（FS-300A，MX-25型），适用于直径30120毫米的杂木，可以一次锯成屑，对其干湿度无任何要求，所需动力小，但有剩余段；锤片式粉碎机 （GFT-600，GFQ-50）适用于一定大小的碎木片，要求湿度不超过20%，所需动力较大；组合式（MX-400）粉碎机适用干材直径110120毫米以下的杂木、山竹、芦苇、桑枝、棉秆等，可以一次加工成屑，对干湿度要求不大，需要动力介于上述二者之间。（3）过筛机 用于清除木屑中的木块、碎木等杂物的专用机械。（4）拌料机 拌料机主要用于培养料配制后的混合搅拌，使其匀质。代表型号为WJ-70，每小时可拌料8001000千克，每次投入料为4050千克/3分钟。（5）装瓶（袋）机 将培养料装瓶（袋）的机械，可代替手工装瓶（袋），使生产者从繁重的体力劳动中解放出来。一般全机由机架、喂料装置、螺旋输送器、传动操作系统、电动机等组成，装料松紧度以手托挤来控制，每小时可装500（瓶）袋左右。据不完全统计，国产装瓶（袋）机型号有30多种。2、灭菌设备 常用的消毒灭菌设备包括用于干热灭菌的电热干燥箱，湿热灭菌用的手提式高压锅、卧式高压灭菌锅以及不同形式的常压灭菌箱、灶等。年生产能力2050万瓶（袋）菌种，加工300500吨盐渍菇的食用菌生产厂，必须安装12吨的高压蒸汽锅炉。生产中常用的灭菌设备分为两类，第一类是高压高温灭菌罐，适合正规的草菇厂采用。这类设备的造价每台在 2万10万元之间，价格高低主要取决于型号大小与建造水平。第二类是不同造型的常压常温灭菌灶（炉），投资少，较安全，适用于农户生产。（1）高压灭菌锅 高压灭菌锅由以下机件组成：外锅，装水，供发生蒸汽用；内锅，放置待灭菌物；压力表，指示锅内压力变化；温度计，指示锅内温度变化；排气阀，通常为手拨动式，用于排除锅内冷空气；安全阀，当超过规定的压力时即自行放气降压，以确保安全。其他配件包括橡皮垫圈、旋钮、支架等。（2）常用灭菌锅 常用灭菌锅（灶）同样是利用蒸汽的热力穿透细菌的细胞壁而达到杀灭细菌的目的。由于是在常压下进行，因此所需灭菌的时间较高压灭菌要长得多。常压灶制作简单，造价低，但灭菌时间长。常压灭菌灶主要由炉灶和锅膛两部分组成。炉灶包括炉体、铁锅、炉栅、炉膛（燃烧室）、进风口，它们均设在地平面以下，一般安装3口铁锅，其中两口直径为800毫米，靠近烟囱作预热用的一口直径为600毫米，底部用石块、砖砌成炉体。烟囱高3.5米，内径18厘米*18厘米。炉膛形状、炉门和炉栅尺寸应根据铁锅大小和节柴灶要求进行施工，炉栅面积与铁锅面积比为1：6，安装时以锅脐为中心，炉栅长1/3朝向烟囱，2/3朝向灶门，炉栅朝火门方向一般要高于炉膛里面，向里倾斜12度。制作炉膛应使用导热性能差的保温材料。（3）可移动式常压灭菌灶 在生产实践过程中，有时需要经常更换栽培试验场地，由于常压灭菌灶一般都是固定的 ，不能移动，给生产带来了不便。如果每更换一处场地都建造一座灭菌灶，既费时、费工又费钱。多年来经过科研人员的不懈努力，终于研制出一种可移动的常压灭菌灶，为更新场地带来了很大的方便。该常压灭菌灶的大小可根据生产规模来制造，其容量从5003000千克不等，一般以10002200千克最好，既适合菇农及专业户生产，又适合大型栽培场所及工厂化生产。其特点是灭菌较为彻底、基本无死角，而且可以利用煤炭、木材以及各类农作物秸秆作燃料。（4）蒸汽炉 蒸汽炉是一种结合了高压灭菌的高效率和常压灭菌灶的安全便宜之优点的灭菌设备，其灭菌温度介于土蒸锅于高压锅之间，一般土蒸锅灭菌温度在80100摄氏度之间，高压锅在115127摄氏度之间，而蒸汽炉灭菌温度在100103摄氏度之间。是农户较适用的设备，价格在3000元左右。（5）铁桶式灭菌灶 将200升油桶与炉灶两部分合二为一，组成铁桶式灭菌灶。制作时，去掉桶盖，在盖上钻一些洞作为蒸架。使用桶底垫放3块20厘米高的木块或砖块将蒸架支撑起来。加水至蒸架下沿，放入待灭菌的料瓶或料袋，桶顶覆膜扎紧即可加热灭菌，一次可容纳160袋（瓶）。（6）砖墙式灭菌灶 在灶台上用砖砌成顶部拱形的灭菌室，内墙中嵌入角钢供放活动栅格用，正面设装卸料袋的活动门，并钻孔安装温度计。灭菌室外有小锅并与大锅筑水沟相连通，供自动添加热水。优点是制作简单，使用方便，密封性能好。缺点是升温慢，灭菌时间长，耗能较大。3、接种设备（1）接种箱 接种箱顶部两侧呈倾斜状，安装窗门，但窗门需密闭。箱底部两侧箱壁上各有两孔，孔上装袖套，接种时手由袖套伸入箱内操作。箱内有紫外线灯和日光灯。接种箱应保持清洁、无杂物。接种前、后箱内都应用0.1%高锰酸钾溶液擦洗，再用清洁干布揩干。定期对接种箱进行熏蒸灭菌。（2）蒸汽接种装置 蒸汽接种就是在蒸汽流上方的无菌区域范围内进行接种的一种方法所需装置式样不固定，一般由加热器、水壶和工作台组成，菇农可根据其原理随意设置。加热器大多为电炉，也可用煤炉。炉上置小口的水壶或水锅，壶或锅上方为工作台，台面上有10厘米*20厘米的孔，台面孔和壶口或锅口紧密相接，使壶口（锅口）产生的蒸汽集中从孔口喷出。接种前先加热壶或锅中的水，蒸汽产生后， 在孔口上方就形成了一个无菌区域。接种时将菌种和待接菌种的瓶口对准台孔，接种针置酒精灯的火焰上灼烧灭菌，冷却后照常规方法操作。（3）接种室 接种室为高度洁净的无菌区，一般长宽各2米左右，高约2.2米。墙顶装紫外线灯和日光灯各一盏。地面光洁有下水道，墙壁用防水涂料或油漆刷白，便于冲洗消毒。接种室外间为缓冲室，其长度与接种室相同，宽1米。缓冲室墙顶也装紫外线灯和日光灯各一盏，壁上有挂衣架接种室和缓冲室的门均为推拉门结构。紫外线灯用于空气消毒，既干净又无污染，是一种很好的消毒方法，因而长期被广泛地采用。据测定，在相对湿度为98%，每立方米含臭氧浓度为5.67毫克时，紫外线照射产生的臭氧可以杀灭99.1%的枯草杆菌和黑色变种芽孢杆菌。紫外线灯管以悬吊在顶棚下为宜，一般应安装在离操作台1.5米处。紫外线作用最适温度为26.7摄氏度，在潮湿情况下，紫外线灯效果降低。紫外线灯一般在最初使用的100小时中很快降低功率，故需在使用100小时后测定其强度。如功率下降为原有功率的70%时，就认为实效了，应当及时更换。若不及时更换，不但没有杀菌效力，这个能量还会有利于细菌生长。紫外线灯管的维护极为重要，至少24周，甚至每周清洁一次。可用干净软布或酒精湿过的棉花轻轻擦，要避免在玻璃上产生痕迹，禁止用有油或有蜡的布擦，装卸灯管要避免用手直接接触灯管表面，以防止灯管发生失透现象。在使用中，操作人员的眼睛和皮肤切不可直接暴露在紫外线灯光照射下，以防受伤害。接种室单独使用紫外线照射，而不同时进行无菌通风，是不能达到无菌要求的，其原因是： 辐射面积有限 紫外线虽有很强的表面杀菌效果，但有效辐射面积有限，即使在应用合理的情况下，也不能杀死空气中的全部细菌。因此，还需要配合使用化学灭菌及空气过滤法，来滤除未被杀死的细菌。 穿透力弱 细菌多数依附在灰尘上，而紫外线穿透力较弱，对灰尘上的细菌，灭活效果并不彻底，而无菌通风是移除灰尘必不可少的措施。 通风不良 接种室为密闭房间，不能自然通风，如果不采用人工通风，则由于人汗及料瓶（袋）水分的蒸发增加了室内温度和湿度，致使细菌和霉菌繁殖，且不利于操作人员的身体健康条件允许时，应安装空气过滤装置，以滤除杂菌灰尘。无菌通风设备一般是由离心鼓风机、装有滤板的风箱和风道组成。理想的通风设备应有加热或和冷却空气的装置。无菌空气应自室顶棚中央进入，而由房间的下角风口排出，排风的方向应先经过缓冲间，再经过更衣室。标准接种室的气压应保持正压，大约高出室外0.030.05兆帕，这样就防止了外界不洁空气的反流。总之，接种室的空气处理，既不能单靠通风，也不能单靠紫外线照射，必须二者结合起来才能达到室内空气净化的目的。（4）（方便）接种室 又称接种帐。接种是菌种生产最关键的一道工序，而接种场所又直接关系着接种的成功与否。采用接种箱接种，缺点是其密封性能差、空间小而操作不便；接种室空间太大，致使消毒难以彻底，染菌率高。为解决此类问题，采用“蚊帐”式塑料接种棚，效果很好。（5）超净工作台 利用过滤灭菌的原理，空气经过滤除菌后从风洞朝一个方向吹出，使工作台范围内成为无菌状态。生物粒子如细菌及真菌孢子的直径大部分在0.5微米左右，因它们不能独立生存，都寄附于尘埃上而成为一个群体，凝聚直径都大于0.5微米，故高效空气过滤器在除尘时除了菌。接种室或超净工作台的洁净度如何，可用简便方法检验：在接种工作台上，以平均间隔位置摆放平皿3个，每个皿内装营养丰富并经灭菌的牛肉膏蛋白胨固体培养基约20毫升。打开皿盖暴露培养基30分钟再盖上，于37摄氏度培养48小时检查菌落数，平均每个皿中不超过4个为除菌合格。洁净度基本达到100级。超净工作台可安放在接种室或一间清洁、空气流动小的房间内，天花板上安装紫外线灯杀菌，4、 常用接种工具 菌种移接的工具大多是自己加工制作的，最普通的制作材料是自行车辐条，一般钢丝烧灼后容易生锈，所以制作接种工具最好使用不锈钢丝、电焊条或镁合金钢丝制作。主要工具有以下几种：（1） 接种刀 用自行车钢丝或适当粗细的不锈钢丝锻制。将钢丝一端烧红，弯成90度角，锤扁，用砂轮打磨成镰刀状，刀口要薄、锋利，两边均留有刀刃。用于斜面菌种的纵向切割。（2） 接种锄 用自行车钢丝或适当粗细的不锈钢丝锻制。将钢丝一端烧红、锤扁，用砂轮打磨成铲状，前端刀刃要锋利；在火炉上烧红后，将前端呈90度角弯曲，使之呈锄状。用于刮除菌种表面老化菌丝、子实体原基和斜面菌种的横向切割，或将母种切断移接到原种培养瓶内。（3） 接种铲 用自行车钢丝或适当粗细的不锈钢丝锻制。将钢丝一端烧红、锤扁，用砂轮打磨成铲状，刀要薄、锋利；用于挑取子实体组织块或挑取带有小块琼脂的母种。（4） 接种环 取针灸用不锈钢针一根，剪去针尖和针柄留下5.56厘米长，将前端卷成环状，直径34毫米。在医药器械商店购买接种棒，将接种环固定在接种棒的插孔内。如无专用接种棒，可用细钢丝将接种环固定在适当粗细的钢丝或自行车钢丝上/用于移接孢子稀释液等。（5） 接种针 取针灸用不锈钢针一根，剪去针尖和针柄留下4.55厘米长，将前端弯曲或不弯曲，按接种环方法固定在接种棒或钢丝上。用于刮取菌褶上的孢子，或在平板上挑取微小菌落。（6） 接种匙 用自行车辐条、电焊条或适当粗细的不锈钢丝锻制。将钢丝的一端烧红、锤扁，加工成匙状，前端刀刃要锋利。用于木屑、草粉、谷粒原种的接种。接种室内常用器械工具还有解剖刀、手术刀、酒精灯、搪瓷方盘、培养皿、广口瓶、接种针插座、菌种瓶架。5、 培养室及其设备（1）培养室 是用来培养菌种的场所，室内可排放菌种架，房间的结构和大小，根据生产规模而定。一般有砖瓦结构、简易塑料棚结构两种。培养40005000瓶菌种的培养室面积以2025平方米为宜。培养室必须有较好的保温条件，门窗能密闭避光，墙壁宜厚或有夹层，以减少室外气温影响，达到较好的保温效果。此外，还应当配备升、降温调控设备。升温设备附有自动调控的电炉、暖气散热器，或土制火炉、火炕和地下火道；降温设备主要有空调、地道抽风机、冷水管等。较高级的发菌室，应当配有自动调温调湿机。为了有较好的调温、调湿和通风换气的效果，最好应设置地窗。地窗装设纱窗和吊门，保温时关闭，换气时开启。以便保持无光培养，检查时可采用手持式工作照明灯或开日光灯。（2）培养床架 床架数量、层数和层距等的设计都应考虑培养室空间的利用率和检查的方便性。以菌种排放的方式不同而分长方柱形架和三角形架，前者以立放为主，后者可以直接排放周转箱，箱内再放菌种袋（瓶）。原种袋（瓶）床架层距应取袋（瓶）高加13厘米（共约35厘米），顶层离天花板45厘米，底层离地面40厘米；床宽取袋（瓶）径乘5厘米加3厘米（约48厘米）；床板最好用5厘米条板铺钉，条板间距为一厘米，保证上下层受热均匀。栽培种生产量大，所以菌种袋竖放空间利用率不高，因此待菌丝长满料面后可以将袋（瓶）卧放即交叉横放，但要严防跌垮。为了充分利用空间，栽培种床架层距应为5060厘米。（3）恒温培养箱 电热恒温培养箱：采用自然对流式的结构，冷空气从后部风孔进入，经电热器加热后从两侧空间对流上升，并由内胆左右侧小孔进入内室它适用于低温季节菌种的培养。生化培养箱：温度可调并且恒温效果更精确。一年四季都能使用。（1） 摇床 摇床主要用于食用菌的深层液体培养或制备液体菌种。常用的摇床有往复式和旋转式两种，往复式摇床的震荡频率是80100次/分钟，振幅为812厘米；旋转时的振荡频率为180220次/分钟。（2） 电热器 主要用于菌种培养室的升温。无论栽培何种草菇，首先需要培养其菌丝体。培养菌丝体的过程叫发菌。而培养子实体的过程叫出菇。发菌与出菇可以在一处，但因为各自所要求的条件不同，最好还是分开。发菌要求的条件是保温、黑暗，空气湿度65%左右。根据这样的条件，一般有以下发菌设施。（3） 加湿器 加湿设备一般只在栽培生产和示范栽培中才用到，包括离心加湿器、电极式加湿器、超声波加湿器和水压喷雾装置等。高温季节草菇的生产管理主要是降温。有条件的 地区，可采用冷气机或空调器，但投资较大、耗电量多。最节省投资的办法是棚顶加盖遮阳物，使之形成阴凉环境，在每日的高温期，从棚顶或棚内喷雾降温，一般可降低35摄氏度。6、 实验室设备 对于有条件的单位，为了便于对菌种进行检查、观察、化验分析，有必要设置一个实验室。实验室常用的仪器设备有天平、干湿温度计、玻璃器皿和器具、孢子采集器、光学显微镜、电冰箱、冷藏箱及电热干燥箱等。7、 培养容器 培养食用菌的容器有玻璃容器和塑料容器两大类。玻璃容器透明度好，污染率低，但价格较高，并且容易损坏，主要用于菌种分离、保存、鉴定和母种、原种的制作。塑料容器轻便、成本较低，但容易污染杂菌、并且一般不能重复使用。经常用来制作栽培种或直接用于栽培。草菇制种常用袋的规格一般长30厘米*扁宽17厘米，厚度为0.040.05毫米。袋的口径粗细须与袋装机的出料口匹配，否则不便采用机械装袋。薄膜不能太厚，否则出袋少，成本增大；太薄则容易破裂，引起杂菌污染。食用菌生产中制作塑料袋的常用材质有聚炳烯和聚乙烯。还有一种聚氯乙烯，在不到100摄氏度时就会软化，不能应用于食用菌的生产。二、 草菇菌种生产中常用的培养基（一） 培养基的类型1、 根据营养物质来源分类（1） 天然培养基 是用营养丰富的天然有机物配制而成的。常用的天然有机物质有马铃薯、高粱、甘蔗渣、玉米秆、木屑、稻草、麦粒、米糠、棉籽壳和动植物浸出液如（土豆煎汁、麦芽汁、牛肉膏）等，这些都是配制天然培养基的原料。这些有机物来源广、价格低廉、使用方便，但其化学成分不恒定，故这类培养基只能用于生产，不适宜作为生理测定和遗传研究等使用。（2） 合成培养基 是用已知其化学成分的有机或无机化合物等定量配制而成的。由于其成分稳定、准确，适用于专门的营养生理等研究，生产上较少使用。在配制供生理、遗传、研究使用的合成培养基时，必须使用蒸馏水或无离子水，而不能使用自来水或井水。配制合成培养基常用的化合物有：葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、羟甲基纤维素、蛋白胨、酵母膏、尿素、硫酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、碳酸钙和盐酸硫胺素等。（3） 半合成培养基 是指在天然培养基的基础上，添加一些已知成分的营养物质；或者是在合成培养基中添加某些天然物质。这类培养基在生产上应用较多。2、 根据培养基质的物理性状分类（1）液体培养基 是将食用菌生长发育所需的营养物质，按一定比例配制的营养液。液体培养基的优点是，菌丝体生长迅速，在短时间内可以生长出大量的菌丝体。这些菌丝体可作为各级菌种使用，充分缩短生活周期。液体培养基的缺陷是，其深层发酵工艺要求严格，成本投资大；同时生产的菌种菌龄较难控制，并且容易老化。液体培养基除用于菌种生产，还常常用于生理研究遗传测定等。（2）固体培养基 常见的固体培养基可以分为三类：一是将液体培养基加入凝固剂（如琼脂），制成常见的试管斜面或培养皿平板。这种培养基多用于 菌种的分离、纯化或扩大保存。琼脂的性能较稳定，96摄氏度融化，40摄氏度凝固，一旦凝固后需要再加温至96摄氏度才可以融化。多次加温或灭菌温度过高，其凝固性能会降低或破坏。琼脂的添加量应根据生产季节、培养基的酸碱度和菌种的用途等不同有所区别，一般加量为每1000克培养液中加1525克，在夏季或偏酸的培养液中，琼脂用量增加至25克；冬季或偏碱情况下加1520克；生产用菌种加15克，保藏菌种25克。另一类是利用天然纤维物质或固形物，如木屑、秸秆、棉籽壳、废棉、土壤、畜粪等，加入适量的辅助营养料和水配制而成的培养基，生产上 应用很广。再有就是段木培养基。把树木或木材制成1.21.5厘米长，1.52厘米粗的木段，或圆柱状、或锲状、或圆饼状拌入木屑、麸皮制成。接种时取木段种接入段木。（3）半固体培养基 在液体培养基中加入少量琼脂（0.2%0.5%）或一定量的玉米粉、麸皮等，使之成为半固体培养基。这类培养基配制后呈软膏状，目前在生产上很少使用。3、根据用途分类 根据用途将培养基质分为母种培养基，原种培养基、栽培种培养基三种类型。还有一些特殊用途的培养基，如：（1） 基础培养基 指含某一类微生物所需基本营养成分的培养基。（2） 加富培养基 是在培养基中加入动植物组织提取液，用以培养要求比较苛刻的某些异养微生物。（3） 选择性培养基 根据某一种或一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学条件的抗性而设计的培养基。它在食用菌中常用于菌种分离、纯化和菌种的生产中。例如，由于金霉素、链霉素等抗菌素对细菌有抑制作用而对食用菌生长发育无影响，将它们以一定浓度加入培养基中制成斜面或平板，这种选择性培养基能排除细菌的污染。（4） 鉴别培养基 指在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会出现某种变化，用以区别不同类型的微生物。鉴别培养基在食用菌摇瓶及振动培养和深层通气培养中常用于鉴别有无细菌污染。如在通气培养过程中，每隔一定时间取样，接入酚、红葡萄糖肉汤培养基斜面上，30摄氏度培养24小时后，若斜面培养基仍为红色说明无细菌污染；若培养基由红色变为黄色则说明已被细菌污染，应停止通气培养。4、 根据表面形状分类 （1） 斜面培养基 将灭菌琼脂培养液注入试管，放置成斜面凝固而成。这种培养基可以增大菌丝的扩展面，观察菌丝体的生长状态也十分方便。但是由于培养基浅薄，易失水，故不能长时间保存菌种。常用于菌种扩大转管及菌种保藏。（2） 平面培养基 将灭菌琼脂培养液倒入培养皿与三角烧瓶中凝固而成。用于菌种分离及生理生化特性的研究。（3） 高层培养基 又叫直管琼脂固体培养基。这种培养基不摆斜面，由于基质深厚，保持养分和水分的性能较好，虽然接入菌种后发育面小了一点，但培养基的厚度增大，营养丰富，时间长些也不容易干燥、开裂，适合菌种保藏使用。（二） 培养基的配制1、 母种培养基的配制 同一种菌类培养基的配方虽然有多种多样，但必须含有各种菌丝生长所需要的养分、水分和适宜的酸碱度。马铃薯、葡萄糖、琼脂作为各类母种的培养基最为普遍，菌丝都能耐正常生长。现将草菇栽培中常用的培养基配方和配制方法举例介绍。（1） PDA （马铃薯、蔗糖、琼脂）培养基 马铃薯200克，蔗糖15克，酵母膏0.2克，维生素B10.1克，琼脂20克，加水至1000毫升，PH7.27.4。（2） PDYA（马铃薯、葡萄糖、酵母粉、琼脂）培养基PDYA 培养基就是在PDA基础上，每1000毫升再加2克酵母粉。（3） 稻草汁培养基 稻草切碎200克，蔗糖20克，硫酸铵3克，琼脂1820克，PH调至7.5。（4） 米糠煮汁培养基 米糠50克。葡萄糖20克，磷酸二氢钾0.3克，磷酸氢二钾0.3克，硫酸镁0.2克，琼脂1820克，蒸馏水1000毫升。2、 原种和栽培种培养基的配制（1） 几种常见的配方 麦粒种、粪草种、稻草培养基、棉籽壳培养基、甘蔗渣培养基。（2） 装瓶和装袋 3液体菌种培养基的配制（三） 添加剂及其应用 添加剂是指在培养基中外加少量或微量对食用菌菌丝有促进生长、防病抑菌等作用或能诱导子实体分化的物质。1、 木材熏蒸物2、 防霉抑菌剂3、 稀土微肥4、 增痒剂5、 保湿剂四、 消毒与灭菌使用优质菌种是草菇栽培获得高产的保证，对优质菌种的基本要求之一就是无杂菌的纯培养菌种。纯培养菌丝体只有处于最佳的理化环境中，才可以从基质中得到充足的养分，从而得以健康地生长发育。依照所要达到的目的，杀菌可分为三个层次：1、灭菌；2、消毒；3、防腐。（一） 热力灭菌 利用高温来杀灭微生物的方法称为热力灭菌，它包括湿热灭菌和干热灭菌两种。1、湿热灭菌 蒸汽进入细胞内后受冷凝结成水，这一过程水释放的潜热使温度进一步提高，因而湿热灭菌在热力渗透方面比干热灭菌大得多，杀灭力也强得多。湿热灭菌包括：（1）高压蒸汽灭菌（2）常压灭菌（3）巴斯德灭菌法2、干热灭菌 包括灼烧和干热空气灭菌等不同方式。虽然干燥空气的渗透力不如湿热蒸汽强，但干热灭菌使用方便，特别适用于玻璃器皿、瓷器、接种针、接种钩和解剖刀等器械的灭菌。（1）火焰灭菌（2）干热空气灭菌（二）辐射灭菌 利用辐射所产生的能量进行灭菌的方法,称为辐射灭菌.它可分为电离辐射和非电离辐射。目前在草菇制种上常用的是紫外线灭菌。1、紫外线 紫外线灭菌广泛用于工农业和医疗卫生行业，在200300纳米范围内的紫外线具有杀菌作用，尤其是波长256266纳米的紫外线杀菌力最强。紫外线的杀菌作用是因为它可以被蛋白质和核酸吸收，造成蛋白质和核酸的变性失活。核酸中的胸腺嘧啶吸收紫外线后，可以形成二聚体，导致DNA合成和转录中遗传密码阅读错误，引起致死。紫外线的另一杀菌机制是因辐射空气产生臭氧，臭氧遇水又化合成双氧水，这两种物质都具有强烈的杀菌作用，可以引起细胞死亡而达到杀菌的作用。无菌室、接种箱、超净工作台内都应安装紫外线灯管，一般照射2030分钟，可杀死空气中的微生物。但紫外线穿透力很弱，一层普通玻璃或水均能滤去大量的紫外线，它也不能穿过衣物、纸张等大多数物体。因此，紫外线只适用于空气和物体表面的消毒。在使用时，以控制被照射的物品与紫外灯的距离保持在1米以内为标准。但是，经紫外线照射致死或损伤的微生物，通过自然光照又能复活，称为光复活作用。因此，经紫外线杀菌后不要立即开灯。如果在白天灭菌，无菌室、接种室需要用黑窗帘或黑布套遮光半小时，以防止光复活作用，提高灭菌效果。紫外线对人体有害，特别对眼睛有损伤，因此，不能在开启的紫外灯下工作。生产中使用的工作服、鞋也经常用紫外线来消毒。电离辐射 （三）过滤除菌 过滤除菌是利用机械阻留的原理把杂菌除去的一种方法，常用于一些不耐高温的物质如血清、维生素、氨基酸等的除菌。过滤除菌一般是由抽滤瓶和空气压缩机组成的抽滤装置来完成的，在食用菌生产过程中较少应用。（四）化学药剂灭菌 常用化学药剂大体可分为：表面活性剂、氧化剂、还原剂等，下面分别逐一介绍。1、表面活性剂 如酒精、来苏儿和新洁尔灭等。它们的作用是用降低细胞膜的表面张力，改变细胞膜的渗透性，通过使蛋白质变性而达到消毒杀菌的目的。使用这些药剂时，一定要注意只有在特定的浓度时才能达到最佳的消毒效果。2、氧化剂 如高锰酸钾、漂白粉等，是通过它们的强烈氧化作用来破坏微生物的原生质或酶的活性，来达到消毒杀菌的目的。高锰酸钾通常与甲醛一起使用，这时用来对接种间和培养室等进行混合熏蒸消毒。一般每立方米的空间需用40%甲醛8毫升，高锰酸钾5克气化熏蒸，熏蒸时要注意把门窗缝漏处糊起来。先把甲醛放在一个容器里，再加入高锰酸钾。漂白粉使用时应该先溶于水，然后对待消毒的物品或表面进行喷雾。3、还原剂 最常用的还原剂类消毒剂为福尔马林，福尔马林能与微生物细胞中的蛋白质的氨基结合，使蛋白质变性，从而达到消毒的目的。由于福尔马林具有强烈的刺激作用，过量吸入会使人感到不适，在使用时应注意安全。4、重金属盐类 0.1%0.5%硝酸银、升汞溶液是很好的表面消毒剂。进行食用菌菌种的组织分离时，常用0.1%升汞溶液进行表面消毒。5、酚类 常用的是苯酚，又称石炭酸。0.5%的石炭酸可用于皮肤消毒，2%5%的石炭酸可用于器皿消毒，5%的石炭酸用于空气喷雾消毒。来苏儿是甲酚与肥皂的混合剂，常用其3%5%消毒皮肤、用具、接种箱表面以及器皿。6、醇类 醇类可使细胞膜受到损伤，同时能使蛋白质变性，从而起到消毒杀菌的作用。（五）渗透压消毒 利用高渗透压杀菌或抑菌的方法，称为渗透压消毒。在高渗溶液中，由于发生质壁分离，使微生物不能进行正常新陈代谢而死亡。盐水罐头就是利用高渗透压盐溶液来杀菌和抑菌的。在浓度达40%左右的盐水中，一般微生物因渗透压过高将被杀死。（六）蒸汽臭氧灭菌 据测定，在相对湿度为98%，每立方米含臭氧浓度为5.67毫克时，就可以杀灭99.1%的枯草杆菌和黑色变种芽孢杆菌。（七）灭菌效果的检查 灭菌是草菇制种工作中十分重要的一环，若灭菌不彻底，有可能会造成整个制种的失败。因此，无论培养室、培养箱、培养基都必须经过检查，证实灭菌彻底后才能进行接种和培养。五、菌种的分离与培养（一）菌种的分离1、自然留种 从生长食用菌的基质，如菇木、粪草等物质上分离菌种的方法称为基物分离法。自然留种是基物分离法的一种，是千百年来一直在使用的一种古老的留种方法，可分为旧草种和菌盖留种两种。2、孢子分离法 草菇属于初级同宗结合的食用菌，即其自身可孕的子实体直接来自一个经减数分裂而形成的单核担孢子，因此可以采用单孢分离的方法来获得纯菌种。3、组织分离法 子实体是特殊分化的菌丝体，从其任何一部分组织中分割下一小块均可重新长出菌丝体，并进一步发展形成新的子实体。由于组织分离法长出的菌丝体能够很好地保持亲本的生物学特性，不易发生遗传变异，无论幼菇还是成熟菇体，只要是新鲜的，均能分离培养。这种方法简单易行，便于推广应用，是菌种生产经常采用的方法。（二）接种 将灭菌后的培养瓶（或塑料袋）放入接种室，同时将酒精灯、70%酒精、火柴和灭菌后的接种针、接种铲、镊子等接种用品准备齐全并置于接种室内。为了保证接种室内的无菌状态，可在接种前用少量甲醛加高锰酸钾对接种室进行熏蒸，同时打开紫外线灭菌灯照射30分钟。待接种室内甲醛和臭氧气味消散后，接种过人员先在缓冲间穿上经消毒灭菌的无菌工作服，并接受喷雾降尘消毒，再用70%的酒精消毒手掌后，才可进入接种室进行接种工作。（三）培养 菌种的培养就是要给其创造一个良好的生长环境，使其在最适宜的温度、湿度等条件下快速、健康的生长。（四）液体菌种的制备 液体菌种是用液体培养基培养而成的菌种。近年来，国内外正积极研究液体菌种的培养与利用。与固体菌种相比，液体菌种具有生产时间短，菌龄一致、菌丝生活力强、污染少和适宜于工厂化生产等优点，因而受到广泛的重视。目前我国已经能够进行深层发酵的食用菌有：香菇、平菇、鲍鱼菇等，应用最多的是香菇和平菇。但液体菌种生产的对技术水平要求较高，对设备的要求也比较高，实际应用过程中还有很多困难。下面对草菇液体菌种生产技术作一简单介绍。1、液体菌种的培养方法（1）摇瓶培养法 若少量生产，可以采用摇瓶培养法。这种方法投资较少，设备技术较为简单。（2）深层培养法 深层发酵需要一整套工业发酵设备，如锅炉、简易振荡机、高压消毒锅、空气清化装置、空压机、发酵罐和滤净器等。由于投资较大，适用于工厂化的大规模生产。2、草菇液体菌种的检验 液体菌种生产完成后要进行质量检验，包括感官检验和取样检验等。3、草菇液体菌种的使用 液体菌种可作原种使用，也可作栽培种使用。作原种使用时，可以取一支100毫升兽用注射器，将大号的针头截掉针尖，制成一个菌种接种器。使用前，洗净接种器并用纱布包好，经高压蒸汽